استخلاص الحمض النووي

📅 آخر تحديث: ٢٩ يوليو ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٢٩ يوليو ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 1 صور
الموسوعة الحرة

تم عزل الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) لأول مرة عام 1869 على يد فريدريك ميشر . [ 1 ] استخلاص الحمض النووي هو عملية عزل الحمض النووي من خلايا الكائن الحي المعزولة من عينة، عادةً ما تكون عينة بيولوجية مثل الدم أو اللعاب أو الأنسجة. تتضمن هذه العملية فتح الخلايا، وإزالة البروتينات والملوثات الأخرى، وتنقية الحمض النووي ليكون خاليًا من المكونات الخلوية الأخرى. يمكن بعد ذلك استخدام الحمض النووي المنقى في تطبيقات لاحقة مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR )، [ 2 ] والتسلسل ، أو الاستنساخ . حاليًا، تُعد هذه العملية إجراءً روتينيًا في البيولوجيا الجزيئية والتحليلات الجنائية .

يمكن إجراء هذه العملية بعدة طرق، تبعًا لنوع العينة والتطبيق اللاحق، [ 3 ] ومن أكثر الطرق شيوعًا: التحلل الميكانيكي والكيميائي والإنزيمي، والترسيب، والتنقية، والتركيز. وتشمل الطرق المحددة المستخدمة لاستخلاص الحمض النووي: الاستخلاص بالفينول والكلوروفورم، والترسيب بالكحول، أو التنقية باستخدام السيليكا. [ 4 ]

في الطريقة الكيميائية، تُستخدم العديد من مجموعات الاستخلاص المختلفة، واختيار المجموعة المناسبة يوفر الوقت في تحسين المجموعة وإجراءات الاستخلاص. ويُعتبر الكشف عن حساسية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) مؤشرًا على التباين بين المجموعات التجارية. [ 5 ]

توجد العديد من الطرق المختلفة لاستخراج الحمض النووي، ولكن بعض الخطوات الشائعة تشمل ما يلي:

  1. التحلل: تتضمن هذه الخطوة تمزيق الخلايا لتحرير الحمض النووي. على سبيل المثال، في حالة الخلايا البكتيرية، يمكن استخدام محلول من المنظفات والملح (مثل SDS ) لكسر غشاء الخلية وتحرير الحمض النووي. أما بالنسبة للخلايا النباتية والحيوانية، فغالباً ما تُستخدم طرق ميكانيكية أو إنزيمية.
  2. الترسيب: بمجرد تحرير الحمض النووي، يجب إزالة البروتينات والملوثات الأخرى. ويتم ذلك عادةً بإضافة عامل مُرسب، مثل الكحول (كالإيثانول أو الإيزوبروبانول)، أو الملح (مثل أسيتات الأمونيوم ). سيشكل الحمض النووي راسبًا في قاع المحلول، بينما تبقى الملوثات في السائل.
  3. التنقية: بعد ترسيب الحمض النووي، يُنقى عادةً باستخدام طرق تعتمد على الأعمدة. على سبيل المثال، يمكن استخدام أعمدة الطرد المركزي المصنوعة من السيليكا لربط الحمض النووي، بينما تُغسل الشوائب. بدلاً من ذلك، يمكن استخدام الطرد المركزي لتنقية الحمض النووي عن طريق تدويره إلى قاع الأنبوب.
  4. التركيز: في النهاية، عادةً ما يتم زيادة كمية الحمض النووي الموجودة عن طريق إزالة أي سائل متبقٍ. ويتم ذلك عادةً باستخدام جهاز طرد مركزي بالتفريغ أو عملية التجفيف بالتجميد .

قد تُستخدم بعض الاختلافات في هذه الخطوات تبعًا لبروتوكول استخلاص الحمض النووي المحدد. بالإضافة إلى ذلك، تتوفر بعض المجموعات التجارية التي تتضمن كواشف وبروتوكولات مصممة خصيصًا لنوع معين من العينات. [ 6 ]

ما الذي يقدمه؟

يُعد استخلاص الحمض النووي خطوةً تمهيديةً شائعةً في العديد من الإجراءات التشخيصية المستخدمة لتحديد الفيروسات والبكتيريا البيئية وتشخيص الأمراض والأمراض الوراثية. وتشمل هذه الطرق، على سبيل المثال لا الحصر:

طُوِّرت تقنية التهجين الموضعي الفلوري (FISH) في ثمانينيات القرن العشرين. وتتلخص فكرتها الأساسية في استخدام مسبار من الحمض النووي لتهجين الحمض النووي النووي من خلايا في الطور البيني أو كروموسومات في الطور الاستوائي مُلصقة بشريحة مجهرية. وهي طريقة جزيئية تُستخدم، من بين أمور أخرى، للتعرف على مجموعات بكتيرية معينة وحصرها. [ 1 ]

للتعرف على الأنماط الجغرافية والزمانية في مجتمعات البكتيريا البحرية وتحديدها وقياسها كمياً، يستخدم الباحثون تقنية تسمى تعدد أشكال طول قطع التقييد الطرفية (T-RFLP).

التسلسل: تم استخدام الجينومات الكاملة أو الجزئية والمكونات الكروموسومية الأخرى، وذلك للمقارنة مع التسلسلات المنشورة سابقًا. [ 7 ]

الإجراء الأساسي

يمكن إزالة البروتينات الخلوية والهيستون المرتبطة بالحمض النووي إما عن طريق إضافة بروتياز أو عن طريق ترسيب البروتينات باستخدام أسيتات الصوديوم أو أسيتات الأمونيوم أو استخلاصها بمزيج من الفينول والكلوروفورم قبل ترسيب الحمض النووي.

بعد العزل، يتم إذابة الحمض النووي في محلول منظم قلوي قليلاً، عادةً في محلول منظم TE ، أو في ماء فائق النقاء .

المواد الكيميائية الشائعة

تشمل أكثر المواد الكيميائية شيوعاً المستخدمة في استخلاص الحمض النووي ما يلي:

  1. المنظفات، مثل SDS أو Tween-20، والتي تستخدم لكسر الخلايا وإطلاق الحمض النووي.
  2. إنزيمات البروتياز، مثل بروتينيز ك، والتي تستخدم لهضم البروتينات التي قد ترتبط بالحمض النووي.
  3. الفينول والكلوروفورم، اللذان يستخدمان لفصل الحمض النووي عن المكونات الخلوية الأخرى.
  4. الإيثانول أو الأيزوبروبانول، والتي تستخدم لترسيب الحمض النووي.
  5. الملح، مثل كلوريد الصوديوم، والذي يستخدم غالبًا للمساعدة في إذابة الحمض النووي والحفاظ على استقراره.
  6. EDTA، الذي يعطل الإنزيمات مثل النيوكليازات عن طريق استخلاب (ربط) أيونات المعادن اللازمة كعوامل مساعدة.
  7. يُستخدم محلول Tris-HCl للحفاظ على درجة الحموضة في الظروف المثلى لاستخلاص الحمض النووي.

اختيار الطريقة

تشمل بعض أكثر طرق استخلاص الحمض النووي شيوعًا الاستخلاص العضوي ، واستخلاص Chelex ، والاستخلاص بالطور الصلب . [ 8 ] [ 9 ] تُنتج هذه الطرق باستمرار حمضًا نوويًا معزولًا، لكنها تختلف في كلٍّ من جودة وكمية الحمض النووي المُستخلص. عند اختيار طريقة استخلاص الحمض النووي، هناك عوامل متعددة يجب مراعاتها، بما في ذلك التكلفة والوقت والسلامة وخطر التلوث.

تتضمن عملية الاستخلاص العضوي إضافة مراحل حضانة في محاليل كيميائية متعددة؛ [ 9 ] بما في ذلك خطوة التحلل ، والاستخلاص بالفينول والكلوروفورم، والترسيب بالإيثانول ، وخطوات الغسل. يُستخدم الاستخلاص العضوي بكثرة في المختبرات لانخفاض تكلفته، ولأنه يُنتج كميات كبيرة من الحمض النووي النقي. ورغم سهولته، إلا أنه يتضمن خطوات عديدة، ويستغرق وقتًا أطول من الطرق الأخرى. كما أنه ينطوي على استخدام مواد كيميائية سامة كالفينول والكلوروفورم ، ويزيد من خطر التلوث نتيجة نقل الحمض النووي بين أنابيب متعددة. [ 10 ] وقد طُوّرت عدة بروتوكولات فعّالة للاستخلاص العضوي للحمض النووي منذ عقود، [ 11 ] كما طُوّرت ونُشرت نسخ مُحسّنة وأكثر عملية من هذه البروتوكولات في السنوات الأخيرة. [ 12 ]

تتضمن طريقة استخلاص Chelex إضافة راتنج Chelex إلى العينة، ثم غلي المحلول، ثم خلطه باستخدام جهاز الخلط الدوامي، ثم طرده مركزيًا. ترتبط المواد الخلوية بخرز Chelex، بينما يبقى الحمض النووي DNA في الراشح . [ 10 ] تُعدّ طريقة Chelex أسرع وأبسط بكثير من الاستخلاص العضوي، ولا تتطلب سوى أنبوب واحد، مما يقلل من خطر تلوث الحمض النووي DNA. مع ذلك، لا يُنتج استخلاص Chelex كمية كبيرة من الحمض النووي DNA، ويكون الحمض النووي الناتج أحادي السلسلة، مما يعني أنه لا يُمكن استخدامه إلا في التحليلات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وليس في تحليل تعدد أطوال قطع التقييد (RFLP) . [ 10 ]

تستغل عملية الاستخلاص في الطور الصلب، كاستخدام طريقة الاستخلاص القائمة على عمود الدوران، خاصية ارتباط الحمض النووي (DNA) بالسيليكا . تُضاف العينة الحاوية على الحمض النووي إلى عمود يحتوي على هلام السيليكا أو حبيبات السيليكا وأملاح فوضوية . تعمل هذه الأملاح على تعطيل الروابط الهيدروجينية بين سلاسل الحمض النووي، مما يُسهّل ارتباطه بالسيليكا بجعل الأحماض النووية كارهة للماء. هذا يُعرّض بقايا الفوسفات، فتصبح متاحة للامتصاص. [ 13 ] يرتبط الحمض النووي بالسيليكا، بينما يُغسل باقي المحلول باستخدام الإيثانول لإزالة الأملاح الفوضوية والمكونات الأخرى غير الضرورية. [ 9 ] بعد ذلك، يُمكن إعادة ترطيب الحمض النووي بمحاليل مائية منخفضة الملوحة، مما يسمح بفصله عن الحبيبات.

تُنتج هذه الطريقة حمضًا نوويًا عالي الجودة، ثنائي السلسلة في الغالب، يُمكن استخدامه في كلٍ من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وتحليل تعدد أطوال قطع التقييد (RFLP) . يُمكن أتمتة هذه العملية [ 10 ] وتتميز بإنتاجية عالية، وإن كانت أقل من طريقة الفينول-الكلوروفورم . هذه طريقة أحادية الخطوة، أي أن العملية بأكملها تُنجز في أنبوب واحد. هذا يُقلل من خطر التلوث، مما يجعلها مفيدة جدًا لاستخلاص الحمض النووي في الطب الشرعي. تُصنّع وتُسوّق العديد من مجموعات الاستخلاص التجارية ذات الطور الصلب من قِبل شركات مختلفة؛ المشكلة الوحيدة هي أنها أغلى ثمنًا من الاستخلاص العضوي أو استخلاص شيليكس.

أنواع خاصة

يجب اختيار تقنيات محددة لعزل الحمض النووي من بعض العينات. ومن الأمثلة على العينات التي تتطلب عزلًا معقدًا للحمض النووي ما يلي:

  • العينات الأثرية التي تحتوي على حمض نووي متحلل جزئيًا، انظر الحمض النووي القديم [ 14 ]
  • عينات تحتوي على مثبطات لإجراءات التحليل اللاحقة، وأبرزها مثبطات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ، مثل حمض الهيوميك من التربة، والنيلي وأصباغ الأقمشة الأخرى، أو الهيموجلوبين في الدم.
  • عينات من الكائنات الحية الدقيقة ذات الجدران الخلوية السميكة، على سبيل المثال، الخميرة
  • عينات تحتوي على حمض نووي مختلط من مصادر متعددة

من السهل عمومًا عزل الحمض النووي خارج الكروموسوم، وخاصة البلازميدات التي يمكن عزلها بسهولة عن طريق تحلل الخلايا متبوعًا بترسيب البروتينات، مما يحبس الحمض النووي الكروموسومي في الجزء غير القابل للذوبان، وبعد الطرد المركزي، يمكن تنقية الحمض النووي البلازميدي من الجزء القابل للذوبان.

استخلاص الحمض النووي بتقنية هيرت هو عملية عزل لجميع أنواع الحمض النووي خارج الكروموسومات في خلايا الثدييات. تتخلص هذه التقنية من الحمض النووي النووي ذي الوزن الجزيئي العالي ، تاركةً فقط الحمض النووي للميتوكوندريا ذي الوزن الجزيئي المنخفض وأي جزيئات فيروسية خارج الكروموسومات موجودة في الخلية.

الكشف عن الحمض النووي

يُستخدم مؤشر ثنائي فينيل أمين (DPA) لتأكيد وجود الحمض النووي DNA. تتضمن هذه العملية التحلل الكيميائي للحمض النووي DNA: عند تسخينه (مثلاً ≥95  درجة مئوية) في وسط حمضي، يتطلب التفاعل وجود سكر ديوكسي ريبوز، وبالتالي فهو خاص بالحمض النووي DNA. في ظل هذه الظروف، يتحول 2-ديوكسي ريبوز إلى β-هيدروكسي ليفولينيل ألدهيد، الذي يتفاعل مع مركب ثنائي فينيل أمين لإنتاج مركب أزرق اللون. يمكن تحديد تركيز الحمض النووي DNA بقياس شدة امتصاص المحلول عند 600  نانومتر باستخدام مطياف ضوئي ومقارنته بمنحنى معياري لتركيزات معروفة من الحمض النووي DNA.

يُستخدم قياس شدة امتصاص محلول الحمض النووي عند أطوال موجية 260 نانومتر و280 نانومتر كمقياس لنقاء الحمض النووي. ويمكن تحديد كمية الحمض النووي عن طريق تقطيعه باستخدام إنزيم تقييد ، ثم فصله على هلام الأغاروز ، وتلوينه ببروميد الإيثيديوم (EtBr) أو صبغة أخرى، ومقارنة شدة امتصاصه مع علامة حمض نووي ذات تركيز معروف.

باستخدام تقنية ساوثرن بلوت ، يمكن عزل الحمض النووي المُقاس كميًا وفحصه بشكل أعمق باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وتحليل تعدد أطوال قطع التقييد (RFLP) . تسمح هذه الإجراءات بالتمييز بين التسلسلات المتكررة داخل الجينوم. هذه هي التقنيات التي يستخدمها علماء الطب الشرعي للمقارنة والتعرف والتحليل.

طريقة استخلاص الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي

في هذه الطريقة، تُعزل نوى الخلايا النباتية عن طريق طحن الأنسجة ميكانيكيًا وإعادة تكوين النوى السليمة في محلول عزل نووي خاص (NIB). تُحرر الحموض النووية البلاستيدية من العضيات وتُزال باستخدام محلول أسموزي عن طريق الغسل والطرد المركزي. ثم تُحلل النوى المنقاة وتُنظف بشكل إضافي عن طريق الاستخلاص العضوي، ويُرسب الحمض النووي الجينومي بتركيز عالٍ من CTAB. يُستخلص الحمض النووي الجينومي عالي النقاء وذو الوزن الجزيئي العالي من النوى، ويُذاب في محلول ذي درجة حموضة عالية، مما يسمح بتخزينه بشكل مستقر طويل الأمد. [ 15 ]

تخزين الحمض النووي

يُعد تخزين الحمض النووي جانبًا مهمًا من مشاريع استخلاص الحمض النووي، حيث يضمن سلامة واستقرار الحمض النووي المستخلص للتطبيقات اللاحقة. [ 16 ]

إحدى الطرق الشائعة لتخزين الحمض النووي هي الترسيب بالإيثانول، حيث يُضاف الإيثانول وملح، مثل كلوريد الصوديوم أو أسيتات البوتاسيوم، إلى الحمض النووي المستخلص لترسيبه من المحلول. ثم يُفصل الحمض النووي بالطرد المركزي ويُغسل بالإيثانول بتركيز 70% لإزالة أي شوائب متبقية. بعد ذلك، يُجفف الحمض النووي في الهواء ويُعاد تعليقه في محلول منظم، مثل محلول Tris-EDTA (TE)، للتخزين.

هناك طريقة أخرى تتمثل في تجميد الحمض النووي في محلول منظم مثل محلول TE، أو في مادة حافظة من التجمد مثل الجلسرين أو ثنائي ميثيل سلفوكسيد، عند درجة حرارة -20 أو -80 درجة مئوية. تحافظ هذه الطريقة على سلامة الحمض النووي وتبطئ نشاط أي إنزيمات قد تُحلله.

من المهم ملاحظة أن اختيار محلول التخزين وظروفه يعتمد على التطبيق اللاحق الذي سيُستخدم فيه الحمض النووي. على سبيل المثال، إذا كان الحمض النووي سيُستخدم في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، فيمكن تخزينه في محلول TE عند درجة حرارة 4 درجات مئوية، بينما إذا كان سيُستخدم للتخزين طويل الأمد أو الشحن، فيمكن تخزينه في الإيثانول عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. يجب فحص الحمض النووي المستخلص بانتظام للتأكد من جودته وسلامته، وذلك بإجراء مثل الفصل الكهربائي الهلامي أو قياس الطيف الضوئي. كما يجب تدوين ظروف التخزين والتحكم بها، مثل درجة الحرارة والرطوبة.

من المهم أيضاً مراعاة استقرار الحمض النووي على المدى الطويل واحتمالية تحلله بمرور الوقت. ينبغي تخزين الحمض النووي المستخلص لأقصر فترة ممكنة، ويجب اختيار ظروف التخزين لتقليل خطر التحلل.

بشكل عام، يجب تخزين الحمض النووي المستخلص في أفضل الظروف الممكنة لضمان استقراره وسلامته للتطبيقات اللاحقة.

ضبط الجودة

هناك العديد من تقنيات مراقبة الجودة المستخدمة لضمان جودة الحمض النووي المستخلص، بما في ذلك: [ 17 ]

  • قياس الطيف الضوئي : هي طريقة شائعة الاستخدام لقياس تركيز ونقاء عينة الحمض النووي. يقيس قياس الطيف الضوئي امتصاص العينة عند أطوال موجية مختلفة، عادةً عند 260  نانومتر و280  نانومتر. تُستخدم نسبة الامتصاص عند 260  نانومتر إلى الامتصاص عند 280  نانومتر لتحديد نقاء عينة الحمض النووي. [ 18 ]
  • الفصل الكهربائي الهلامي: تُستخدم هذه التقنية لتصوير ومقارنة حجم وسلامة عينات الحمض النووي. يُحمّل الحمض النووي على هلام الأغاروز ثم يُعرّض لمجال كهربائي، مما يؤدي إلى هجرته عبر الهلام. يمكن تصوير هجرة الحمض النووي باستخدام بروميد الإيثيديوم، الذي يتخلل الحمض النووي ويتألق تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية. [ 19 ]
  • قياس التألق: هو أسلوب لتحديد تركيز الأحماض النووية عن طريق قياس تألق العينة عند إثارتها بطول موجي محدد من الضوء. يستخدم هذا الأسلوب أصباغًا ترتبط تحديدًا بالأحماض النووية وتتميز بشدة تألق عالية.
  • تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR): هو تقنية تعمل على تضخيم منطقة معينة من الحمض النووي، كما أنها تستخدم كطريقة لمراقبة الجودة عن طريق تضخيم جزء صغير من الحمض النووي، وإذا نجح التضخيم، فهذا يعني أن الحمض النووي المستخلص ذو جودة جيدة ولم يتدهور.
  • مقياس التألق الكمي: مقياس التألق الكمي هو جهاز يستخدم أصباغًا فلورية لقياس تركيز الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبي RNA في العينة. وهي طريقة سريعة وحساسة يمكن استخدامها لتحديد تركيز عينات الحمض النووي DNA. [ 17 ]
  • جهاز التحليل الحيوي: هو جهاز يستخدم الرحلان الكهربائي لفصل وتحليل عينات الحمض النووي (DNA) والحمض النووي الريبوزي (RNA) والبروتين. يوفر معلومات تفصيلية حول حجم عينة الحمض النووي وسلامتها ونقائها.

انظر أيضاً

مراجع

  1. 1 2 "التهجين الموضعي الفلوري (FISH)" . Genome.gov . تم الاسترجاع في 23-10-2022 .
  2. ↑ غوبتا، ناليني (2019). " استخلاص الحمض النووي وتفاعل البوليميراز المتسلسل" . مجلة علم الخلايا . 36 (2): 116-117 . doi : 10.4103/JOC.JOC_110_18 . PMC 6425773. PMID 30992648 .  
  3. ^ سريفاستافا، أخيليشوار كومار؛ كانوجيا، فينود كومار؛ سينغ، راجيش كومار؛ سينغ، ديفيا، محرران. (2021). التنوع التطوري كمصدر للجزيئات المضادة للسرطان . دوى : 10.1016/C2019-0-03285-2 . رقم ISBN 978-0-12-821710-8.
  4. ^ ديهاسك، ماريان. بيتشنيروفا، باتريشيا؛ كيمبي لاغرهولم، فينديلا؛ إرسمارك، إريك؛ دانيلوف، جليب ك.؛ مورتنسن، بيتر. فارتانيان، سيرجي؛ دالين، حب (13 أبريل 2022). "تطوير وتحسين بروتوكول الاستخراج القائم على عمود السيليكا للحمض النووي القديم" . الجينات . 13 (4): 687. دوى : 10.3390 / الجينات 13040687 . بمك 9032354 . بميد 35456493 .  
  5. ↑ يوشيكاوا هـ، دوغرومان-آل ف، دوغرومان-آي ف، تورك س، كوستيمور س، بالابان ن، سلطان ن (أكتوبر 2011). "تقييم مجموعات استخلاص الحمض النووي للتشخيص الجزيئي لأنواع فرعية من طفيلي البلاستوسيستيس البشري من عينات البراز". بحوث علم الطفيليات . 109 (4): 1045-1050 . doi : 10.1007/s00436-011-2342-3 . PMID 21499752. S2CID 37191780 .  
  6. ↑ فاهل، غاري أ.؛ فيشر، ستيفن هـ. (أكتوبر 2000). "مقارنة ست مجموعات تجارية لاستخلاص الحمض النووي لاستعادة الحمض النووي لفيروس مضخم الخلايا من عينات بشرية ملوثة" . مجلة علم الأحياء الدقيقة السريرية . 38 (10): 3860-3863 . doi : 10.1128/JCM.38.10.3860-3863.2000 . PMC 87494. PMID 11015421 .  
  7. ↑ رايس، جورج (2006-12-08). "استخلاص الحمض النووي" . مركز موارد تعليم العلوم في كلية كارلتون . تم الاسترجاع في 2022-10-09 .
  8. ↑ رانا، أجاي ك. (أغسطس 2025). "العينات البيولوجية الصعبة واستراتيجيات استخلاص الحمض النووي". مجلة الطب الاستقصائي . 73 (6): 443-459 . doi : 10.1177/10815589251327503 . PMID 40033560 . 
  9. 1 2 3 إلكينز، كيلي م. (2013). "استخلاص الحمض النووي". علم الأحياء الجنائي للحمض النووي . ص 39-52 . doi : 10.1016/B978-0-12-394585-3.00004-3 . ISBN  978-0-12-394585-3.
  10. 1 2 3 4 بتلر، جون م. (2005). تحديد النمط الجيني للحمض النووي في الطب الشرعي: بيولوجيا وتكنولوجيا وجينات علامات STR ( الطبعة الثانية). أمستردام: دار النشر الأكاديمية إلسيفير. ISBN  978-0-08-047061-0. OCLC 123448124 . 
  11. ↑ مارمور، ج. (1961). "إجراء لعزل الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين من الكائنات الدقيقة". مجلة البيولوجيا الجزيئية . 3 (2): 208–IN1. doi : 10.1016/S0022-2836(61)80047-8 .
  12. ↑ سالفا سيرا، فرانسيسكو؛ سالفا-سيرا، فرانسيسكو؛ سفينسون-ستادلر، ليسيلوت؛ بوسكيتس، أنطونيو؛ خاين-لوتشورو، دانيال؛ كارلسون، روجر؛ آر بي مور، إدوارد؛ غوميلا، مارغريتا (9 أغسطس 2018). "بروتوكول لاستخلاص وتنقية الحمض النووي البكتيري عالي الجودة والكمية، قابل للتطبيق في تسلسل الجينوم: نسخة معدلة من إجراء مارمور" . تبادل البروتوكولات . doi : 10.1038/protex.2018.084 .
  13. ↑ لي، ريتشارد (2025). علم الأحياء الجنائي . doi : 10.4324/9781003562726 . ISBN 978-1-003-56272-6.
  14. ↑ بابو، س. (مارس 1989). "الحمض النووي القديم: الاستخلاص، والتمييز، والاستنساخ الجزيئي، والتضخيم الإنزيمي" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 86 (6): 1939-1943 . Bibcode : 1989PNAS...86.1939P . doi : 10.1073/pnas.86.6.1939 . PMC 286820. PMID 2928314 .  
  15. ↑ لي، تشيغانغ؛ باريس، ستيفن؛ ساسكي، كريستوفر أ. (2020). "طريقة بسيطة لاستخلاص الحمض النووي عالي الوزن الجزيئي من النباتات، مناسبة لتقنيات الجزيء المفرد" . طرق النبات . 16 (1): 38. Bibcode : 2020PlMet..16...38L . doi : 10.1186/s13007-020-00579-4 . PMC 7071634. PMID 32190102 .   تم نسخ النص من هذا المصدر، وهو متاح بموجب ترخيص Creative Commons Attribution 4.0 International License .
  16. ↑ كودي، دلفين؛ كولوت، مارث؛ لويس، أوريلي؛ توفيه، صوفي؛ بونيه، جاك (11 نوفمبر 2021). " الحفظ طويل الأمد للحمض النووي في درجة حرارة الغرفة. الآثار المترتبة على تخزين بيانات الحمض النووي" . PLOS ONE . 16 (11) e0259868. Bibcode : 2021PLoSO..1659868C . doi : 10.1371/journal.pone.0259868 . PMC 8585539. PMID 34763344 .  
  17. 1 2 يوهانسن، جيس؛ فابريتزيك، أرمين ج.؛ إبنر، بيتينا؛ بيكار، سفين-إرنو (14 أغسطس 2017). "توصيف علامات الميكروساتلايت وعلامات تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة من بيانات Miseq والتنميط الجيني بالتسلسل بين مجموعات Urophora cardui (Tephritidae) المتجاورة جغرافيًا" . PeerJ . 5 e3582. doi : 10.7717/peerj.3582 . PMC 5560233. PMID 28828237 .  
  18. ↑ فوكس، فلورنسا (نوفمبر 2002). "مراقبة جودة اللقاحات المشتقة من التقنية الحيوية: اعتبارات فنية وتنظيمية". بيوشيمي . 84 (11): 1173-1179 . doi : 10.1016/s0300-9084(02)00028-7 . PMID 12595146 . 
  19. ↑ باسزكيويتش، كونراد هـ ؛ فاربوس، أودري؛ أونيل، بول؛ مور، كارين (2014). "مراقبة الجودة على الحدود" . مجلة فرونتيرز إن جينيتكس . 5 : 157. doi : 10.3389/fgene.2014.00157 . PMC 4033843. PMID 24904650 .  

للمزيد من القراءة

  • سامبروك، مايكل ر.؛ غرين، جوزيف (2012). الاستنساخ الجزيئي (الطبعة الرابعة). كولد سبرينغ هاربور، نيويورك: مطبعة مختبر كولد سبرينغ هاربور. ISBN 1936113422. OCLC 774021237 .