اختبار انتشار القرص

تُوحّد جميع جوانب إجراء كيربي-باور لضمان نتائج متسقة ودقيقة. ولذلك، يجب على المختبر الالتزام بهذه المعايير. يجب أن يكون الوسط المستخدم في اختبار كيربي - باور عبارة عن أجار مولر-هينتون  بعمق 4 مم فقط ، يُسكب في أطباق بتري بقطر 100  مم أو 150  مم. يجب أن يكون مستوى الرقم الهيدروجيني للأجار بين 7.2 و7.4. تُحضّر اللقاحات البكتيرية بتخفيف مزرعة سائلة لتتوافق مع معيار عكارة ماكفارلاند 0.5 ، وهو ما يعادل تقريبًا 150 مليون خلية لكل مل. ^{[ 1 ]}

باستخدام تقنية التعقيم ، تُجمع مزرعة سائلة لكائن حي محدد باستخدام مسحة معقمة . في حالة البكتيريا سالبة الغرام ، يُزال السائل الزائد من المسحة بالضغط عليها برفق أو تدويرها على الجدار الداخلي للأنبوب. ثم تُمرر المسحة على طبق أجار مولر-هينتون لتكوين طبقة بكتيرية. وللحصول على نمو متجانس، يُمرر طبق الأجار بالمسحة في اتجاه واحد، ثم يُدار 120 درجة ويُمرر مرة أخرى، ثم يُدار 120 درجة أخرى ويُمرر مرة أخرى. باستخدام موزع أقراص المضادات الحيوية، تُوضع الأقراص التي تحتوي على مضادات حيوية محددة على الطبق. يجب القيام بذلك في غضون 15 دقيقة من التلقيح. تُستخدم ملقط معقم باللهب للضغط برفق على كل قرص على الأجار والتأكد من التصاقه. ثم تُحضن الأطباق طوال الليل، عادةً عند درجة حرارة 35 درجة مئوية. يجب تحضين الأطباق في غضون 15 دقيقة من وضع أقراص المضادات الحيوية. ^{[ 1 ]} 

تتطلب بعض أنواع البكتيريا إضافة محلول بنسبة 5% من دم الخيل المُزال منه الفيبرين ميكانيكيًا و β-NAD (وسط MH-F). ^{[ 1 ]} يوضح الجدول التالي متطلبات الوسط الغذائي للكائنات الحية الدقيقة الشائعة الاختبار:

لضمان دقة نتائج الاختبار، يجب استخدام أساليب مراقبة الجودة . ولمراقبة أداء الاختبار، تُستخدم سلالات بكتيرية خاصة كضوابط إيجابية أو سلبية. عند اختبار فعالية إنزيم بيتا لاكتاماز، تُستخدم سلالات خاصة تُظهر مقاومةً لمضادات بيتا لاكتام. بالإضافة إلى ذلك، تُستخدم أوساط زرع محددة لاختبار بعض المضادات الحيوية. على سبيل المثال، عند اختبار حساسية الكوتريموكسازول ، يُوصى باستخدام أوساط زرع تحتوي على فائض من الثايمين والثيميدين . ^{[ 1 ]} يوضح الجدول التالي سلالات مراقبة الجودة الشائعة الاستخدام في طريقة انتشار القرص:

تُوضع أقراص تحتوي على تراكيز متزايدة من المضادات الحيوية على طبقة بكتيرية مُلقّحة على سطح الآجار، ثم تُحضن الأطباق. تُقاس أقطار مناطق التثبيط من حافة القرص إلى نهاية المنطقة الشفافة. يكون التفسير أكثر تعقيدًا في حالة وجود حساسية مختلطة. تُرسَم هذه البيانات كأبعاد خطية أو مربعات للمسافات كدالة للوغاريتم الطبيعي لتركيز المضاد الحيوي في الأقراص. يُحدد الحد الأدنى للتركيز المثبط (MIC) من نقطة تقاطع خط الانحدار الخطي مع المحور الصادي. ^{[ 31 ]} نقطة التقاطع نفسها هي لوغاريتم MIC. يرتبط ميل خط الانحدار بمعامل انتشار ذلك المضاد الحيوي المحدد في الآجار. ^{[ 28 ]}

تُعدّ طريقة RAST وسيلة سريعة لتحديد حساسية المضادات الحيوية، وقد طُوّرت كتعديل لاختبار انتشار القرص الكلاسيكي. تسمح هذه الطريقة بتقصير فترة الحضانة إلى 16-20 ساعة. تُقرأ نتائج الاختبار بعد 4 و6 و8 و16-20 ساعة. بالمقارنة مع الطريقة القياسية، لا تُظهر RAST مناطق تثبيط واضحة خلال هذه الفترة الزمنية القصيرة (جميع أنواع البكتيريا، باستثناء المكورات الرئوية، لديها فرصة قراءة نتائجها بعد 6 ساعات تزيد عن 90%). أما بالنسبة لسلالات مراقبة الجودة، فتُخفف بنسبة 1:1000000 ويُضاف إليها دم منزوع الفيبرين من الخيول أو الأغنام. يجب استخدام جداول نقاط القطع الخاصة بـ RAST عند تفسير النتائج نظرًا لاختلافات معايرة الطريقة. ^{[ 32 ]}

تشمل سلالات مراقبة الجودة المعتمدة ما يلي: E. coli ATCC 25922، P. aeruginosa ATCC 27853، S. aureus ATCC 29213، E. faecalis ATCC 29212، S. pneumoniae ATCC 49619. ^{[ 33 ]}

تُوضع أقراص تحتوي على مضادات حيوية على طبق أجار مولر-هينتون غير مُلقّح وتُحضن لمدة ساعتين. بعد ذلك، تُزال الأقراص ويُضاف معلق بكتيري مُحضّر مسبقًا باستخدام طريقة التخفيف الدقيق في المرق، ثم يُوضع قرص آخر يحتوي على مضاد حيوي مختلف في نفس موضع القرص السابق تمامًا. بعد التحضين لمدة 16-20 ساعة، تُقارن النتائج بقيم التركيز المثبط الأدنى (MIC) للمضاد الحيوي الأول. ومن أمثلة طريقة ما قبل الانتشار اختبار فعالية سيفتزيديم/أفيباكتام (الأقراص الأولية) في المختبر مقارنةً بأزتريونام (الأقراص الثانوية). ^{[ 37 ]}

يمكن استخدام طريقة انتشار القرص لاختبار الحساسية لمضادات الفطريات. ^{[ 38 ] [ 39 ]}

بالمقارنة مع الطرق التقليدية القائمة على الأقراص، تستخدم تقنية الفصل الحيوي بالتحليل الكروماتوغرافي طبقة رقيقة لفصل مكونات الخليط المختبر. بعد ذلك، يمكن وضع صفيحة الفصل الكروماتوغرافي على الأجار الملقح والسماح لها بالانتشار فيه ( الفصل الحيوي بالتماس )، أو تغطيتها بمرق يحتوي على الميكروبات ( الفصل الحيوي المباشر ). ثم تُحضن العينة وتُقاس مناطق التثبيط. ^{[ 41 ] [ 42 ] [ 40 ]} بدلاً من ذلك، يمكن تغطية صفيحة الفصل الكروماتوغرافي بالأجار المنصهر في تقنية الفصل الحيوي بالتحليل الكروماتوغرافي بطبقة الأجار . ^{[ 43 ]}

لتصوير مناطق التثبيط في التصوير الحيوي المباشر، تُستخدم كواشف تكشف عن نشاط نازعة الهيدروجين (مثل أملاح التترازوليوم ، التي تحولها نازعات الهيدروجين الميكروبية إلى فورمازان ملون ). ^{[ 41 ]}