قياس التدفق الخلوي

📅 آخر تحديث: ٢٥ يوليو ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٢٥ يوليو ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 7 صور
الموسوعة الحرة

يُعدّ قياس التدفق الخلوي ( FC ) تقنية تُستخدم للكشف عن الخصائص الفيزيائية والكيميائية لمجموعة من الخلايا أو الجسيمات وقياسها. [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ]

في هذه العملية، تُعلق عينة تحتوي على خلايا أو جسيمات في سائل وتُحقن في جهاز قياس التدفق الخلوي . تُركز العينة بحيث تمر خلية واحدة في كل مرة عبر شعاع ليزر، حيث يكون الضوء المتشتت مميزًا للخلايا ومكوناتها. غالبًا ما تُوسم الخلايا بعلامات فلورية لامتصاص الضوء ثم انبعاثه في نطاق من الأطوال الموجية. يمكن فحص عشرات الآلاف من الخلايا بسرعة، وتُعالج البيانات المُجمعة بواسطة الحاسوب. [ 5 ]

يُستخدم قياس التدفق الخلوي بشكل روتيني في البحوث الأساسية والممارسة السريرية والتجارب السريرية . تشمل استخدامات قياس التدفق الخلوي ما يلي:

جهاز تحليل التدفق الخلوي هو أداة توفر بيانات كمية من العينة. ومن الأدوات الأخرى التي تستخدم تقنية التدفق الخلوي أجهزة فرز الخلايا التي تفصل الخلايا المستهدفة فيزيائيًا، وبالتالي تنقيتها، بناءً على خصائصها البصرية.

تاريخ

تم الكشف عن أول جهاز لقياس التدفق الخلوي يعتمد على المعاوقة ، باستخدام مبدأ كولتر ، في براءة الاختراع الأمريكية رقم 2,656,508، الصادرة عام 1953، باسم والاس إتش. كولتر . وكان ماك فولويلر مخترع الجهاز الذي سبق أجهزة قياس التدفق الخلوي الحالية، وتحديدًا جهاز فرز الخلايا. [ 6 ] وقد طور فولويلر هذا الجهاز عام 1965 ونشر بحثه في مجلة ساينس . [ 7 ] أما أول جهاز لقياس التدفق الخلوي يعتمد على التألق (ICP 11) فقد طوره فولفغانغ غوده من جامعة مونستر عام 1968 ، وقدم طلب براءة اختراع في 18 ديسمبر 1968 [ 8 ] ، وتم تسويقه تجاريًا لأول مرة عامي 1968/1969 من قبل شركة بارتيك الألمانية للتطوير والتصنيع، من خلال شركة فايوي إيه جي في غوتينغن . في ذلك الوقت، كانت طرق الامتصاص لا تزال مفضلة لدى العديد من العلماء على طرق التألق . [ ٩ ] بعد ذلك بوقت قصير، طُوِّرت أجهزة قياس التدفق الخلوي، بما في ذلك جهاز Cytofluorograph (١٩٧١) من شركة Bio/Physics Systems Inc. (لاحقًا: Ortho Diagnostics)، وجهاز PAS 8000 (١٩٧٣) من شركة Partec، وأول جهاز FACS (فرز الخلايا المنشط بالفلورة) من شركة Becton Dickinson (١٩٧٤)، وجهاز ICP 22 (١٩٧٥) من شركة Partec/Phywe، وجهاز Epics من شركة Coulter (١٩٧٧/١٩٧٨). وفي عام ٢٠١٢، طرحت شركة Amphasys أول جهاز قياس تدفق خلوي عالي التردد يعتمد على المعاوقة الكهربائية دون استخدام علامات ، وهو Ampha Z30، والمبني على شريحة "مختبر على رقاقة" ميكروفلويدية حاصلة على براءة اختراع.

اسم التقنية

كان الاسم الأصلي لتقنية قياس التدفق الخلوي القائمة على التألق هو "قياس التدفق الخلوي النبضي" ( بالألمانية : Impulszytophotometrie )، استنادًا إلى أول طلب براءة اختراع في هذا المجال. وفي المؤتمر الخامس لمؤسسة الهندسة الأمريكية حول علم الخلايا الآلي في بينساكولا (فلوريدا) عام 1976 - بعد ثماني سنوات من طرح أول جهاز لقياس التدفق الخلوي القائم على التألق (1968) - تم الاتفاق على استخدام مصطلح "قياس التدفق الخلوي" بشكل شائع، وهو مصطلح سرعان ما شاع استخدامه. [ 10 ]

أجهزة قياس التدفق الخلوي

رسم تخطيطي لجهاز قياس التدفق الخلوي، من تركيز الغلاف إلى جمع البيانات.

تستطيع أجهزة قياس التدفق الخلوي الحديثة تحليل آلاف الجسيمات في الثانية الواحدة، في الوقت الفعلي، وإذا تم تهيئتها كأجهزة فرز للخلايا، فإنها قادرة على فصل وعزل الجسيمات ذات الخصائص البصرية المحددة بمعدلات مماثلة. يشبه جهاز قياس التدفق الخلوي المجهر ، إلا أنه بدلاً من إنتاج صورة للخلية، يوفر قياس التدفق الخلوي قياسًا كميًا آليًا عالي الإنتاجية لمعايير بصرية محددة على مستوى كل خلية على حدة. لتحليل الأنسجة الصلبة ، يجب أولاً تحضير معلق خلوي أحادي. [ 11 ]

يتكون جهاز قياس التدفق الخلوي من خمسة مكونات رئيسية: خلية التدفق، ونظام القياس، والكاشف، ونظام التضخيم، وجهاز حاسوب لتحليل الإشارات. تحتوي خلية التدفق على تيار سائل (سائل الغلاف) يحمل الخلايا ويوجهها لتمر بشكل فردي عبر شعاع الضوء لاستشعارها. يعتمد نظام القياس عادةً على قياس المعاوقة (أو الموصلية) والأنظمة البصرية - المصابيح ( الزئبقية ، الزينون )؛ الليزر عالي الطاقة المبرد بالماء ( الأرجون ، الكريبتون ، ليزر الصبغة)؛ الليزر منخفض الطاقة المبرد بالهواء (الأرجون (488  نانومتر)، الهيليوم-نيون الأحمر (633  نانومتر)، الهيليوم-نيون الأخضر، الهيليوم-كادميوم (فوق بنفسجي))؛ ليزر الديود (الأزرق، الأخضر، الأحمر، البنفسجي) مما ينتج عنه إشارات ضوئية. يقوم نظام الكشف والتحويل التناظري الرقمي (ADC) بتحويل القياسات التناظرية للضوء المتشتت للأمام (FSC) والضوء المتشتت للجانب (SSC)، بالإضافة إلى إشارات التألق الخاصة بالصبغة، إلى إشارات رقمية يمكن معالجتها بواسطة الحاسوب. ويمكن أن يكون نظام التضخيم خطيًا أو لوغاريتميًا .

تُسمى عملية جمع البيانات من العينات باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي "الاستحواذ". ويتم الاستحواذ بواسطة جهاز كمبيوتر متصل فعليًا بجهاز قياس التدفق الخلوي، وبرنامج يُدير الواجهة الرقمية مع الجهاز. يستطيع البرنامج ضبط المعايير (مثل الجهد الكهربائي، والتعويض) للعينة قيد الاختبار، كما يُساعد في عرض معلومات العينة الأولية أثناء جمع بياناتها لضمان ضبط المعايير بشكل صحيح. كانت أجهزة قياس التدفق الخلوي في بداياتها، بشكل عام، أجهزة تجريبية، لكن التطورات التكنولوجية أتاحت استخدامها على نطاق واسع في أغراض سريرية وبحثية متنوعة. ونتيجةً لهذه التطورات، نشأ سوق كبير للأجهزة، وبرامج التحليل، بالإضافة إلى الكواشف المستخدمة في الاستحواذ، مثل الأجسام المضادة الموسومة بالفلورة .

تحتوي الأجهزة الحديثة عادةً على عدة ليزرات وكواشف فلورية. ويبلغ الرقم القياسي الحالي لجهاز تجاري عشرة ليزرات [ 12 ] وثلاثين كاشفًا فلوريًا [ 13 ] . وتتيح زيادة عدد الليزرات والكواشف إمكانية وسم الأجسام المضادة المتعددة، وتحديد المجموعة المستهدفة بدقة أكبر من خلال مؤشراتها الظاهرية . بل إن بعض الأجهزة قادرة على التقاط صور رقمية للخلايا الفردية، مما يسمح بتحليل موقع الإشارة الفلورية داخل الخلايا أو على سطحها.

الأجهزة

نظام الموائع لجهاز قياس التدفق الخلوي

يجب أن تمر الخلايا بشكل منتظم عبر مركز أشعة الليزر المركزة لقياس خصائصها البصرية بدقة في أي جهاز قياس التدفق الخلوي. [ 14 ] [ 15 ] [ 16 ] يتمثل الغرض من نظام السوائل في نقل الخلايا واحدة تلو الأخرى عبر شعاع الليزر وداخل الجهاز. كما يستخدم نظام السوائل في جهاز قياس التدفق الخلوي المزود بإمكانيات فرز الخلايا تيار السائل لنقل الخلايا المفروزة إلى أنابيب أو حُفر التجميع. [ 14 ]

التركيز الهيدروديناميكي

لتحقيق دقة عالية في تحديد موضع الخلايا داخل تيار سائل، يُستخدم التركيز الهيدروديناميكي في معظم أجهزة قياس التدفق الخلوي. [ 14 ] [ 15 ] تدخل الخلايا المعلقة إلى الجهاز محاطة بغلاف سائل خارجي. ويُحافظ على لب العينة في مركز هذا الغلاف. ويمكن التحكم في معدل تدفق العينة، أو سرعة وصول الخلايا إلى جهاز الليزر، عن طريق ضغط الغلاف السائل على لب العينة. وفي الظروف المثلى، لا يختلط تيار السائل المركزي مع سائل الغلاف.

التركيز الهيدروديناميكي بمساعدة الصوت

تُستخدم تقنية التركيز الصوتي في بعض أجهزة قياس التدفق الخلوي لدعم التركيز الهيدروديناميكي. [ 14 ] [ 16 ] تعمل الموجات الصوتية (>2  ميجاهرتز) على تركيز العينة مسبقًا قبل إدخالها إلى سائل الغلاف. ثم تُحقن العينة المركزة مسبقًا في اللب الهيدروديناميكي وتُمرر عبر الجهاز. قد يُسهم ذلك في زيادة دقة البيانات عند معدلات إدخال عينات عالية.

البصريات والإلكترونيات

المرشحات البصرية

ينبعث الضوء من الفلوروفورات ضمن طيف من الأطوال الموجية، لذا قد يؤدي دمج عدة فلوروفورات إلى تداخل في الإشارات. ولزيادة الدقة، تُستخدم المرشحات الضوئية والمرايا ثنائية اللون لترشيح الضوء وتوجيهه إلى الكواشف، مثل أنابيب التضخيم الضوئي (PMTs) أو الثنائيات الضوئية الانهيارية (APD). [ 14 ] تُصمم المرشحات الضوئية كمرشحات تمرير نطاقي (BP) أو مرشحات تمرير عالي (LP) أو مرشحات تمرير منخفض (SP). وتستخدم معظم أجهزة قياس التدفق الخلوي المرايا ثنائية اللون ومرشحات تمرير النطاق لاختيار نطاقات محددة من الطيف الضوئي.

الموشورات، والشبكات، وقياس التدفق الطيفي

تستخدم تقنية قياس التدفق الخلوي الطيفي موشورات أو محززات حيود لتشتيت الضوء المنبعث من علامة ما عبر مصفوفة كاشف. [ 14 ] [ 17 ] يتيح ذلك قياس الطيف الكامل لكل جسيم. تُفصل الأطياف المقاسة من الخلايا المفردة لاحقًا باستخدام أطياف مرجعية لجميع الأصباغ المستخدمة وطيف التألق الذاتي. قد يُتيح ذلك تصميم لوحة أوسع نطاقًا وتطبيق علامات بيولوجية جديدة.

التصوير الخلوي التدفق

يلتقط التصوير الخلوي التدفق (IFC) صورًا متعددة القنوات للخلايا. [ 14 ] [ 18 ] يمكن تجهيز أجهزة الكشف المستخدمة في منصات التصوير بجهاز اقتران الشحنة (CCD) أو أشباه الموصلات المعدنية المؤكسدة التكميلية (CMOS) لالتقاط صور للخلايا الفردية.

تحليل البيانات

تعويض

لكل فلوروكروم طيف فلوري واسع. عند استخدام أكثر من فلوروكروم، قد يحدث تداخل بينها. تُسمى هذه الحالة بتداخل الطيف، ويجب تصحيحها. على سبيل المثال، طيف انبعاث FITC وPE هو طيف يتداخل فيه الضوء المنبعث من الفلورسين مع نفس الطول الموجي عند مروره عبر المرشح المستخدم لـPE. يُصحح هذا التداخل الطيفي بإزالة جزء من إشارة FITC من إشارات PE أو العكس. تُسمى هذه العملية بتعويض اللون، حيث تُحسب قيمة الفلوركروم كنسبة مئوية لقياس نفسه. [ 19 ]

التعويض هو عملية رياضية تُستخدم لتصحيح التداخل الطيفي لبيانات قياس التدفق الخلوي متعددة المعايير. ونظرًا لأن الفلوركرومات قد تمتلك أطيافًا واسعة النطاق، فقد تتداخل، مما يُسبب تشويشًا غير مرغوب فيه أثناء تحليل البيانات. يُعرف هذا التداخل باسم "التسرب الطيفي" ويُقاس بمعامل التسرب الطيفي، وينتج عادةً عن قيام أجهزة الكشف الخاصة بفلوروكروم معين بقياس ذروة كبيرة في الطول الموجي لفلوروكروم آخر. ويُستخدم الجبر الخطي في أغلب الأحيان لإجراء هذا التصحيح. [ 19 ]

بشكل عام، عند عرض رسوم بيانية لمتغير واحد أو أكثر، يكون الهدف هو إظهار أن المتغيرات الأخرى لا تُساهم في التوزيع المعروض. وتزداد هذه المشكلة حدةً عند استخدام متغيرات تتجاوز قيمتها الضعف. حاليًا، لم يتم اكتشاف أي أدوات لعرض المتغيرات متعددة الأبعاد بكفاءة. لذا، يُعدّ التعويض ضروريًا جدًا لتمييز الخلايا.

تحليل عينة بحرية من العوالق النباتية الضوئية النانوية بواسطة قياس التدفق الخلوي يظهر ثلاثة تجمعات مختلفة ( Prochlorococcus و Synechococcus و picoeukaryotes ).

البوابات

تحديد الخلايا الدموية الرئيسية باستخدام قياس التدفق الخلوي عن طريق التشتت الجانبي و CD45 ، في حالة التوزيعات الطبيعية.

يمكن تمثيل البيانات الناتجة عن أجهزة قياس التدفق الخلوي بيانيًا في بُعد واحد لإنتاج مدرج تكراري ، أو في مخططات نقطية ثنائية الأبعاد، أو حتى في ثلاثة أبعاد. ويمكن فصل المناطق على هذه المخططات بشكل متسلسل، بناءً على شدة التألق ، من خلال إنشاء سلسلة من عمليات استخلاص المجموعات الفرعية، والتي تُسمى "البوابات". توجد بروتوكولات محددة للبوابات لأغراض التشخيص والاستخدام السريري، وخاصة فيما يتعلق بأمراض الدم . غالبًا ما يتم تمييز الخلايا المفردة عن الخلايا المزدوجة أو التجمعات الأكبر حجمًا من خلال "زمن انتقالها" (يُشار إليه أيضًا باسم "عرض النبضة") عبر شعاع الليزر المركز بدقة [ 20 ] .

غالبًا ما تُرسم المخططات على مقياس لوغاريتمي. ونظرًا لتداخل أطياف انبعاث الأصباغ الفلورية المختلفة، [ 21 ] [ 22 ] يجب تعويض الإشارات عند الكواشف إلكترونيًا وحسابيًا. ويمكن تحليل البيانات المُجمّعة باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي بواسطة برامج متخصصة. وبمجرد جمع البيانات، لا حاجة للبقاء على اتصال بجهاز قياس التدفق الخلوي، ويُجرى التحليل في أغلب الأحيان على جهاز حاسوب منفصل. وهذا ضروري بشكل خاص في المرافق الأساسية التي تشهد طلبًا كبيرًا على استخدام هذه الأجهزة.

التحليل الحسابي

أتاح التقدم الأخير في مجال تحديد التجمعات السكانية آليًا باستخدام الأساليب الحسابية بديلًا لاستراتيجيات التحديد التقليدية. ويمكن لأنظمة التحديد الآلي أن تساعد في اكتشاف التجمعات السكانية النادرة والمخفية. ومن بين الأساليب الآلية النموذجية: FLOCK [ 23 ] في بوابة تحليل قواعد بيانات علم المناعة (ImmPort) [ 24 ] ، و SamSPECTRAL [ 25 ] وflowClust [ 26 ] [ 27 ] [ 28 ] في Bioconductor ، وFLAME [ 29 ] في GenePattern . أما خوارزمية T-Distributed Stochastic Neighbor Embedding (tSNE) فهي مصممة لتقليل الأبعاد ، مما يسمح بتصور البيانات المعقدة متعددة الأبعاد في "خريطة" ثنائية الأبعاد. [ 30 ] أسفرت الجهود التعاونية عن مشروع مفتوح يسمى FlowCAP (قياس التدفق الخلوي: التقييم النقدي لأساليب تحديد السكان، [ 31 ] ) لتوفير طريقة موضوعية لمقارنة وتقييم أساليب تجميع بيانات قياس التدفق الخلوي، وكذلك لوضع إرشادات حول الاستخدام والتطبيق المناسبين لهذه الأساليب.

ضوابط FMO

تُعدّ ضوابط الفلورة ناقص واحد (FMO) مهمة لتفسير البيانات عند إنشاء لوحات متعددة الألوان، حيث تُصبغ الخلية بعدة فلوركرومات في آنٍ واحد. توفر ضوابط FMO مقياسًا لتداخل الفلورة في قناة معينة، وتسمح بالتعويض. لإنشاء ضابط FMO، تُصبغ العينة بجميع الفلوركرومات باستثناء الفلوركروم قيد الاختبار، أي إذا كنت تستخدم 4 فلوركرومات مختلفة، فيجب أن يحتوي ضابط FMO على 3 منها فقط (مثال: الفلوركرومات A، B، C، D؛ ضوابط FMO: ABC_، AB_D، A_CD، _BCD).

فرز الخلايا بواسطة قياس التدفق الخلوي

فرز الخلايا هو أسلوب لتنقية مجموعات الخلايا بناءً على وجود أو غياب خصائص فيزيائية محددة. [ 14 ] [ 16 ] [ 32 ] في أجهزة قياس التدفق الخلوي المزودة بإمكانيات الفرز، يكشف الجهاز عن الخلايا باستخدام معايير تشمل حجم الخلية وشكلها وتعبير البروتين، ثم يستخدم تقنية القطرات لفرز الخلايا واستخلاص المجموعات الفرعية لاستخدامها بعد التجربة. [ 14 ] [ 16 ]

بُني أول نموذج أولي لجهاز فرز الخلايا في مختبر لوس ألاموس الوطني (LANL) عام 1965 على يد الفيزيائي ماك ج. فولويلر، وذلك بدمج مستشعر حجم كولتر مع طابعة نفث الحبر التي كانت قد اختُرعت حديثًا آنذاك. [ 33 ] وقد طُوّر جهاز فرز الخلايا الحية، أو جهاز فرز الخلايا المنشط بالفلورة (FACS) [ أ ] ، على يد لين هيرزنبرغ ، الذي فاز لاحقًا بجائزة كيوتو عام 2006 عن عمله الرائد. [ 35 ]

فرز الخلايا باستخدام تقنية قياس التدفق الخلوي وتقنية القطرات

تختلف أجهزة فرز الخلايا بتقنية قياس التدفق الخلوي عن أجهزة تحليل التدفق الخلوي في نظام التجميع. تبدأ عملية التجميع بحقن عينة في تيار من سائل الغلاف يمر عبر خلية التدفق ويلتقطه الليزر. [ 36 ]  ثم يحمل التيار الخلية عبر فوهة مهتزة تُنتج قطرات، معظمها يحتوي على خلية واحدة أو لا يحتوي على أي خلايا. توضع حلقة شحن كهربائي عند نقطة انقسام التيار إلى قطرات، وتُشحن الحلقة قبل قياس شدة التألق مباشرةً؛ وتُحمل الشحنة المعاكسة على القطرة عند انفصالها عن التيار، فتُشحن القطرات. تسقط القطرات المشحونة بعد ذلك عبر نظام انحراف كهرساكن يوجهها إلى حاويات بناءً على شحنتها. في بعض الأنظمة، تُطبق الشحنة مباشرةً على التيار، وتحتفظ القطرة المنفصلة بشحنة من نفس نوع التيار. ثم يُعاد التيار إلى حالته المتعادلة بعد انفصال القطرة. بعد التجميع، يمكن استزراع هذه الخلايا ومعالجتها ودراستها.

الملصقات

استخدام قياس التدفق الخلوي لقياس تباين عدد النسخ لتسلسل الحمض النووي المحدد ( Flow-FISH )

تستخدم تقنية قياس التدفق الخلوي خصائص الضوء المتناثر من الخلايا أو الجسيمات لتحديد الخصائص الفيزيائية أو قياسها كميًا. ويمكن استخدام العلامات والأصباغ والصبغات لإجراء تحليل متعدد المعايير (لفهم المزيد من خصائص الخلية). أما التنميط المناعي فهو تحليل لمجموعات غير متجانسة من الخلايا باستخدام الأجسام المضادة الموسومة [ 37 ] وغيرها من الكواشف المحتوية على الفلوروفورات، مثل الأصباغ والصبغات.

علامات فلورية

يمكن استخدام مجموعة واسعة من الفلوروفورات كعلامات في قياس التدفق الخلوي. [ 21 ] ترتبط الفلوروفورات، أو ببساطة "الفلورات"، عادةً بجسم مضاد يتعرف على سمة مستهدفة على سطح الخلية أو داخلها؛ وقد ترتبط أيضًا بجزيء كيميائي له ألفة لغشاء الخلية أو أي بنية خلوية أخرى. لكل فلوروفور ذروة مميزة في طول موجة الإثارة والانبعاث ، وغالبًا ما تتداخل أطياف الانبعاث. ونتيجة لذلك، يعتمد اختيار مجموعة العلامات على طول موجة المصباح (المصابيح) أو الليزر (الليزر) المستخدم لإثارة الفلوروفورات، وعلى أجهزة الكشف المتاحة. [ 38 ] يستخدم قياس التدفق الخلوي التألق كأداة كمية؛ وتتفوق حساسيته الفائقة على منصات الكشف التألقي الأخرى، مثل المجهر متحد البؤر . تكون حساسية التألق المطلقة أقل عمومًا في المجهر متحد البؤر لأن الإشارات غير المركزة يتم رفضها بواسطة النظام البصري متحد البؤر ولأن الصورة يتم بناؤها بشكل متسلسل من قياسات فردية في كل موقع عبر الخلية، مما يقلل من الوقت المتاح لجمع الإشارة. [ 39 ]

النقاط الكمومية

تُستخدم النقاط الكمومية أحيانًا بدلاً من الفلوروفورات التقليدية نظرًا لذروات انبعاثها الأضيق.

وضع العلامات النظائرية

تتغلب تقنية قياس التدفق الخلوي الكتلي على قيود الوسم الفلوري باستخدام نظائر اللانثانيدات المرتبطة بالأجسام المضادة. تتيح هذه الطريقة نظريًا استخدام ما بين 40 إلى 60 وسمًا مميزًا، وقد تم إثبات فعاليتها باستخدام 30 وسمًا. [ 40 ] يختلف قياس التدفق الخلوي الكتلي اختلافًا جوهريًا عن قياس التدفق الخلوي: حيث تُدخل الخلايا في بلازما ، ثم تُؤيَّن، ويتم قياس النظائر المرتبطة بها كميًا باستخدام مطياف الكتلة ذي زمن الطيران . على الرغم من أن هذه الطريقة تسمح باستخدام عدد كبير من الوسوم، إلا أن قدرتها الإنتاجية الحالية أقل من قدرة قياس التدفق الخلوي. كما أنها تُتلف الخلايا المُحلَّلة، مما يحول دون استعادتها عن طريق الفرز. [ 40 ]

مصفوفة الخرزات الخلوية

بالإضافة إلى القدرة على وسم وتحديد الخلايا الفردية باستخدام الأجسام المضادة الفلورية، يمكن أيضًا قياس المنتجات الخلوية مثل السيتوكينات والبروتينات وعوامل أخرى. على غرار فحوصات ELISA الساندويتشية، تستخدم فحوصات مصفوفة الخرز الخلوية ( CBA ) مجموعات متعددة من الخرز، يتم تمييزها عادةً حسب الحجم ومستويات شدة الفلورة المختلفة، لتمييز العديد من المواد التحليلية في فحص واحد. يتم الكشف عن كمية المادة التحليلية الملتقطة باستخدام جسم مضاد مُبَيوْتَن ضد جزء ثانوي من البروتين، متبوعًا بمعالجة ستربتأفيدين-R-فيكوإريثرين. يتم قياس شدة فلورة R-فيكوإريثرين على الخرز باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي المزود بمصدر  إثارة بطول موجي 488 نانومتر. يمكن الحصول على تركيزات البروتين المطلوب في العينات من خلال مقارنة إشارات الفلورة بتلك الموجودة في منحنى قياسي مُنشأ من تخفيف متسلسل لتركيز معروف من المادة التحليلية. يُشار إلى هذه التقنية أيضًا باسم مصفوفة خرز السيتوكين (CBA).

قياس التدفق الخلوي بالمعاوقة

تُعرف أنظمة تحليل الخلايا المفردة القائمة على المعاوقة باسم عدادات كولتر . وهي تمثل طريقة راسخة لحساب وتحديد حجم أي نوع من الخلايا والجسيمات تقريبًا. وقد تم تطوير هذه التقنية الخالية من العلامات مؤخرًا من خلال نهج " المختبر على رقاقة " وتطبيق تيار متردد عالي التردد في نطاق ترددات الراديو (من 100  كيلوهرتز إلى 30  ميجاهرتز) بدلًا من التيار المستمر الثابت أو مجال التيار المتردد منخفض التردد. [ 41 ] [ 42 ] تتيح هذه التقنية الحاصلة على براءة اختراع تحليلًا دقيقًا للغاية للخلايا، وتوفر معلومات إضافية مثل سعة الغشاء وحيوية الخلية. كما يسمح صغر حجمها نسبيًا ومتانتها باستخدامها ميدانيًا بواسطة البطارية.

المعايير القابلة للقياس

تشمل العوامل القابلة للقياس في التحليل الخلوي وقياس التدفق الخلوي مجموعة متنوعة من السمات والمؤشرات التي توفر رؤى مهمة حول بيولوجيا الخلية ووظيفتها. تُمكّن تقنيات قياس التدفق الخلوي من تحديد هذه العوامل كميًا وتقييمها، مما يسمح للباحثين بدراسة وتحليل جوانب مختلفة من الخلايا. فيما يلي بعض المعايير الكمية المهمة التي يتم دراستها بشكل متكرر:

  • الاستماتة: يمكن قياس الاستماتة كمياً باستخدام تقنية قياس التدفق الخلوي من خلال قياس تدمير الحمض النووي، وجهد غشاء الميتوكوندريا، وتغيرات النفاذية، ونشاط الكاسبيز. تكشف هذه القياسات عن تفاصيل مهمة حول موت الخلايا المخطط له.
  • التصاق الخلايا: يمكن استخدام قياس التدفق الخلوي لدراسة التصاق الخلايا، مثل التصاق العامل الممرض بالخلايا المضيفة. يستطيع الباحثون قياس وتحليل أحداث التصاق الخلايا باستخدام علامات محددة أو علامات فلورية.
  • أصباغ الخلايا: الكلوروفيل والفيوكوإريثرين هما صبغتان موجودتان في بعض الخلايا. ويمكن قياس وجود هذه الصبغات وكمياتها باستخدام تقنية قياس التدفق الخلوي، مما يوفر معلومات حول عمليات الأيض الخلوي والحالات الفيزيولوجية.
  • مستضدات سطح الخلية: يُستخدم قياس التدفق الخلوي غالبًا لتحديد وقياس مستضدات سطح الخلية، والمعروفة أيضًا باسم علامات التمايز العنقودي (CD). يستطيع الباحثون تصنيف مجموعات الخلايا بناءً على تعبير مستضدات سطحها عن طريق وسم الخلايا بأجسام مضادة محددة.
باستخدام تقنية قياس التدفق الخلوي مع 7-أمينوأكتينوميسين د (7-AAD)، تشير الإشارة المنخفضة إلى وجود خلايا حية. لذا، تُظهر هذه الحالة حيوية جيدة.
  • حيوية الخلايا: يمكن استخدام قياس التدفق الخلوي كاختبار لحيوية الخلايا باستخدام أصباغ أو علامات فلورية تميز بين الخلايا الحية والميتة. يُعد هذا المؤشر بالغ الأهمية لتحديد صحة الخلايا واستجابتها للتجارب أو العلاجات. يجب أن تكون حيوية الخلايا في قياس التدفق الخلوي حوالي 95%، ولكن لا تقل عن 90%. [ 43 ]
  • الخلايا السرطانية المنتشرة: يُعدّ قياس التدفق الخلوي ضروريًا لعزل وتنقية الخلايا السرطانية المنتشرة (CTCs) من عينات الدم. ويمكن اكتشاف هذه الخلايا وفحصها من خلال استهداف مؤشرات أو خصائص معينة، مما يُساعد في تشخيص السرطان والتنبؤ بمآله ومراقبة العلاج.
  • تحديد خصائص مقاومة الأدوية المتعددة (MDR): يمكن استخدام قياس التدفق الخلوي لتحديد خصائص مقاومة الأدوية المتعددة (MDR) في الخلايا السرطانية من خلال تقييم تدفق الأصباغ الفلورية أو المؤشرات المحددة المرتبطة بآليات مقاومة الأدوية. تساعد هذه المعرفة في فهم مقاومة الأدوية ومكافحتها في علاج السرطان.
  • تحليل وفرز الكروموسومات: يمكن أن يساعد قياس التدفق الخلوي في تحليل وفرز الكروموسومات، مما يسمح بإنشاء مكتبات وتحديد الكروموسومات المحددة أو التشوهات الكروموسومية.
  • تباين عدد نسخ الحمض النووي: يمكن قياس تباين عدد نسخ الحمض النووي باستخدام تقنيات قياس التدفق الخلوي، مثل تقنية Flow-FISH أو تقنية BACs-on-Beads. تُسلط هذه التقنيات الضوء على التغيرات الجينية المرتبطة بأمراض مثل السرطان.
  • التعبير البروتيني وتعديلاته: باستخدام الأجسام المضادة أو المجسات الموسومة بالفلورة، يُتيح قياس التدفق الخلوي تقييم مستويات التعبير البروتيني والتغيرات التي تطرأ عليه، مثل الفسفرة. يُسهم هذا المؤشر في فهم أفضل لوظائف البروتينات وشبكات الإشارات الخلوية.
  • سيولة الغشاء: يمكن لتقنية قياس التدفق الخلوي الكشف عن سيولة الغشاء باستخدام مجسات فلورية حساسة لخصائص الغشاء. يوفر هذا المؤشر معلومات حول ديناميكية ووظيفة أغشية الخلايا.
  • محتوى الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبوزي RNA الكلي: يمكن قياس محتوى الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبوزي RNA الكلي في الخلايا باستخدام تقنية قياس التدفق الخلوي. وتُعد هذه البيانات مفيدة لتحليل دورة الخلية، ودراسة تكاثر الخلايا، وتحديد التغيرات في التعبير الجيني.
  • مراقبة المؤشرات الخلوية الداخلية: يمكن قياس العوامل الخلوية الداخلية باستخدام تقنية قياس التدفق الخلوي، بما في ذلك درجة الحموضة، ومستويات الكالسيوم والمغنيسيوم المتأين داخل الخلايا، وجهد الغشاء، ومستويات الجلوتاثيون، والاندفاع التأكسدي. توفر هذه البيانات معلومات حول استقلاب الخلايا، والإشارات الخلوية، والإجهاد التأكسدي .
  • تشتت الضوء: تُستخدم مقاييس التشتت الأمامي (FSC) والتشتت الجانبي (SSC) في قياس التدفق الخلوي لتقييم حجم الخلية وتعقيدها المورفولوجي، على التوالي. تصف هذه المقاييس حجم الخلايا وحبيباتها وشكلها.
  • المنتجات المعدلة وراثيًا: يُعد قياس التدفق الخلوي مفيدًا لتقييم المنتجات المعدلة وراثيًا في الكائنات الحية، ولا سيما البروتينات الفلورية مثل البروتين الفلوري الأخضر (GFP) أو ما شابهه من أشكال مختلفة. وهذا يمكّن العلماء من دراسة التعبير الجيني، وتحديد موقع البروتين، وديناميكيات الخلية.
  • تركيبات متنوعة: يسمح لك قياس التدفق الخلوي بدمج العديد من البيانات القابلة للقياس، مثل مستضدات الحمض النووي/السطحية، للحصول على فهم شامل للخصائص والوظائف البيولوجية. [ 44 ]

التطبيقات

تُستخدم هذه التقنية في العديد من المجالات، بما في ذلك البيولوجيا الجزيئية ، وعلم الأمراض ، وعلم المناعة ، وعلم الفيروسات، [ 45 ] وعلم النبات ، وعلم الأحياء البحرية . [ 46 ] ولها تطبيقات واسعة في الطب، لا سيما في زراعة الأعضاء، وأمراض الدم، وعلم مناعة الأورام والعلاج الكيميائي، والتشخيص قبل الولادة، وعلم الوراثة، وفرز الحيوانات المنوية لتحديد جنس الجنين . يُستخدم قياس التدفق الخلوي على نطاق واسع للكشف عن تشوهات الحيوانات المنوية المرتبطة بتفتت الحمض النووي [ 47 ] في فحوصات خصوبة الذكور . [ 48 ] كما يُستخدم على نطاق واسع في الأبحاث للكشف عن تلف الحمض النووي ، [ 49 ] [ 50 ] وانقسام الكاسبيز والاستماتة الخلوية . [ 51 ] يُستخدم قياس التدفق الخلوي الصوتي الضوئي في دراسة البكتيريا المقاومة للأدوية المتعددة (وأكثرها شيوعًا المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للميثيسيلين) للكشف عن البكتيريا في الدم الموسومة بالعاثيات المصبوغة، وتمييزها، وتحديد كميتها. [ 52 ] في علم الأعصاب ، يمكن أيضًا تحليل التعبير المشترك لمستضدات سطح الخلية والمستضدات داخل الخلية. [ 53 ] في علم الأحياء الدقيقة، يمكن استخدامه لفحص وفرز مكتبات الطفرات الناتجة عن الترانسبوزون المُنشأة باستخدام ترانسبوزون مُشفِّر لبروتين GFP (TnMHA)، [ 54 ] أو لتقييم حيوية الخلايا. [ 55 ] في هندسة البروتين، يُستخدم قياس التدفق الخلوي بالتزامن مع عرض الخميرة وعرض البكتيريا لتحديد متغيرات البروتين المعروضة على سطح الخلية ذات الخصائص المطلوبة. تتمثل المزايا الرئيسية لقياس التدفق الخلوي مقارنةً بعلم الأنسجة والتلوين المناعي النسيجي في إمكانية قياس كميات المستضدات بدقة وإمكانية تلوين كل خلية بأجسام مضادة متعددة مرتبطة بصبغات فلورية، حيث يمكن ربط حوالي 10 أجسام مضادة بكل خلية في المختبرات الحالية. هذا أقل بكثير من مقياس التدفق الخلوي الكتلي الذي يمكن قياس ما يصل إلى 40 جسمًا مضادًا فيه حاليًا، ولكنه أغلى ثمنًا وأبطأ.

البحوث المائية

في الأنظمة المائية، يُستخدم قياس التدفق الخلوي لتحليل الخلايا ذاتية التألق أو الخلايا الموسومة بصبغات فلورية. بدأ هذا البحث عام ١٩٨١ عندما استخدمت كلاريس ينتش قياس التدفق الخلوي لقياس التألق في ديناصورات دوارة تُسبب ظاهرة المد الأحمر. [ ٥٦ ] وفي العام التالي، نشر باحثون قياسات التدفق الخلوي لأنواع متعددة من الطحالب، والتي أمكن تمييزها بناءً على خصائص تألقها. [ ٥٧ ] وبحلول عام ١٩٨٣، كان باحثو علوم البحار يُجمّعون أجهزة قياس التدفق الخلوي الخاصة بهم [ ٥٨ ] أو يستخدمون أجهزة قياس التدفق الخلوي المتوفرة تجاريًا على عينات من مياه البحر جُمعت قبالة برمودا لإثبات إمكانية تمييز خلايا العوالق النباتية عن المواد غير الحية، وإمكانية فرز البكتيريا الزرقاء من مجتمع مختلط وزراعتها لاحقًا في المختبر. [ 59 ] كما مكّن قياس التدفق الخلوي الباحثين البحريين من التمييز بين بكتيريا البروكلوروكوكس ذات التألق الخافت والكائنات الحية الدقيقة غيرية التغذية، وهو تمييز يصعب تحقيقه باستخدام التقييمات القائمة على المجهر. [ 60 ] وتتيح التطورات التكنولوجية الآن لعلماء الأحياء المائية استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي بشكل مستمر أثناء الرحلات البحثية [ 61 ] ، كما تُستخدم هذه الأجهزة لتوفير صور لخلايا العوالق النباتية الفردية. [ 62 ] [ 63 ] ويستخدم علماء الأحياء البحرية قدرة أجهزة قياس التدفق الخلوي على الفرز لإجراء قياسات منفصلة للنشاط الخلوي والتنوع، [ 64 ] [ 65 ] ولإجراء دراسات حول العلاقات التكافلية بين الكائنات الحية الدقيقة التي تعيش في مناطق متقاربة، [ 66 ] ولقياس المعدلات البيوجيوكيميائية لعمليات متعددة في المحيط. [ 67 ]

اختبار تكاثر الخلايا

يُعدّ تكاثر الخلايا الوظيفة الرئيسية في الجهاز المناعي. وغالبًا ما يتطلب الأمر تحليل طبيعة تكاثر الخلايا لاستخلاص بعض النتائج. ومن بين هذه الاختبارات، اختبار صبغة كاربوكسي فلوريسين ثنائي الأسيتات سكسينيميديل إستر (CFSE) لتحديد تكاثر الخلايا. يساعد هذا الاختبار على مراقبة الخلايا المتكاثرة، ويُقدّم بيانات كمية ونوعية خلال التجارب المتسلسلة زمنيًا. [ 68 ] ترتبط هذه الصبغة تساهميًا بالجزيئات طويلة الأمد الموجودة داخل الخلية. وعندما تنقسم الخلايا، تنقسم الجزيئات أيضًا، وتحتوي الخلايا الوليدة على نصف كمية الصبغة الموجودة في الخلايا الأم. ويمكن تصوير هذا الانخفاض في شدة الصبغة باستخدام قياس التدفق الخلوي. [ 69 ] وقد استُخدمت هذه التقنية الفعّالة لقياس التدفق الخلوي وصبغة CFSE في الدراسات العلمية لتحديد كفاءة الخلايا التائية في قتل الخلايا المستهدفة في أنواع السرطان، مثل سرطان الدم (اللوكيميا). بهدف تصوير موت الخلايا المستهدفة، سواءً كان سريعًا أو بطيئًا، استخدم العلماء تقنية وسم CFSE مع تلوين الأجسام المضادة لأنواع معينة من الخلايا، بالإضافة إلى استخدام حبيبات دقيقة موسومة بصبغات فلورية. وقد وفر ذلك أيضًا معلومات حول تكاثر الخلايا المستهدفة عند معالجتها ببعض السيتوكينات. [ 70 ]

قياس حجم الجينوم

استُخدمت تقنية قياس التدفق الخلوي لقياس أحجام الجينوم ، أو بتعبير أدق: كمية الحمض النووي في الخلية أو النواة . على الرغم من إمكانية تحليل الجينومات بدقة أكبر عن طريق تسلسل الجينوم ، إلا أن ذلك غالبًا ما يكون صعبًا نظرًا لوجود نسبة عالية من الكروموسومات الصغيرة أو التسلسلات المتكررة التي قد لا تُكتشف أثناء التسلسل (أو التي تُستبعد خلال مرحلة التحليل عندما يتعذر ربطها بالكروموسومات ). مع ذلك، فإن تقنية قياس التدفق الخلوي ليست مثالية أيضًا. قد تختلف أحجام الجينوم الناتجة باختلاف الصبغة المستخدمة. أظهر تحليل جينومات الأسماك اختلافات كبيرة في أحجام الجينوم عند استخدام بروبيديوم يوديد (PI) و DAPI على التوالي. على سبيل المثال، وُجد أن جينوم ثعبان البحر الياباني (Anguilla japonica) يحتوي على 1.09 بيكوغرام من الحمض النووي باستخدام PI مقابل 1.25 بيكوغرام باستخدام DAPI. وبالمثل، وُجد أن جينوم سمكة الميكسوسيبرينوس الآسيوية يحتوي على 2.75 بيكوغرام من الحمض النووي (PI) مقابل 3.08 بيكوغرام (DAPI). أي أن الاختلافات كانت في حدود 12-14%. [ 71 ]

انظر أيضاً

ملحوظات

  1. ↑ يُعدّ اختصار FACS علامة تجارية مسجلة ومملوكة لشركة BD Biosciences-Immunocytometry Systems، وهي قسم من شركة Becton-Dickinson، التي حصلت على ترخيص براءات اختراع جامعة ستانفورد. [ 32 ] [ 34 ]

مراجع

  1. ↑ بيكو جيه، غيران سي إل، لو فان كيم سي، بولانجر سي إم (مارس 2012). "قياس التدفق الخلوي: نظرة استرجاعية، أساسيات، وأجهزة حديثة" . علم الخلايا . 64 (2): 109-130 . doi : 10.1007/s10616-011-9415-0 . PMC 3279584. PMID 22271369 .  
  2. ↑ "قياس التدفق الخلوي" . TheFreeDictionary.com . تم الاطلاع عليه بتاريخ 18-09-2018 .
  3. ↑ شابيرو إتش إم (2003). قياس التدفق الخلوي العملي ( الطبعة الرابعة). نيويورك: وايلي-ليس. ISBN  978-0-471-41125-3.
  4. ↑ جيفان، أ. ل. (2011). "قياس التدفق الخلوي: مقدمة". في: هاولي، ت.، وهاولي، ر. (محرران). بروتوكولات قياس التدفق الخلوي . طرق في البيولوجيا الجزيئية. المجلد 699. دار هومانا للنشر. الصفحات 1-29 . doi : 10.1007/978-1-61737-950-5_1 . ISBN   978-1-61737-949-9PMID 21116976​​ 
  5. ↑ أونيل ك، أغايبور ن، سبيدلين ج، برينكمان ر (ديسمبر 2013). "المعلوماتية الحيوية لقياس التدفق الخلوي" . مجلة PLOS للحوسبة البيولوجية . 9 (12) e1003365. رمز Bibcode : 2013PLSCB...9E3365O . doi : 10.1371/journal.pcbi.1003365 . PMC 3867282. PMID 24363631 .  
  6. ↑ براءة الاختراع الأمريكية رقم 3380584 ، ماك فولويلر، "فاصل الجسيمات"، صدرت بتاريخ 1965-06-01 
  7. ↑ فولويلر ، إم جيه (نوفمبر 1965). "الفصل الإلكتروني للخلايا البيولوجية حسب الحجم". مجلة ساينس . 150 (3698): 910-911 . رمز Bibcode : 1965Sci...150..910F . doi : 10.1126/science.150.3698.910 . PMID 5891056. S2CID 459342 .  
  8. ↑ DE 1815352 ، ديتريش دبليو، غوده دبليو، "غرفة تدفق لأجهزة قياس الضوء لقياس وعدّ الجسيمات في وسط تشتت"، نُشر في 21 ديسمبر 1977 
  9. ↑ أوزبورن، ر. أ. (1970). "أتمتة علم الخلايا". في إيفانز، د. م. (محرر). وقائع ندوة تينوفوس الثانية . 24-25 أكتوبر 1968. إدنبرة ولندن: إي. وإس. ليفينغستون (نُشر عام 1971). doi : 10.1016/S0031-3025(16)39506-X . S2CID 58286041 . كامينتسكي، ل. أ. (1973). "أتمتة علم الخلايا". التقدم في الفيزياء البيولوجية والطبية . 14 : 93-161 . doi : 10.1016/B978-0-12-005214-1.50007-8 . ISBN 978-0-12-005214-1PMID 4579761​​ 
  10. ^ ساك يو، تارنوك أ، روث جي (2006). Zelluläre Diagnostik [ التشخيص الخلوي ] (باللغة الألمانية). ناشري كارجر. رقم ISBN 978-3-318-01217-0.
  11. ↑ رايشارد، أندرو؛ أسوسينغ، كيوال (2018-12-06). "أفضل الممارسات لتحضير معلق خلوي أحادي من الأنسجة الصلبة لتحليل التدفق الخلوي" . علم الخلايا. الجزء أ: مجلة الجمعية الدولية لعلم الخلايا التحليلي . 95 (2): 219-226 . doi : 10.1002/cyto.a.23690 . ISSN 1552-4930 . PMC 6375754. PMID 30523671 .   
  12. ↑ "الموارد والمعدات" . معهد سينتيناري .
  13. ↑ "BD Biosciences – منتجات الطلب الخاص" .
  14. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 كوساريزا أ، تشانغ إتش دي، رادبروش أ، أكديس م، أندرا إي، أنونزياتو ف، وآخرون . (أكتوبر 2017). "إرشادات استخدام قياس التدفق الخلوي وفرز الخلايا في الدراسات المناعية" . المجلة الأوروبية لعلم المناعة . 47 (10): 1584-1797 . doi : 10.1002 / eji.201646632 . PMC 9165548. PMID 29023707. S2CID 25591889 .    
  15. 1 2 "نظام الموائع - دليل قياس التدفق الخلوي" . شركة بيو-راد . تم الاطلاع عليه بتاريخ 18-09-2018 .
  16. 1 2 3 4 "كيف يعمل جهاز قياس التدفق الخلوي" . شركة ثيرمو فيشر العلمية . تم الاطلاع عليه بتاريخ 18-09-2018 .
  17. ↑ نولان جيه بي، كونديلو دي (يناير 2013). "قياس التدفق الطيفي" . البروتوكولات الحالية في قياس التدفق الخلوي . الفصل 1 (1): 1.27.1–1.27.13. doi : 10.1002/0471142956.cy0127s63 . ISBN 978-0-471-14295-9. PMC 3556726 . PMID 23292705 .  
  18. ↑ هان ي، غو ي، تشانغ أ.س، لو ي.هـ (نوفمبر 2016). "مراجعة: تقنيات التصوير لقياس التدفق الخلوي" . مختبر على رقاقة . 16 (24): 4639-4647 . doi : 10.1039/c6lc01063f . PMC 5311077. PMID 27830849 .  
  19. 1 2 رودرير م (نوفمبر 2001). "التعويض الطيفي في قياس التدفق الخلوي: تشوهات التصوير، والقيود، والمحاذير" . قياس التدفق الخلوي . 45 (3): 194-205 . doi : 10.1002/1097-0320(20011101)45:3 < 194::aid-cyto1163 > 3.0.co ; 2-c . PMID 11746088 . 
  20. ↑ شاربلس تي، تراجانوس إف، دارزينكيويتش زد، ميلاميد إم آر (1975). "قياس التدفق الخلوي: التمييز بين الخلايا المفردة وتجمعات الخلايا عن طريق قياسات الحجم المباشرة". مجلة علم الخلايا . 19 (6): 577-81 . PMID 1108568 . 
  21. 1 2 "جدول الفلوركروم (الأدوات)" . شبكة قياس التدفق الخلوي .
  22. ↑ "جدول الفلوركرومات" . مؤرشف من الأصل في 20 أكتوبر 2014.
  23. ↑ تشيان واي، وي سي، إيون هيونغ لي إف، كامبل جيه، هاليلي جيه، لي جيه إيه، وآخرون (2010). "توضيح سبعة عشر مجموعة فرعية من خلايا الدم المحيطية البشرية من النوع B وقياس استجابة الكزاز باستخدام طريقة تعتمد على الكثافة للتعرف الآلي على تجمعات الخلايا في بيانات قياس التدفق الخلوي متعدد الأبعاد" . قياس التدفق الخلوي، الجزء ب . 78 (ملحق 1): ص 69-82. doi : 10.1002/cyto.b.20554 . PMC 3084630. PMID 20839340 .   
  24. ↑ "قاعدة بيانات علم المناعة وبوابة التحليل" . مؤرشفة من الأصل في 26 يوليو 2011. تم الاطلاع عليها في 3 سبتمبر 2009 .
  25. ↑ زاري هـ، شوشتاري ب، غوبتا أ، برينكمان ر.ر. (يوليو 2010). "اختزال البيانات للتجميع الطيفي لتحليل بيانات قياس التدفق الخلوي عالي الإنتاجية" . بي إم سي بيوانفورماتيكس . 11 403. doi : 10.1186/1471-2105-11-403 . PMC 2923634. PMID 20667133 .  
  26. ↑ "flowClust" . تم الاسترجاع في 2009-09-03 .
  27. ↑ لو ك، برينكمان آر آر، جوتاردو آر (أبريل 2008). "التحديد الآلي لبيانات قياس التدفق الخلوي عبر التجميع القوي القائم على النموذج" . قياس التدفق الخلوي، الجزء أ . 73 (4): 321-332 . doi : 10.1002/cyto.a.20531 . PMID 18307272 . 
  28. ↑ لو ك، هان إف، برينكمان آر آر، جوتاردو آر (مايو 2009). " flowClust: حزمة Bioconductor للبوابات الآلية لبيانات قياس التدفق الخلوي" . BMC Bioinformatics . 10 145. doi : 10.1186/1471-2105-10-145 . PMC 2701419. PMID 19442304 .  
  29. ↑ "تحليل التدفق باستخدام التقدير الآلي متعدد المتغيرات (FLAME)" . مؤرشف من الأصل في 21 أغسطس 2009. تم الاسترجاع في 3 سبتمبر 2009 .
  30. ↑ واتنبرغ م، فييغاس ف، جونسون إ (13 أكتوبر 2016). "كيفية استخدام t-SNE بفعالية" . ديستيل . 1 (10). doi : 10.23915/distill.00002 .
  31. ↑ "FlowCAP – قياس التدفق الخلوي: تقييم نقدي لأساليب تحديد السكان" . تم الاسترجاع في 2009-09-03 .{{cite web}}: CS1 maint: deprecated archiveal service ( link )
  32. 1 2 بيركل ج (19 يوليو 2004). "جهاز فرز الخلايا المنشط بالفلورة" . مجلة ساينتست . تم الاسترجاع في 18 سبتمبر 2018 .
  33. ↑ "وحدة التسجيل 9554، مقابلات حول تاريخ فرز الخلايا" . أرشيفات مؤسسة سميثسونيان . فولويلر، ماك جيت. مُستَجوب، هيرزنبرغ، ليونارد أ. مُستَجوب، باخ، بروس ألين. مُستَجوب، كراسنو، مارك أ. مُستَجوب، ماتري، ناجيش س. مُستَجوب. 1991. تاريخ الاسترجاع: 18 سبتمبر 2018 .{{cite web}}صيانة CS1: أخرى ( رابط )
  34. ↑ بوشنيل تي (2016-05-04). "12 مصطلحًا وتعريفًا في قياس التدفق الخلوي يخطئ فيها معظم العلماء" . قياس التدفق الخلوي الخبير . تم الاسترجاع في 2018-09-18 .
  35. ↑ يوليوس إم إتش، ماسودا تي، هيرزنبرغ إل إيه (يوليو 1972). "إثبات أن الخلايا المرتبطة بالمستضد هي طلائع للخلايا المنتجة للأجسام المضادة بعد تنقيتها باستخدام جهاز فرز الخلايا المنشط بالفلورة" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 69 (7): 1934-1938 . Bibcode : 1972PNAS...69.1934J . doi : 10.1073 / pnas.69.7.1934 . PMC 426835. PMID 4114858 .  
  36. ↑ "فرز الخلايا - مرفق قياس التدفق الخلوي بكلية الطب" . flowcytometry.utoronto.ca . مؤرشف من الأصل بتاريخ 18-09-2018 . تم الاطلاع عليه بتاريخ 18-09-2018 .
  37. ↑ "اقتران الأجسام المضادة وحيدة النسيلة" . www.drmr.com . تم الاطلاع عليه بتاريخ 18-09-2018 .
  38. ↑ لوكين إم آر (1990). تقنيات التألق المناعي في قياس التدفق الخلوي والفرز ( الطبعة الثانية). وايلي. الصفحات 341-353 .  
  39. ↑ باسيجي، د.أ.، أورتين، و.إ.، ليانغ، ل.، فينكاتشالام، ف.، موريسي، ب. (سبتمبر 2007). " تحليل الصور الخلوية والتصوير باستخدام قياس التدفق الخلوي" . مجلة طب المختبرات السريرية . 27 (3): 653-70 ، 8. doi : 10.1016/j.cll.2007.05.008 . PMC 2034394. PMID 17658411 .  
  40. 1 2 أورناتسكي، أو.، باندورا، د.، بارانوف، ف.، نيتز، م.، وينيك، م.أ.، تانر، س. (سبتمبر 2010). "تحليل متعدد المعايير عالي الدقة باستخدام قياس التدفق الخلوي الكتلي". مجلة أساليب علم المناعة . 361 ( 1-2 ): 1-20 . doi : 10.1016/j.jim.2010.07.002 . PMID 20655312 . 
  41. ↑ صن تي، مورغان إتش (أبريل 2010). "قياس التدفق الخلوي باستخدام المعاوقة الميكروفلويدية للخلايا المفردة: مراجعة". الميكروفلويديات والنانوفلويديات . 8 (4): 423-443 . doi : 10.1007/s10404-010-0580-9 . S2CID 95631023 . 
  42. ↑ تشيونغ كيه سي، دي بيراردينو إم، شاده-كامبمان جي، هيبيسين إم، بيرزشالسكي إيه، بوتشي جيه، وآخرون . (يوليو 2010). "قياس التدفق الخلوي القائم على المعاوقة الميكروفلويدية" . قياس التدفق الخلوي، الجزء أ . 77 (7): 648-666 . doi : 10.1002/cyto.a.20910 . PMID 20583276 .  
  43. ↑ "بروتوكول تلوين الخلايا باستخدام قياس التدفق الخلوي (FACS) (تلوين سطح الخلية)" . كلية الطب بجامعة ييل - قسم قياس التدفق الخلوي بجامعة ييل . تم الاطلاع عليه بتاريخ 17 أكتوبر 2023 .
  44. ↑ "قياس التدفق الخلوي - الأنواع، الغرض، الكواشف، الأمثلة، التطبيق" . microbiologynote.com . 18-10-2022 . تم الاطلاع عليه بتاريخ 27-06-2023 .
  45. ↑ زامورا جيه إل، أغيلار إتش سي (فبراير 2018). "قياس التدفق الفيروسي كأداة لدراسة الفيروسات" . طرق . 134-135 : 87-97 . doi : 10.1016/j.ymeth.2017.12.011 . PMC 5815898. PMID 29258922 .  
  46. ↑ مورفي، آر دبليو، لوكوك، إل إيه، سميث، سي، داريفسكي، آي إس، أورلوف، إن، ماكولوتش، آر دي، أبتون، دي إي (1997). "قياس التدفق الخلوي في مسوحات التنوع البيولوجي: الأساليب، والفائدة، والقيود". البرمائيات والزواحف . 18 : 1-13 . doi : 10.1163/156853897x00260 .
  47. ↑ غوركزيكا دبليو، تراجانوس إف، جيسيونوفسكا إتش، دارزينكيويتش زد (يوليو 1993). "وجود فواصل في سلاسل الحمض النووي وزيادة حساسية الحمض النووي في موضعه للتفكك في خلايا الحيوانات المنوية البشرية غير الطبيعية: تشبيهًا بموت الخلايا الجسدية المبرمج". بحوث الخلية التجريبية . 207 (1): 202-205 . doi : 10.1006/excr.1993.1182 . PMID 8391465 . 
  48. ↑ إيفنسون، د.ب. (سبتمبر 2017). "يُعدّ تقييم بنية كروماتين الحيوانات المنوية وانقطاعات الحمض النووي جزءًا مهمًا من التقييم السريري لخصوبة الذكور" . علم الذكورة والمسالك البولية الانتقالي . 6 (ملحق 4): ص495- ص 500. doi : 10.21037/tau.2017.07.20 . PMC 5643675. PMID 29082168 .  
  49. ↑ تاناكا تي، هاليكا إتش دي، هوانغ إكس، تراجانوس إف، دارزينكيويتش زد (سبتمبر 2006). "الفسفرة التكوينية للهيستون H2AX وتفعيل ATM، مؤشرات تلف الحمض النووي بواسطة المؤكسدات الداخلية" . دورة الخلية . 5 (17): 1940-1945 . doi : 10.4161/cc.5.17.3191 . PMC 3488278. PMID 16940754 .  
  50. ↑ ماكفيل إس إتش، باناث جيه بي، يو واي، تشو إي، أوليف بي إل (يونيو 2003). "التعبير المعتمد على دورة الخلية للهيستون H2AX المفسفر: انخفاض التعبير في خلايا الطور G1 غير المعرضة للإشعاع، ولكن ليس في الخلايا المعرضة للأشعة السينية". أبحاث الإشعاع . 159 (6): 759-67 . Bibcode : 2003RadR..159..759M . doi : 10.1667/rr3003 . PMID 12751958. S2CID 26093456 .  
  51. ↑ دارزينكيويتش ز، خوان ج، لي إكس، غورزيكا دبليو، موراكامي تي، تراجانوس إف (يناير 1997). "قياس التدفق الخلوي في علم موت الخلايا: تحليل الاستماتة وموت الخلايا العرضي (النخر)" . قياس التدفق الخلوي . 27 (1): 1-20 . doi : 10.1002/(SICI)1097-0320(19970101)27:1 < 1::AID-CYTO2 > 3.0.CO ; 2-L . ​​PMID 9000580 . 
  52. ↑ إدغار آر إتش، نويل سي، مينارد إيه، فرنانديز آر، فيتزباتريك إم، ساجيفسكي إيه، وآخرون . (27-02-2019). "تحديد عدوى المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للميثيسيلين في الدم باستخدام قياس التدفق الخلوي الصوتي الضوئي". في: وانغ إل، أوراييفسكي إيه إيه (محرران). الفوتونات بالإضافة إلى الموجات فوق الصوتية: التصوير والاستشعار 2019. المجلد 10878. الجمعية الدولية للبصريات والضوئيات. ص 1087860. رمز Bibcode : 2019SPIE10878E..60E . doi : 10.1117/12.2510210 . ISBN    978-1-5106-2398-9. S2CID 86428267 . 
  53. ↑ مينون ف، توماس ر، غالي أ.ر، راينهارد س، بروزاك ج (ديسمبر 2014). "بروتوكولات قياس التدفق الخلوي لتحليل المستضدات السطحية والداخلية لأنواع الخلايا العصبية" . مجلة التجارب المصورة (94) e52241. doi : 10.3791/52241 . PMC 4396953. PMID 25549236 .  
  54. ↑ أنتيباس هـ، فيسيس-غارسيا م، ويبول إي، أندرسون-سفان هـ، ريختر-دالفورس أ (يونيو 2018). " منصة شاملة لاختيار وفحص النمط الظاهري عالي الدقة للطفرات البكتيرية باستخدام شريحة النانوويل" . مختبر على رقاقة . 18 (12): 1767-1777 . doi : 10.1039/c8lc00190a . PMC 5996734. PMID 29781496 .  
  55. ↑ ديفي إتش إم (أغسطس 2011). "الحياة والموت وما بينهما: المعاني والأساليب في علم الأحياء الدقيقة" . علم الأحياء الدقيقة التطبيقي والبيئي . 77 (16): 5571-5576 . Bibcode : 2011ApEnM..77.5571D . doi : 10.1128/AEM.00744-11 . PMC 3165249. PMID 21705550 .  
  56. ↑ ينتش، سي إم (1981). "تحليل الساكسيتوكسين الخلوي في الدياتوم Gonyaulax tamarensis var. excavata باستخدام قياس التدفق الخلوي". توكسيكون . 19 (5): 611-21 . Bibcode : 1981Txcn...19..611Y . doi : 10.1016/0041-0101(81)90099-4 . PMID 7197816 . 
  57. ↑ تراسك، بي جيه؛ إنج، جي جيه فان دن؛ إلجيرشويزن، جيه إتش بي دبليو (1982). "تحليل العوالق النباتية باستخدام قياس التدفق الخلوي" . قياس التدفق الخلوي . 2 (4): 258-264 . doi : 10.1002/cyto.990020410 . ISSN 1097-0320 . PMID 6799265 .  
  58. ↑ أولسون، روبرت ج.؛ فرانكل، شيلا ل.؛ تشيشولم، سالي و.؛ شابيرو، هوارد م. (8 أبريل 1983). "جهاز قياس التدفق الخلوي غير مكلف لتحليل إشارات التألق في العوالق النباتية: توزيع الكلوروفيل والحمض النووي". مجلة علم الأحياء البحرية التجريبي والبيئة . 68 (2): 129-144 . Bibcode : 1983JEMBE..68..129O . doi : 10.1016/0022-0981(83)90155-7 . ISSN 0022-0981 . 
  59. ↑ ينتش سي إم، هوران بي كيه، مويرهيد كيه، دورتش كيو، هاوجن إي، ليجندر إل، وآخرون (1983). "قياس التدفق الخلوي وفرز الخلايا: تقنية لتحليل وفرز الجسيمات المائية1" . علم البحيرات والمحيطات . 28 (6): 1275-1280 . Bibcode : 1983LimOc..28.1275Y . doi : 10.4319/lo.1983.28.6.1275 . ISSN 1939-5590 .  
  60. ↑ تشيشولم إس دبليو، أولسون آر جيه، زيتلر إي آر، جوريك آر، ووتربري جيه بي، ويلشماير إن إيه (يوليو 1988). "نوع جديد من البروكلوروفيت الحر المعيشة، وفير في المنطقة الضوئية للمحيط". مجلة نيتشر . 334 (6180): 340-343 . Bibcode : 1988Natur.334..340C . doi : 10.1038/334340a0 . S2CID 4373102 . 
  61. ↑ سوالويل، جيه إي، وريباليت، إف، وأرمبرست، إي في (2011). "سي فلو: جهاز قياس التدفق الخلوي المبتكر أثناء الإبحار للمراقبة المستمرة للعوالق النباتية في المحيط" . علم البحيرات والمحيطات: مناهج . 9 (10): 466-477 . Bibcode : 2011LimOM...9..466S . doi : 10.4319/lom.2011.9.466 . ISSN 1541-5856 . 
  62. ↑ أولسون آر جيه، سوسيك إتش إم (2007). "جهاز تصوير غاطس يعمل بتقنية التدفق لتحليل العوالق النانوية والميكروية: جهاز التصوير الخلوي التدفق" . علم البحيرات والمحيطات: مناهج . 5 (6): 195-203 . Bibcode : 2007LimOM...5..195O . doi : 10.4319/lom.2007.5.195 .
  63. ↑ جاكوبسن إتش إتش، كارستنسن جيه (2011). "FlowCAM: قياس حجم الخلايا وفهم تأثير توزيعات الأحجام على الحجم الحيوي لبنية مجتمع العوالق" . علم البيئة الميكروبية المائية . 65 (1): 75-87 . doi : 10.3354/ame01539 . ISSN 0948-3055 . 
  64. ↑ لونغنيكر ك، شير ب ف، شير إي ب (ديسمبر 2005). "نشاط وتنوع السلالات للخلايا البكتيرية ذات المحتوى العالي والمنخفض من الأحماض النووية ونشاط نظام نقل الإلكترون في نظام بيئي ذي تيارات صاعدة" . علم الأحياء الدقيقة التطبيقي والبيئي . 71 (12): 7737-49 . Bibcode : 2005ApEnM..71.7737L . doi : 10.1128/AEM.71.12.7737-7749.2005 . PMC 1317353. PMID 16332746 .  
  65. ↑ ستيباناوسكاس ر، سيراكي م.إ. (مايو 2007). "مطابقة التطور السلالي والتمثيل الغذائي في البكتيريا البحرية غير المستزرعة، خليةً تلو الأخرى" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 104 (21): 9052-7 . Bibcode : 2007PNAS..104.9052S . doi : 10.1073/pnas.0700496104 . PMC 1885626. PMID 17502618 .  
  66. ↑ تومسون، أ. و.، فوستر، ر. أ.، كروبك، أ.، كارتر، ب. ج.، موسات، ن.، فولوت، د.، وآخرون . (سبتمبر 2012). "بكتيريا زرقاء وحيدة الخلية تعيش في تكافل مع طحلب حقيقي النواة وحيد الخلية". مجلة ساينس . 337 (6101): 1546-1550 . Bibcode : 2012Sci...337.1546T . doi : 10.1126/science.1222700 . PMID: 22997339. S2CID : 7071725 .   
  67. ↑ لوماس، مايكل و.؛ برونك، ديبورا أ.؛ فان دن إنج، جير (15 يناير 2011). "استخدام قياس التدفق الخلوي لقياس المعدلات والعمليات البيوجيوكيميائية في المحيط" . المراجعة السنوية لعلوم البحار . 3 (1): 537-566 . Bibcode : 2011ARMS....3..537L . doi : 10.1146/annurev-marine-120709-142834 . ISSN 1941-1405 . PMID 21329216 .  
  68. ↑ هوكينز إي دي، هوميل إم، تيرنر إم إل، باتي إف إل، ماركهام جيه إف، هودجكين بي دي (2007) . "قياس تكاثر الخلايا اللمفاوية وبقائها وتمايزها باستخدام بيانات السلاسل الزمنية لـ CFSE". بروتوكولات الطبيعة . 2 (9): 2057-2067 . doi : 10.1038/nprot.2007.297 . PMID 17853861. S2CID 13550456 .  
  69. ↑ كواه بي جيه، باريش سي آر (أكتوبر 2010). "استخدام إستر سكسينيميديل ثنائي أسيتات كاربوكسي فلوريسين (CFSE) لمراقبة تكاثر الخلايا الليمفاوية" . مجلة التجارب المصورة (44). doi : 10.3791/2259 . PMC 3185625. PMID 20972413 .  
  70. ↑ جيديما، آي.، فان دير ورف، إن. إم.، بارج، آر. إم.، ويليمز، آر.، فالكنبورغ، جيه. إتش. (أبريل 2004). "فحص جديد قائم على CFSE لتحديد قابلية الخلايا السلفية اللوكيمية للتحلل بواسطة الخلايا التائية السامة للخلايا ضمن مجموعة خلايا مستهدفة غير متجانسة" . مجلة الدم . 103 (7): 2677-2682 . doi : 10.1182/blood-2003-06-2070 . PMID 14630824. S2CID 1984056 .  
  71. ↑ تشو، دونغمي؛ سونغ، وين؛ يانغ، كون؛ كاو، شياوجوان؛ غول، ياسمين؛ وانغ، ويمينغ (2012). "تحديد حجم الجينوم باستخدام قياس التدفق الخلوي لثمانية أنواع من الأسماك ذات الأهمية التجارية في الصين". علم الأحياء الخلوي والتنموي في المختبر. الحيوان . 48 (8 ) : 507-517 . doi : 10.1007/s11626-012-9543-7 . ISSN 1071-2690 . JSTOR 23279365. PMID 22956044. S2CID 255351169 .    

للمزيد من القراءة

  • كاري جيه إل، مكوي جيه بي جونيور، كيرين دي إف (2007). قياس التدفق الخلوي في التشخيص السريري (الطبعة الرابعة  ). شيكاغو، إلينوي: مطبعة الجمعية الأمريكية لعلم الأمراض السريرية (ASCP). رقم ISBN 978-0-89189-548-0.
  • دارزينكيويتش ز، رودرير م، تانكي هـ ج، محررون. (2004). مناهج في بيولوجيا الخلية، قياس التدفق الخلوي . المجلد  75 (  الطبعة الرابعة). إلسيفير / أكاديميك برس. ISBN 0-12-480283-4.
  • دارزينكيويتش ز، روبنسون جيه بي، رودرير إم (2009). طرق قياس التدفق الخلوي الأساسية (  الطبعة الأولى). أمستردام: إلسيفير/أكاديميك برس. ISBN 978-0-12-375045-7.
  • دارزينكيويتش وآخرون،  محررون (2011). التطورات الحديثة في قياس التدفق الخلوي. الجزء أ . مناهج في بيولوجيا الخلية. المجلد  102. إلسيفير/أكاديميك برس. ISBN 978-0-12-374912-3.
  • دارزينكيويتش وآخرون،  محررون (2011). التطورات الحديثة في قياس التدفق الخلوي. الجزء ب . مناهج في بيولوجيا الخلية. المجلد  103. إلسيفير/أكاديميك برس. ISBN 978-0-12-385493-3.
  • لويد د (1993). قياس التدفق الخلوي في علم الأحياء الدقيقة . لندن: سبرينغر-فيرلاغ. ISBN 978-3-540-19796-6.
  • أورميرود إم جي (1999). قياس التدفق الخلوي (  الطبعة الثانية). أكسفورد، المملكة المتحدة: دار نشر بيوس العلمية. رقم ISBN 978-1-85996-107-0.
  • أورميرود، إم جي، محرر. (2000). قياس التدفق الخلوي: منهج عملي (  الطبعة الثالثة). أكسفورد [إنجلترا]: مطبعة جامعة أكسفورد. ISBN 978-0-19-963824-6.
  • أورميرود إم جي (2008). التدفق الخلوي: مقدمة أساسية . ريدهيل: إم جي أورميرود. رقم ISBN 978-0-9559812-0-3أُرشف من المصدر الأصلي بتاريخ 27-05-2011 . تم الاطلاع عليه بتاريخ 19-05-2011 .
  • روبنسون جيه بي وآخرون  (1993). دليل طرق قياس التدفق الخلوي . نيويورك: وايلي-ليس. ISBN 978-0-471-59634-9.
  • شابيرو إتش إم (2003). قياس التدفق الخلوي العملي (  الطبعة الرابعة). نيويورك: وايلي-ليس. رقم ISBN 978-0-471-41125-3.
  • سكلار، ل. أ. (2005). قياس التدفق الخلوي في مجال التقنية الحيوية . نيويورك: مطبعة جامعة أكسفورد. ISBN 978-0-19-515234-0.