الصبغة السلبية

الموسوعة الحرة

في علم المجهر ، يُعدّ التلوين السلبي طريقةً راسخةً، تُستخدم غالبًا في التشخيص المجهري، لتمييز عينة رقيقة عن سائل معتم بصريًا . في هذه التقنية، تُلوّن الخلفية ، بينما تبقى العينة الأصلية سليمة، وبالتالي مرئية. وهذا يختلف عن التلوين الإيجابي ، حيث تُلوّن العينة الأصلية.

المجهر الضوئي ذو المجال الساطع

في المجهر الضوئي ذي المجال الساطع ، يُجرى التلوين السلبي عادةً باستخدام سائل حبر أسود مثل النيغروسين والحبر الهندي . تُخلط العينة، كزرع بكتيري رطب مُنتشر على شريحة زجاجية، مع الصبغة السلبية وتُترك لتجف. عند فحصها بالمجهر، تظهر الخلايا البكتيرية، وربما أبواغها ، فاتحة اللون على خلفية داكنة محيطة بها. وقد طُوّرت طريقة بديلة باستخدام قلم تحديد عادي مقاوم للماء لتطبيق الصبغة السلبية. [ 1 ]

المجهر الإلكتروني النافذ

في حالة المجهر الإلكتروني النافذ ، ترتبط عتامة المادة للإلكترونات بالعدد الذري ، أي عدد البروتونات. تشمل بعض الأصباغ السلبية المناسبة موليبدات الأمونيوم ، وأسيتات اليورانيل ، وفورمات اليورانيل ، وحمض الفوسفوتنجستيك ، ورباعي أكسيد الأوزميوم ، وفيريسيانيد الأوزميوم [ 2 ] ، وأوروغلوكوثيونات . وقد تم اختيار هذه الأصباغ لقدرتها العالية على تشتيت الإلكترونات، بالإضافة إلى امتصاصها الجيد للمواد البيولوجية. تكون التراكيب التي يمكن تلوينها سلبًا أصغر بكثير من تلك التي تُدرس بالمجهر الضوئي. في هذه الدراسة، تُستخدم هذه الطريقة لرؤية الفيروسات ، والبكتيريا، وأسواط البكتيريا ، وتراكيب الأغشية البيولوجية ، والبروتينات أو تجمعات البروتينات، والتي تتميز جميعها بقدرة منخفضة على تشتيت الإلكترونات. بعض الأصباغ، مثل رباعي أكسيد الأوزميوم وفيريسيانيد الأوزميوم، نشطة كيميائيًا للغاية. باعتبارها عوامل مؤكسدة قوية، فإنها تربط الدهون بشكل رئيسي عن طريق التفاعل مع روابط الكربون-كربون غير المشبعة، وبالتالي تثبت الأغشية البيولوجية في مكانها في عينات الأنسجة وتصبغها في الوقت نفسه. [ 3 ] [ 4 ]

يُعدّ اختيار الصبغة السلبية في المجهر الإلكتروني بالغ الأهمية. فقد أظهرت دراسة مبكرة لفيروسات النبات، باستخدام عينات أوراق مُلوّنة سلبًا من نبات مُصاب، وجود فيروسات كروية الشكل فقط مع صبغة معينة، وفيروسات عصوية الشكل فقط مع صبغة أخرى. وكان الاستنتاج المُؤكّد أن هذا النبات مُصاب بعدوى مُختلطة بفيروسين مُنفصلين. لا ينبغي أبدًا إجراء التلوين السلبي، سواءً على مستوى المجهر الضوئي أو المجهر الإلكتروني، مع الكائنات المُعدية إلا باتباع احتياطات السلامة الصارمة. عادةً ما يكون التلوين السلبي طريقة تحضير لطيفة جدًا، وبالتالي لا يُقلّل من احتمالية إصابة المُشغّل بالعدوى.

تطبيقات أخرى

تحديد أطوار الدهون الصفائحية (le) والمذيلات العكسية (M) والأسطوانات السداسية العكسية H -II (H) عن طريق التلوين السلبي.

كما استُخدمت تقنية المجهر الإلكتروني النافذ بالتلوين السلبي بنجاح لدراسة وتحديد تجمعات الدهون المائية مثل الليبوسومات الصفائحية (le)، والمذيلات الكروية المقلوبة (M)، والأطوار الأسطوانية السداسية المقلوبة HII (H) (انظر الشكل). [ 5 ]

مراجع

  1. ↑ وويست، س؛ ديمتشيك، ب (1991). "نسخة جديدة من الصبغة السلبية" . علم الأحياء الدقيقة التطبيقي والبيئي . 57 (6) . الجمعية الأمريكية لعلم الأحياء الدقيقة: 1858-1859 . doi : 10.1128/aem.57.6.1858-1859.1991 . ISSN 0099-2240 . PMC 183484. PMID 1714705 .   
  2. ↑ د. تشادويك (2002). دور الشبكة الساركوبلازمية في العضلات الملساء . جون وايلي وأولاده. الصفحات 259-264 . ISBN  0-470-84479-5.
  3. ↑ بوزولا، جون جيه؛ راسل، لوني دي. (1999). "تحضير العينات للمجهر الإلكتروني النافذ" . المجهر الإلكتروني : المبادئ والتقنيات لعلماء الأحياء . سودبري، ماساتشوستس: جونز وبارتليت. ص 21-31 . ISBN   978-0-7637-0192-5.
  4. ↑ م. أ. حياة (2000). مبادئ وتقنيات المجهر الإلكتروني: التطبيقات البيولوجية . مطبعة جامعة كامبريدج. ص 45-61 . ISBN  0-521-63287-0.
  5. ↑ ياشروي، آر سي (1990). "التشتت الصفائحي وانفصال الطور لدهون غشاء البلاستيدات الخضراء بواسطة المجهر الإلكتروني ذي التلوين السلبي". مجلة العلوم البيولوجية . 15 (2). سبرينغر ساينس آند بيزنس ميديا ​​ذ.م.م: 93-98 . doi : 10.1007/bf02703373 . ISSN 0250-5991 . S2CID 39712301 .