العزل (علم الأحياء الدقيقة)

يقوم فنيو المختبر بتلقيح العينة على أطباق أجار صلبة معينة باستخدام طريقة التخطيط أو في وسط زرع سائل ، وذلك حسب هدف العزل:

• إذا رغبنا في عزل مجموعة معينة من البكتيريا، مثل المكورات العقدية من المجموعة أ من مسحة حلق، يمكننا استخدام وسط زرع انتقائي يثبط نمو البكتيريا الأخرى المتوقعة في المزيج (بفضل المضادات الحيوية الموجودة في الآجار)، بحيث يتم "انتقاء" المكورات العقدية فقط، أي تبرز بوضوح. ^{[ 4 ]} لعزل الفطريات، يمكن استخدام آجار سابورو . بدلاً من ذلك، توفر الظروف القاتلة للمكورات العقدية والبكتيريا سالبة الغرام، مثل التركيزات العالية من الملح في آجار ملح المانيتول، بيئة مثالية لبقاء أي مكورات عنقودية موجودة في عينة من بكتيريا الأمعاء، ويعمل الفينول الأحمر في الآجار كمؤشر لدرجة الحموضة ، موضحًا ما إذا كانت البكتيريا قادرة على تخمير المانيتول عن طريق إفراز الحمض في الوسط. في أنواع أخرى من الأجار، تُضاف مواد لاستغلال قدرة الكائن الحي على إنتاج صبغة مرئية (مثل وسط غرناطة لبكتيريا المكورات العقدية من المجموعة ب ) التي تُغير لون مستعمرة البكتيريا ، أو لإذابة أجار الدم عن طريق التحلل الدموي ليسهل رصدها. تتطلب بعض البكتيريا، مثل أنواع الليجيونيلا، مغذيات خاصة أو قدرة على ربط السموم كما في الفحم للنمو، ولذلك يجب استخدام أوساط مثل أجار مستخلص الخميرة بالفحم المخفف .
• إذا رغبنا في عزل أكبر عدد ممكن من السلالات أو جميعها ، فسنحتاج إلى تلقيحها بأوساط غذائية مختلفة، بالإضافة إلى أوساط مُخصبة مثل أجار الدم وأجار الشوكولاتة ، وأوساط زراعة لاهوائية مثل مرق الثيوغليكولات . ولحساب عدد البكتيريا النامية، يمكن تعليقها في أجار سائل قبل أن يتصلب، ثم سكبها في أطباق بتري ، وهي ما تُعرف بـ"طريقة السكب في الطبق"، والتي تُستخدم في علم الأحياء الدقيقة البيئية وعلم الأحياء الدقيقة الغذائية (مثل اختبار منتجات الألبان) لتحديد ما يُسمى بـ"العدد الهوائي للبكتيريا".

بعد تلقيح العينة في أو على الوسط المختار، يتم حضنها في ظل الظروف الجوية المناسبة، مثل الظروف الهوائية أو اللاهوائية أو المحبة للهواء الدقيق  أو مع إضافة ثاني أكسيد الكربون (5٪)، في درجات حرارة مختلفة، على سبيل المثال 37 درجة مئوية في حاضنة أو في ثلاجة للتخصيب البارد، وتحت إضاءة مناسبة، على سبيل المثال بدون ضوء تمامًا ملفوفة بورق أو في زجاجة داكنة للبكتيريا المتفطرة العكرة ، ولفترات زمنية مختلفة، لأن البكتيريا المختلفة تنمو بسرعة مختلفة، تتراوح من ساعات ( الإشريكية القولونية ) إلى أسابيع (مثل المتفطرات ).

يقوم فنيو المختبرات وعلماء الأحياء الدقيقة بفحص الأوساط الغذائية بشكل دوري ومتسلسل بحثًا عن علامات نمو مرئي، ويسجلونها. ويجب أن يتم الفحص في ظل ظروف مواتية لبقاء العزلة، أي في "غرفة لاهوائية" للبكتيريا اللاهوائية على سبيل المثال، وفي ظل ظروف لا تُعرّض الشخص الذي يفحص الأطباق لخطر الإصابة بميكروب شديد العدوى، أي داخل خزانة السلامة البيولوجية لبكتيريا يرسينيا الطاعونية (الطاعون) أو عصية الجمرة الخبيثة (الجمرة الخبيثة) على سبيل المثال.

حتى بعد نمو البكتيريا بشكل واضح، غالبًا ما تكون مختلطة. يعتمد تحديد نوع الميكروب على عزل مستعمرة منفردة ، إذ يعتمد الاختبار الكيميائي الحيوي للميكروب لتحديد خصائصه الفيزيولوجية المختلفة على مزرعة نقية . ولتحضير مزرعة فرعية ، يُتبع أسلوب التعقيم في علم الأحياء الدقيقة ، حيث تُرفع مستعمرة واحدة من سطح الآجار باستخدام حلقة، ثم تُزرع في أرباع طبق الآجار الأربعة، أو على كامل الطبق إذا كانت المستعمرة منفردة وغير مختلطة.

يُتيح تلوين غرام رؤية تركيب جدار الخلية البكتيرية بناءً على اللون الذي تكتسبه البكتيريا بعد سلسلة من خطوات التلوين وإزالة اللون. ^{[ 5 ]} تُتيح هذه العملية تحديد البكتيريا سالبة الغرام وموجبة الغرام . تتلون البكتيريا سالبة الغرام باللون الوردي نظرًا لطبقة الببتيدوغليكان الرقيقة. أما إذا تلونت البكتيريا باللون الأرجواني، نظرًا لطبقة الببتيدوغليكان السميكة، فهي بكتيريا موجبة الغرام. ^{[ 5 ]}

في علم الأحياء الدقيقة السريري، تُستخدم العديد من تقنيات التلوين الأخرى لأنواع معينة من الكائنات الحية (مثل صبغة البكتيريا المقاومة للأحماض للبكتيريا المتفطرة). وقد طُوّرت تقنيات التلوين المناعي، مثل التألق المناعي المباشر، لمسببات الأمراض ذات الأهمية الطبية التي تنمو ببطء ( صبغة الأورامين-رودامين للبكتيريا المتفطرة ) أو التي يصعب زراعتها (مثل أنواع الليجيونيلا الرئوية )، حيث قد تُغيّر نتيجة الاختبار الإدارة القياسية والعلاج التجريبي .

يتضمن الاختبار البيوكيميائي للبكتيريا استخدام مجموعة من الأجار في قوارير لفصل البكتيريا المتحركة عن غير المتحركة . وفي عام 1970، تم تطوير نسخة مصغرة منه، أطلق عليها اسم مؤشر الملف التحليلي .

يعتمد التعرف الناجح عبر تسلسل الجينوم وعلم الجينوم على المزارع النقية.