اختبار الأوكسيداز

📅 آخر تحديث: ٦ أغسطس ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٦ أغسطس ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 2 صور
الموسوعة الحرة

يُستخدم اختبار الأوكسيداز لتحديد ما إذا كان الكائن الحي يمتلك إنزيم سيتوكروم سي أوكسيداز . ويُستخدم هذا الاختبار كوسيلة مساعدة للتمييز بين أنواع النيسرية ، والموراكسيلا ، والكامبيلوباكتر، والباستوريلا ( الموجبة للأوكسيداز). كما يُستخدم أيضًا للتمييز بين الزائفة والأنواع ذات الصلة. [ 1 ]

تصنيف

قد تكون السلالات إما موجبة الأكسيداز (OX+) أو سالبة الأكسيداز (OX-).

OX+

يشير OX+ عادةً إلى أن البكتيريا تحتوي على سيتوكروم سي أوكسيداز (المعروف أيضًا باسم المركب الرابع) وبالتالي يمكنها استخدام الأكسجين لإنتاج الطاقة عن طريق تحويل O2 إلى H2O2 أو H2O من خلال سلسلة نقل الإلكترون .

تكون بكتيريا Pseudomonadaceae عادةً OX+. [ 1 ]

تُعتبر المكورات الثنائية سالبة الغرام من نوعي النيسرية والموراكسيلا إيجابية الأوكسيداز. [ 2 ]

العديد من العصيات الحلزونية المنحنية سالبة الجرام هي أيضًا موجبة الأكسيداز، والتي تشمل هيليكوباكتر بيلوري ، وضمات الكوليرا ، وكامبيلوباكتر جيجوني .

متغير الأكسيداز

قد تكون بكتيريا الليجيونيلا الرئوية إيجابية للأكسيداز. [ 3 ]

OX−

يشير OX− عادةً إلى أن البكتيريا لا تحتوي على سيتوكروم سي أوكسيداز، وبالتالي، إما أنها لا تستطيع استخدام الأكسجين لإنتاج الطاقة من خلال سلسلة نقل الإلكترون أو أنها تستخدم سيتوكروم مختلف لنقل الإلكترونات إلى الأكسجين.

تكون البكتيريا المعوية عادةً سالبة الأكسجين. [ 4 ]

الآلية

شرطة مدينة تورنتو
DMPD

يستخدم الاختبار أقراصًا مشبعة بكواشف مثل N,N,N′,N′- رباعي ميثيل-بارا- فينيلين ديامين (TMPD) (أو N,N- ثنائي ميثيل-بارا- فينيلين ديامين (DMPD)، وهو مؤشر آخر للأكسدة والاختزال ). يكون لون الكاشف أزرق داكنًا إلى بني محمر عند أكسدته، وعديم اللون عند اختزاله. تمتلك البكتيريا الموجبة للأكسيداز سيتوكروم أوكسيداز أو إندوفينول أوكسيداز (بروتين هيمي يحتوي على الحديد). [ 5 ] يحفز كلا الإنزيمين نقل الإلكترونات من المركبات المانحة ( NADH ) إلى مستقبلات الإلكترونات (عادةً الأكسجين). يعمل كاشف الاختبار TMPD كمانح إلكترونات اصطناعي لإنزيم الأكسيداز. يُكوّن الكاشف المؤكسد مركب إندوفينول الأزرق الملون . يوجد نظام السيتوكروم عادةً فقط في الكائنات الهوائية القادرة على استخدام الأكسجين كمستقبل نهائي للإلكترونات. الناتج النهائي لهذا الأيض هو إما الماء أو بيروكسيد الهيدروجين (الذي يتم تكسيره بواسطة الكاتالاز ). [ 1 ]

إجراءات

  1. بلل كل قرص بحوالي أربع حلقات تلقيح من الماء منزوع الأيونات.
  2. استخدم حلقة لنقل كتلة كبيرة من البكتيريا النقية إلى القرص بطريقة معقمة.
  3. راقب القرص لمدة تصل إلى ثلاث دقائق. إذا تحول لون منطقة التلقيح من الأزرق الداكن إلى البني المحمر إلى الأسود تقريبًا، فإن النتيجة إيجابية. أما إذا لم يحدث أي تغيير في اللون خلال ثلاث دقائق، فإن النتيجة سلبية.

كبديل، يمكن تحضير البكتيريا الحية المزروعة على أطباق أجار الصويا التريبتيكي باستخدام تقنية معقمة عن طريق التلقيح بخط واحد. تُحضن الأطباق الملقحة عند درجة حرارة 37  درجة مئوية لمدة 24-48 ساعة لتكوين المستعمرات. يجب استخدام مستحضرات بكتيرية طازجة. بعد نمو المستعمرات على الوسط، تُضاف 2-3 قطرات من كاشف DMPD إلى سطح كل كائن حي مُراد اختباره.

  • ستؤدي نتيجة الاختبار الإيجابية (OX+) إلى تغير اللون من البنفسجي إلى الأرجواني، في غضون 10-30 ثانية.
  • ستؤدي نتيجة الاختبار السلبية (OX-) إلى ظهور لون وردي فاتح أو عدم وجود أي لون.

مراجع

  1. 1 2 3 ماكفادين جيه إف، محرر. الاختبارات البيوكيميائية لتحديد البكتيريا الطبية. الطبعة الثالثة. فيلادلفيا: ليبينكوت ويليامز وويلكنز؛ 2000. ص 363-7
  2. ↑ إس تي، كوان؛ ستيل، كيه جيه (1993). دليل كوان وستيل لتحديد البكتيريا الطبية (  الطبعة الثالثة). كامبريدج: مطبعة جامعة كامبريدج. ISBN 9780511527104.
  3. ↑ "UK SMI" (PDF) .
  4. ↑ فارمر جيه جيه، فانينغ جي آر، هانتلي-كارتر جي بي، وآخرون (مايو 1981). "كلوفيرا، جنس جديد (مُعاد تعريفه) في عائلة الأمعائيات: تحديد كلوفيرا أسكورباتا نوع جديد وكلوفيرا كريوكريسنس نوع جديد في العينات السريرية" . مجلة علم الأحياء الدقيقة السريرية 13 ( 5): 919-933 . doi : 10.1128/jcm.13.5.919-933.1981 . PMC 273917. PMID 7240403 .   
  5. ↑ إيزنبرغ إتش دي، محرر. دليل إجراءات علم الأحياء الدقيقة السريري. الجمعية الأمريكية لعلم الأحياء الدقيقة؛ 2004. ص. 3.3.2-3.3.2.13.
  • الجمعية الأمريكية لعلم الأحياء الدقيقة، بروتوكول اختبار الأوكسيداز. 2013. مكتبة ASM MicrobeLibrary، 1-9.
  • تشنغ دبليو جيه، لين سي دبليو، وو تي جي، سو سي إس، هسيه إم إس. 2013. معايرة شرائط اختبار تعتمد على أوكسيداز الجلوكوز لقياس الدم الشعيري باستخدام عينات دم وريدي مشبع بالأكسجين. مجلة كلينيكا كيميكا أكتا. 415، 152-157.
  • كوركيا إل، هوبولت آر، كينكينيل بي، نغوين. 2015. التهاب الملتحمة سريع التطور الناتج عن بكتيريا باستوريلا ملتوسيدا، والذي يحدث بعد التلقيح المباشر بقطرات حيوانية في مضيف ضعيف المناعة. مجلة بي إم سي لطب العيون 15.1، 21.
  • فلوش سي، ألاركون-غوتيريز إي، كريكيت إس. 2007. فحص ABTS لنشاط فينول أوكسيداز في التربة. مجلة طرق علم الأحياء الدقيقة. 71، 319-324.
  • غابي دبليو إل، هادلي سي. 1957. اختبار معملي عملي لتحديد هوية الزائفة الزنجارية. مجلة علم البكتيريا. 74، 356-358.
  • جيلاني م، منير ت، لطيف م، جيلاني م، رحمن س، أنصاري م، حفيظ أ، نجيب س، سعد ن. 2015. فعالية دوريبينيم في المختبر ضد الزائفة الزنجارية والأسينيتوباكتر بوماني بواسطة اختبار E. مجلة كلية الأطباء والجراحين في باكستان 25، 726-729.
  • كوس إس، تانر إي إي إل، أوردوفاس-مونتانيس إم، كومبتون آر جي. 2017. التعرف الكهروكيميائي والقياس الكمي لتعبير السيتوكروم سي في البكتيريا الهوائية/اللاهوائية باستخدام رباعي ميثيل فينيلين ديامين (TMPD). العلوم الكيميائية 8.11، 7682-7688. على الإنترنت.
  • إيفانوفا ن.ف، زيملاك ت.س، هانر ر.هـ، هيبرت ب.د. ن. 2007. مزيج البادئات الشاملة لترميز الحمض النووي للأسماك. ملاحظات علم البيئة الجزيئية. 7، 544-54.
  • برنس سي. 2009. الدليل العملي لعلم الأحياء الدقيقة الطبية (جايبي براذرز ميديكال بابليشرز (بي) ليمتد) 112-112.
  • شيلدز ب، كاثكارت ل. 2013. بروتوكول اختبار الأوكسيداز - المكتبة. الجمعية الأمريكية لعلم الأحياء الدقيقة، مكتبة ASM MicrobeLibrary، 1-5.
  • ستيل ك. ج. 1961. تفاعل الأكسيداز كأداة تصنيفية. مجلة علم الأحياء الدقيقة العام. 25، 297-306.
  • زانديريجو وآخرون، 2018. ارتباط [11C]هارمين بأكسيداز أحادي الأمين أ في الدماغ: خصائص إعادة الاختبار والقياس الكمي غير الجراحي. التصوير الجزيئي وعلم الأحياء. 20، 667-681.