lacUV5

يُعدّ مُحفّز lacUV5 مُحفّزًا مُطفرًا من أوبيرون اللاكتوز في بكتيريا الإشريكية القولونية ، ويُستخدم في البيولوجيا الجزيئية لتوجيه التعبير الجيني على البلازميد . يُشبه lacUV5 مُحفّز اللاكتوز الكلاسيكي إلى حد كبير ، إذ يحتوي على طفرتين فقط في أزواج القواعد في منطقة الهيكسامر -10 ، مقارنةً بمُحفّز اللاكتوز . ^{[ 1 ]} يُعدّ lacUV5 من أكثر المُحفّزات استخدامًا في البيولوجيا الجزيئية لأنه لا يتطلب مُنشّطات إضافية ويُحفّز مستويات عالية من التعبير الجيني. ^{[ 2 ]}

يتوافق تسلسل محفز lacUV5 بشكل أوثق مع التسلسل المتفق عليه الذي تتعرف عليه عوامل سيجما البكتيرية مقارنةً بمحفز lac التقليدي . ^{[ 3 ] : 4ب.} ونتيجةً لذلك، يستقطب lacUV5 بوليميراز الحمض النووي الريبي بكفاءة أكبر، مما يؤدي إلى زيادة نسخ الجينات المستهدفة. بالإضافة إلى ذلك، وعلى عكس محفز lac ، يعمل lacUV5 بشكل مستقل عن البروتينات المنشطة أو العناصر التنظيمية الأخرى (باستثناء منطقتي المحفز -10 و-35). ^{[ 2 ]} في حين أنه لا يتطلب أي منشطات، يمكن تنظيم تعبير محفز lacUV5 بواسطة مثبط LacI ، ويمكن تحفيزه باستخدام IPTG ، وهو محفز فعال لتعبير البروتين عند استخدامه بتركيز يتراوح بين 100 ميكرومولار و1.5 ملي مولار. وبفضل هذه الآلية، يُستخدم محفز lacUV5 عادةً على بلازميدات التعبير، ويُستخدم عند الرغبة في الحصول على مستويات عالية من المنتج مع إمكانية التحكم بها.

تم تحديد طفرة lacUV5 لأول مرة عام 1970 في دراسة أجريت على طفرات محفز lac التي تنتج غلة أعلى. وقد فقدت بعض هذه الطفرات، بما في ذلك UV5، تثبيط الكاتابوليت في موقع CAP. ^{[ 4 ]} بدأ تطوير نواقل الاستنساخ منذ عام 1982، عندما تم ربط جينوم عاثية حاملة لـ UV5 تُعرف باسم "λ h80 lac UV5 cI857" باستخدام إنزيم التقييد HaeIII لإنتاج بلازميدات تحمل الجزء مع UV5. ^{[ 5 ]}

يُلاحظ وجود جين lacUV5 الحديث في سلالة BL21(DE3)، التي تحمل كلاً من أوبيرون lac مع المحفز القياسي وأوبيرون lacUV5 مُقسّم بواسطة طليعة العاثية DE3 (مما يؤدي بالتالي إلى تنشيط بوليميراز الحمض النووي الريبي T7 بدلاً من ذلك). ^{[ 1 ]} الطفرتان المهمتان مُسطّرتان.

lacUV5 TCACTCATTAGGCACCCCAGGC TTTACA CTTTATGCTTCCGGCTCG TAT AA T GTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCT [ 6 ] LacZ TCACTCATTAGGCACCCCAGGC TTTACA CTTTATGCTTCCGGCTCG TAT GT T GTGTGAAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCT [ 7 ] الموضع ^-35 ^-10 ^+1