الحقن المجهري

حقن دقيق لصبغة فلورية في بيض Ciona intestinalis الموضوع في مصفوفة من الحُفر الدقيقة.

الحقن المجهري هو استخدام ماصة زجاجية دقيقة لحقن مادة سائلة على مستوى مجهري أو شبه مجهري . غالبًا ما يكون الهدف خلية حية، ولكن قد يشمل أيضًا الفراغ بين الخلايا. الحقن المجهري عملية ميكانيكية بسيطة، تتضمن عادةً استخدام مجهر مقلوب بقوة تكبير حوالي 200 ضعف (مع أنه يُجرى أحيانًا باستخدام مجهر تشريحي ستيريو بقوة تكبير 40-50 ضعفًا، أو مجهر مركب تقليدي قائم بقوة تكبير مماثلة للمجهر المقلوب).

في عمليات مثل الحقن الخلوي أو حقن النواة الأولية ، تُوضع الخلية المستهدفة تحت المجهر، ويُستخدم جهازان دقيقان للتحكم الدقيق - أحدهما يحمل الماصة والآخر يحمل إبرة شعرية دقيقة يتراوح قطرها عادةً بين 0.5 و 5 ميكرومتر (أكبر عند حقن الخلايا الجذعية في الجنين) - لاختراق غشاء الخلية و/أو الغلاف النووي . [ 1 ] بهذه الطريقة ، يمكن استخدام العملية لإدخال ناقل إلى خلية واحدة. كما يمكن استخدام الحقن المجهري في استنساخ الكائنات الحية ، وفي دراسة بيولوجيا الخلية والفيروسات، ولعلاج ضعف الخصوبة لدى الذكور من خلال الحقن المجهري للبويضة ( ICSI ) . 

تاريخ

بدأ استخدام الحقن المجهري كإجراء بيولوجي في أوائل القرن العشرين، على الرغم من أنه لم يكن شائع الاستخدام حتى سبعينيات القرن العشرين. وبحلول تسعينيات القرن العشرين، ازداد استخدامه بشكل ملحوظ، وأصبح يُعتبر الآن تقنية مخبرية شائعة، إلى جانب دمج الحويصلات ، والتحفيز الكهربائي ، والنقل الكيميائي ، والنقل الفيروسي ، لإدخال كمية صغيرة من مادة ما إلى هدف صغير. [ 2 ]

الأنواع الأساسية

يوجد نوعان أساسيان من أنظمة الحقن المجهري. الأول يُسمى نظام التدفق الثابت ، والثاني يُسمى نظام التدفق النبضي . في نظام التدفق الثابت، وهو نظام بسيط نسبيًا وغير مكلف، ولكنه غير عملي وقديم، يتم ضخ عينة بتدفق ثابت من ماصة دقيقة ، وتُحدد كمية العينة المحقونة بناءً على مدة بقاء الإبرة داخل الخلية. يتطلب هذا النظام عادةً مصدر ضغط مُنظم، وحاملًا للأنابيب الشعرية، وجهاز تحكم دقيق أو خشن. أما نظام التدفق النبضي، فيتيح تحكمًا أكبر ودقة أعلى في كمية العينة المحقونة: يتضمن الترتيب الأكثر شيوعًا للحقن المجهري للبويضة جهاز حقن Eppendorf "Femtojet" مُقترنًا بجهاز Eppendorf "InjectMan"، مع أن الإجراءات التي تشمل أهدافًا أخرى تستخدم عادةً معدات أقل تكلفة ذات قدرات مماثلة. نظرًا لزيادة التحكم في موضع الإبرة وحركتها، بالإضافة إلى دقة حجم المادة المحقونة، فإن تقنية التدفق النبضي عادةً ما تُلحق ضررًا أقل بالخلية المُستقبلة مقارنةً بتقنية التدفق الثابت. ومع ذلك، فإن خط إنتاج إيبندورف، على الأقل، يتميز بواجهة مستخدم معقدة ، وعادة ما تكون مكونات نظامه الخاصة أغلى بكثير من تلك اللازمة لإنشاء نظام تدفق ثابت أو من أنظمة حقن التدفق النبضي الأخرى. [ 3 ]

حقن النواة الأولية

رسم تخطيطي لعملية حقن الحيوانات المنوية داخل البويضة البشرية. يقوم جهاز التلاعب الدقيق على اليسار بتثبيت البويضة في مكانها بينما يقوم جهاز الحقن الدقيق على اليمين بإيصال حيوان منوي واحد.

حقن النواة الأولية هو تقنية تُستخدم لإنتاج كائنات معدلة وراثيًا عن طريق حقن المادة الوراثية في نواة البويضة المخصبة . وتُستخدم هذه التقنية بشكل شائع لدراسة دور الجينات باستخدام نماذج حيوانية من الفئران.

حقن النواة الأولية في الفئران

يُعدّ حقن النواة الأولية للحيوانات المنوية للفئران أحد أكثر طريقتين شيوعًا لإنتاج حيوانات معدلة وراثيًا (إلى جانب الهندسة الوراثية للخلايا الجذعية الجنينية ). [ 4 ] ولنجاح عملية الحقن، يجب حقن المادة الوراثية (عادةً الحمض النووي الخطي ) بينما تكون المادة الوراثية للبويضة والحيوان المنوي منفصلة (أي في مرحلة النواة الأولية ). [ 5 ] وللحصول على هذه البويضات، تُحفّز الفئران عادةً على التبويض باستخدام موجهات الغدد التناسلية . [ 6 ] وبمجرد حدوث الانسداد، تُجمع البويضات من الفأرة وتُحقن بالمادة الوراثية. ثم تُزرع البويضة في قناة فالوب لحيوان حامل كاذبًا . [ 5 ] وعلى الرغم من اختلاف الكفاءة، إلا أن 10-40% من الفئران المولودة من هذه البويضات المزروعة قد تحتوي على التركيب المحقون . [ 6 ] ويمكن بعد ذلك تربية الفئران المعدلة وراثيًا لإنتاج سلالات معدلة وراثيًا.

انظر أيضاً

مراجع

  1. ديفيد ب. بور؛ ماثيو ر. ألين (11 يونيو 2013). علم الأحياء العظمي الأساسي والتطبيقي . أكاديميك. ص  157. ISBN 978-0-12-391459-0تم الاطلاع عليه بتاريخ 15 يوليو 2013 .
  2. ^ خوان كارلوس لاكال. روزاريو بيرونا؛ جيمس فيراميسكو (11 يونيو 1999). الحقن المجهري . سبرينغر. ص. 9. رقم ISBN  978-3-7643-6019-1تم الاطلاع عليه بتاريخ 13 يوليو 2013 .
  3. روبرت د. غولدمان؛ ديفيد ل. سبيكتور (1 يناير 2005). تصوير الخلايا الحية: دليل المختبر . مختبر كولد سبرينغ هاربور. ص 54. ISBN  978-0-87969-683-2تم الاطلاع عليه بتاريخ 15 يوليو 2013 .
  4. هاينز بيتر ناشوير (2010). استقرار الجينوم والأمراض البشرية . سبرينغر. ص 328. ISBN  978-90-481-3471-7تم الاطلاع عليه بتاريخ 15 يوليو 2013 .
  5. 1 2 مولين، آن. "الحقن النووي الأولي" . جامعة تولين.
  6. 1 2 "حقن النواة الأولية" . جامعة كاليفورنيا في سان دييغو . تم الاطلاع عليه بتاريخ 6 ديسمبر 2019 .