مقاومة الأحماض

مقاومة الأحماض هي خاصية فيزيائية لبعض أنواع البكتيريا ، والبروتوزوا ، والخلايا حقيقية النواة ، بالإضافة إلى بعض التراكيب الخلوية ، وتشير إلى مقاومتها لإزالة اللون بواسطة الأحماض أثناء إجراءات التلوين المختبرية. ^{[ 1 ] [ 2 ]} بمجرد تلوينها كجزء من عينة، تستطيع هذه الكائنات مقاومة إجراءات إزالة اللون القائمة على الأحماض و/أو الإيثانول الشائعة في العديد من بروتوكولات التلوين، ومن هنا جاء اسم مقاومة الأحماض . ^{[ 2 ]}

تاريخيًا، كان يُعتقد أن الأصباغ المقاومة للأحماض تُلوّن دهون الخلايا بناءً على الخصائص الملحوظة لتلوين الخلايا في ظل ظروف متنوعة، ^{[ 3 ] [ 4 ]} على الرغم من أن النتائج كانت محدودة بالأدوات المتاحة، إلا أنه في وقت مبكر من عام 1959، لوحظت مقاومة الأحماض النووية للأحماض. ^{[ 5 ]} تخترق أصباغ مثل كاربول فوكسين وأورامين O الخلية وترتبط بالحمض النووي DNA والحمض النووي RNA، منتجةً تألقًا أحمر أو أصفر مخضر مميزًا، على التوالي. وبالتالي، تعكس خاصية "مقاومة الأحماض" قدرة الكائن الحي على الاحتفاظ بهذه الأصباغ بعد إزالة اللون بواسطة الأحماض والكحول، وهي سمة تحددها بشكل أساسي سلامة وتكوين جدار الخلية الخارجي وليس أي كيمياء دهنية محددة. ^{[ 6 ]}

تختلف آليات مقاومة الأحماض باختلاف الأنواع. ففي جنس المتفطرة ، تُعزى هذه الخاصية تقليديًا إلى المحتوى العالي من حمض الميكوليك في جدار الخلية ، والذي يُسهم بالفعل في الاحتفاظ بالصبغة ومقاومة زوال اللون. ومع ذلك، تفتقر العديد من الكائنات الحية الأخرى المقاومة للأحماض - مثل الكوكسيديا المعوية والديدان الطفيلية من جنس البلهارسيا - إلى أحماض الميكوليك، ومع ذلك تُظهر مقاومة مماثلة للأحماض، مما يشير إلى أن تراكيب أخرى لجدار الخلية، مثل جدران الأكياس أو قشور البيض، قد توفر مقاومة مماثلة لزوال اللون. ^{[ 6 ]}

تدعم أدلةٌ نسيجية مرضية إضافية هذه الآلية الأوسع نطاقًا: ففي مقاطع الأنسجة، تنخفض شدة التلوين بشكل ملحوظ عند تلف جدران الخلايا البكتيرية أو عند استخدام إزالة البارافين القائمة على الزيلين أثناء معالجة العينات. وقد ثبت أن طريقة خالية من الزيلين تعتمد على الحرارة تحافظ على سلامة جدار الخلية وتحسن بشكل كبير من اكتشاف المتفطرات والكائنات الحية الأخرى المقاومة للأحماض، لا سيما عند استخدام تلوين الأورامين O الفلوري. ^{[ 7 ]}

يصعب تحديد خصائص الكائنات المقاومة للأحماض باستخدام التقنيات الميكروبيولوجية القياسية، على الرغم من إمكانية تلوينها باستخدام أصباغ مركزة، خاصةً عند دمج عملية التلوين مع الحرارة. بعضها، مثل المتفطرات ، يمكن تلوينه بصبغة غرام ، لكنها لا تتفاعل جيدًا مع البنفسجي البلوري، وبالتالي تظهر بلون أرجواني فاتح، مما قد يؤدي إلى تشخيص خاطئ على أنها سالبة غرام. ^{[ 8 ]}

تُعدّ صبغة زيل-نيلسن أكثر تقنيات التلوين شيوعًا لتحديد البكتيريا المقاومة للأحماض ، حيث تظهر هذه الأنواع باللون الأحمر الزاهي على خلفية زرقاء. وهناك طريقة أخرى هي طريقة كينيون ، حيث تظهر البكتيريا باللون الأحمر على خلفية خضراء. وقد حلّت تقنية المجهر الفلوري باستخدام الأورامين O - وهو فلوروكروم يرتبط بالأحماض النووية - محلّ هذه التقنيات إلى حد كبير في المختبرات السريرية نظرًا لحساسيتها العالية وسرعتها وأمانها. أما الرودامين، الذي يُضاف أحيانًا كصبغة ثانوية، فلا يُساهم كثيرًا في الحساسية، ولكنه يُحسّن التباين بشكل طفيف. ^{[ 9 ] [ 6 ] [ 7 ]}

• صبغة زيل-نيلسن (أنواع التبييض الكلاسيكية والمعدلة) ^{[ 10 ]}
• صبغة كينيون ، وهي عملية تطوير لصبغة زيل-نيلسن لا تتطلب تسخيناً؛ المتغيرات:
  • الأصباغ البديلة ( أزرق فيكتوريا بدلاً من الفوشين، وحمض البيكريك بدلاً من أزرق الميثيلين )، وهو أمر مفيد للأشخاص المصابين بعمى الألوان والمواد التي لا توفر فيها أصباغ ZN/Kinyoun الكلاسيكية وضوحًا كافيًا. ^{[ 11 ]}
  • طريقة مولر
  • طريقة دورنر ^{[ 12 ]} (مزيل اللون الكحولي الحمضي) بدون تعديل شايفر-فولتون ^{[ 13 ]} (إزالة اللون بالماء) ^{[ 14 ]}
  • طريقة التنظيف، باستخدام Tergitol 7، مواد خافضة للتوتر السطحي من نوع بولي جلايكول إيثر غير أيوني من النوع NP-7 لإزالة اللون ^{[ 15 ]}
• بقعة فايت ^{[ 16 ]}
  • صبغة فيت فاراكو ^{[ 17 ] [ 18 ]}
  • بقعة ويد فايت ^{[ 19 ]}
• صبغة إليس وزابروورني ^{[ 20 ] [ 21 ]} (بدون فينول/حمض الكربوليك)
• صبغة الأورامين-رودامين
• صبغة الأورامين الفينولية

عدد قليل جدًا من التراكيب مقاومة للأحماض؛ وهذا ما يجعل التلوين للكشف عن مقاومة الأحماض مفيدًا للغاية في التشخيص. فيما يلي أمثلة بارزة على التراكيب المقاومة للأحماض أو المقاومة للأحماض المعدلة:

• جميع أنواع المتفطرات – المتفطرة السلية ، والمتفطرة الجذامية ، والمتفطرة السمغماتية ، والمتفطرات غير النمطية .
• تحتوي بعض أنواع الأكتينوبكتيريا (وخاصةً الهوائية منها من رتبة المتفطرات ) على حمض الميكوليك في جدارها الخلوي؛ ويجب عدم الخلط بينها وبين الأكتينوميسيس ، وهو جنس من الأكتينوبكتيريا غير المقاومة للأحماض . تجدر الإشارة إلى أن الستربتوميسيس لا تحتوي على حمض الميكوليك.
  • النوكارديا (مقاومة ضعيفة للأحماض؛ تقاوم إزالة اللون بتركيزات حمضية أضعف)
  • رودوكوكوس
  • جوردونيا
  • تسوكاموريلا
  • ديتزيا
• رأس الحيوان المنوي
• الأبواغ البكتيرية، انظر الأبواغ الداخلية
• Legionella micdadei
• بعض المكونات الخلوية، على سبيل المثال
  • أجسام تضمينية سيتوبلازمية تُرى في
    • الخلايا العصبية في الطبقة 5 من القشرة المخية داء ليبوفوسين السيروئيدي العصبي ( مرض باتن ).
  • أجسام نووية مضمنة شوهدت في
    • التسمم بالرصاص
    • التسمم بالبزموت.
• أكياس بيض بعض الطفيليات الكوكسيدية في البراز، مثل:
  • كريبتوسبوريديوم بارفوم , ^{[ 22 ]}
  • Isospora belli ^{[ 23 ]}
  • Cyclospora cayetanensis . ^{[ 24 ]}
• بعض الطفيليات الأخرى:
  • الساركوسيستيس
  • بيض الدودة الشريطية البقرية (Taenia saginata) يتصبغ جيداً، بينما بيض الدودة الشريطية الخنزيرية (Taenia solium) لا يتصبغ (يمكن استخدامهما للتمييز بينهما).
  • تتلون الأكياس المائية ، وخاصة " خطافاتها "، بشكل غير منتظم بصبغة زيل-نيلسن، لكنها تُصدر تألقًا أحمر ساطعًا تحت الضوء الأخضر، ويمكن أن تساعد في الكشف عنها في الخلفيات ذات الكثافة المتوسطة أو مع وجود عدد قليل من الخطافات. ^{[ 25 ]}
• تُظهر الأشكال الخميرية الفطرية تباينًا في التلوين بصبغة مقاومة الأحماض، والتي تُعتبر صبغة ذات نطاق ضيق للفطريات. ^{[ 26 ]} في دراسة حول مقاومة الفطريات للأحماض، ^{[ 27 ]} أظهر 60% من فطر البلاستوميسيس و47% من فطر الهيستوبلازما تلوينًا سيتوبلازميًا إيجابيًا للخلايا الشبيهة بالخميرة، بينما لم يتلون فطر الكريبتوكوكس أو الكانديدا، ولوحظ تلوين نادر جدًا في الأبواغ الداخلية لفطر الكوكسيديويدس.