المجهر الموضعي المُنشط ضوئيًا

📅 آخر تحديث: ٤ أغسطس ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٤ أغسطس ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 13 صور
الموسوعة الحرة

يُعدّ كلٌّ من مجهر التموضع المُنشَّط ضوئيًا ( PALM أو FPALM ) [ 1 ] [ 2 ] ومجهر إعادة البناء البصري العشوائي (STORM) [ 3 ] من أساليب التصوير المجهري الفلوري واسع المجال (على عكس تقنيات المسح النقطي مثل مجهر المسح الليزري متحد البؤر )، والتي تُتيح الحصول على صور بدقة تتجاوز حدّ الانعراج . طُرحت هذه الأساليب في عام 2006 في أعقاب الانتشار الواسع لأساليب المجهر البصري فائق الدقة ، واختيرت كأفضل أساليب عام 2008 من قِبَل مجلة Nature Methods . [ 4 ] وقد حفّز اكتشاف أنواع جديدة وهندسة طفرات البروتينات الفلورية التي تُظهر خاصية التلون الضوئي القابلة للتحكم ، مثل البروتين الفلوري الأخضر المُنشَّط ضوئيًا، تطويرَ تقنية PALM كطريقة تصوير بيوفيزيائية مُوجَّهة . مع ذلك، فقد اعتمد التطوير المُصاحب لتقنية STORM، التي تشترك في المبدأ الأساسي نفسه، في البداية على استخدام أصباغ السيانين المزدوجة . إحدى جزيئات الزوج (تسمى المنشط)، عند إثارتها بالقرب من الحد الأقصى لامتصاصها، تعمل على إعادة تنشيط الجزيء الآخر (يسمى المراسل) إلى الحالة الفلورية.

يُستخدم عدد متزايد من الأصباغ في تقنيات PALM وSTORM والتقنيات ذات الصلة، وتشمل هذه الأصباغ كلاً من الفلوروفورات العضوية والبروتينات الفلورية. بعضها متوافق مع تصوير الخلايا الحية، بينما يسمح البعض الآخر بالحصول على بيانات أسرع أو وسم أكثر كثافة. يعتمد اختيار الفلوروفور المناسب في النهاية على التطبيق وعلى خصائصه الضوئية الفيزيائية الأساسية. [ 5 ]

شهدت كلتا التقنيتين تطورات تقنية كبيرة، [ 6 ] ولا سيما السماح بالتصوير متعدد الألوان والامتداد إلى ثلاثة أبعاد، مع أفضل دقة محورية حالية تبلغ 10  نانومتر في البعد الثالث تم الحصول عليها باستخدام نهج تداخلي مع عدستين موضوعيتين متقابلتين تجمعان الفلورة من العينة. [ 7 ]

مبدأ

تمثيل تخطيطي لإعادة بناء صورة عالية الدقة عن طريق تحديد مركز ثقل العديد من الصور منخفضة الدقة لمصادر ضوئية نقطية الشكل

تُجرى عملية الفحص المجهري الفلوري التقليدي عن طريق تلوين العينة بشكل انتقائي بجزيئات فلورية ، إما مرتبطة بأجسام مضادة كما في الكيمياء المناعية النسيجية ، أو باستخدام بروتينات فلورية مُدمجة وراثيًا مع الجينات المستهدفة. وعادةً، كلما زاد تركيز الفلوروفورات، كان تباين صورة الفلورة أفضل.

يمكن رؤية جزيء فلوري واحد تحت المجهر (أو حتى بالعين المجردة [ 8 ] ) إذا كان عدد الفوتونات المنبعثة مرتفعًا بما يكفي، وفي المقابل، كانت الخلفية منخفضة بما يكفي. الصورة ثنائية الأبعاد لمصدر نقطي تُرى تحت المجهر هي بقعة ممتدة، تُطابق قرص آيري (جزء من دالة انتشار النقطة ) لنظام التصوير. إن القدرة على تحديد جزيئين فلوريين متقاربين ككيانين منفصلين محدودة بسبب حيود الضوء. ويتم قياس ذلك بمعيار آبي ، الذي ينص على أن المسافة الدنياد{\displaystyle d}يُعطى ذلك الذي يسمح بحل مشكلتين نقطيتين بواسطة

د=λ2شمالأ{\displaystyle d={\frac {\lambda }{2NA}}}

أينλ{\displaystyle \lambda }يمثل طول موجة الانبعاث الفلوري، وNA يمثل الفتحة العددية للمجهر. يبلغ الحد النظري للدقة عند أقصر طول موجة إثارة عملي حوالي 150  نانومتر في البعد الجانبي، ويقترب من 400  نانومتر في البعد المحوري (عند استخدام عدسة موضوعية ذات فتحة عددية 1.40 وطول موجة إثارة 400  نانومتر).

مع ذلك، إذا أمكن تمييز انبعاثات جزيئين فلوريين متجاورين، أي تحديد الفوتونات الصادرة من كل منهما، فمن الممكن التغلب على حد الانعراج. [ 9 ] بمجرد جمع مجموعة من الفوتونات من جزيء معين، تتشكل بقعة محدودة الانعراج في مستوى صورة المجهر. يمكن إيجاد مركز هذه البقعة بمطابقة شكل الانبعاث المرصود مع دالة هندسية معروفة، عادةً ما تكون دالة غاوسية ثنائية الأبعاد. يتناسب الخطأ في تحديد مركز باعث نقطي، تقريبًا، عكسيًا مع الجذر التربيعي لعدد الفوتونات المنبعثة، وإذا جُمع عدد كافٍ من الفوتونات، فمن السهل الحصول على خطأ في تحديد الموقع أصغر بكثير من دالة انتشار النقطة الأصلية.

لا يمكن التمييز بين مصادر الإشعاع المتعددة المتقاربة. ولا يمكن تحديد موقع مصدر نقطي إلا إذا تم تحديد الفوتونات المنبعثة منه وتمييزها عن تلك المنبعثة من الجزيئات المجاورة.

إن خطوتي تحديد وتحديد موقع جزيئات الفلورة الفردية في بيئة كثيفة حيث يوجد الكثير منها تشكلان أساس PALM و STORM وتطويرهما.

على الرغم من وجود العديد من الطرق لتحديد الجزيئات، فقد برزت خاصية التغير اللوني الضوئي لبعض الفلوروفورات كأكثر الطرق الواعدة لتمييز الجزيئات المتجاورة من خلال فصل انبعاثاتها الفلورية زمنيًا. وبتشغيل مجموعات فرعية متفرقة عشوائيًا من الفلوروفورات باستخدام ضوء ذي طول موجي محدد، يمكن إثارة كل جزيء على حدة وتصويره وفقًا لأطيافه. ولتجنب تراكم الفلوروفورات النشطة في العينة، والتي قد تتدهور في النهاية إلى صورة محدودة بالحيود، تُستغل ظاهرة التبييض الضوئي التلقائي في تقنية PALM، بينما يُستغل التبديل العكسي بين حالة التألق وحالة الإيقاف في تقنية STORM.

التنشيط الضوئي، والتحديد الموضعي، والتبييض

باختصار، تعتمد تقنيتا PALM وSTORM على جمع عدد كبير من الصور تحت المجهر الفلوري، حيث تحتوي كل صورة على عدد قليل من جزيئات الفلوروفور النشطة المعزولة. يتيح تسلسل التصوير إجراء العديد من دورات الانبعاث اللازمة لتنشيط كل جزيء فلوروفور عشوائيًا من حالة غير باعثة للضوء (أو ذات باعث أقل) إلى حالة ساطعة، ثم العودة إلى حالة غير باعثة للضوء أو حالة باهتة. خلال كل دورة، تُحفظ كثافة الجزيئات المنشطة منخفضة بما يكفي بحيث لا تتداخل الصور الجزيئية لجزيئات الفلوروفور الفردية عادةً.

إطار واحد من كاميرا CCD يعرض بروتينات فلورية فردية تم إثارتها بتقنية الانعكاس الداخلي الكلي.
سلسلة من الإطارات تحتوي على صور لجزيئات مفردة

تحديد موقع الفلوروفورات الفردية

في كل صورة من التسلسل، يتم حساب موضع الفلوروفور بدقة أكبر من حد الانعراج - في النطاق النموذجي من بضعة إلى عشرات النانومترات - ويتم استخدام المعلومات الناتجة عن موضع مراكز جميع الجزيئات الموضعية لبناء صورة PALM أو STORM فائقة الدقة.

دقة تحديد الموقعσ{\displaystyle \sigma }يمكن حسابها وفقًا للصيغة التالية:

σ=(sأنا2+أ212شمال)⋅(169+8πsأنا2ب2أ2شمال2){\displaystyle \sigma ={\sqrt {\left({\frac {s_{i}^{2}+{\frac {a^{2}}{12}}}{N}}\right)\cdot \left({\frac {16}{9}}+{\frac {8\pi s_{i}^{2}b^{2}}{a^{2}N^{2}}}\right)}}}

حيث N هو عدد الفوتونات المجمعة، و a هو حجم البكسل لكاشف التصوير،ب2{\displaystyle b^{2}}هو متوسط ​​إشارة الخلفية و sأنا{\displaystyle s_{i}}يمثل الانحراف المعياري لدالة انتشار النقطة. [ 10 ] إن شرط تحديد مواقع العديد من الفلوروفورات في وقت واحد على مساحة واسعة هو ما يحدد سبب كون هذه الطرق ذات مجال واسع، حيث تستخدم كاميرا CCD أو EMCCD أو CMOS ككاشف .

إن الحاجة إلى نسبة إشارة إلى ضوضاء محسنة لزيادة دقة تحديد الموقع إلى أقصى حد تحدد الجمع المتكرر لهذا المفهوم مع المجاهر الفلورية ذات المجال الواسع التي تسمح بالتقطيع البصري ، مثل مجاهر الفلورية ذات الانعكاس الداخلي الكلي (TIRF) ومجاهر الفلورية ذات الصفيحة الضوئية .

صورة فائقة الدقة

تُحدَّد دقة الصورة النهائية بدقة كل موضع وعدد المواضع، بدلاً من حيود الضوء. لذا، تُعدّ الصورة فائقة الدقة تمثيلاً نقطياً لإحداثيات جميع الجزيئات الموضعة. ويتم عادةً إنتاج هذه الصورة بتمثيل كل جزيء في مستوى الصورة كدالة غاوسية ثنائية الأبعاد، حيث يتناسب سعتها مع عدد الفوتونات المُجمَّعة، ويعتمد انحرافها المعياري على دقة الموضع.

التنظيم الذاتي لشبكة الانجذاب الكيميائي لبكتيريا الإشريكية القولونية ، مصورة باستخدام المجهر الضوئي فائق الدقة. يشير مقياس الرسم في (أ-هـ) إلى 1 ميكرومتر. يشير مقياس الرسم في (و-ح) إلى 50 نانومتر. [ 11 ]

التطبيقات

نخلة/عاصفة متعددة الألوان

استراتيجيات التصوير المجهري متعدد الألوان لتحديد المواقع. اليسار: الفصل الطيفي. الوسط: مُنشِّطات متعددة (STORM). اليمين: التصوير النسبي

تُشكّل الخصائص الفيزيائية الضوئية الفريدة للفلوروفورات المستخدمة في التصوير فائق الدقة بتقنية PALM/STORM تحديات وفرصًا في آنٍ واحد للتصوير متعدد الألوان. وقد برزت ثلاث استراتيجيات حتى الآن: إثارة الفلوروفورات ذات الأطياف المتباعدة باستخدام مُقسّم حزمة الانبعاث، [ 12 ] واستخدام مُنشّطات/مُبلّغات متعددة في وضع STORM ، [ 13 ] [ 14 ] والتصوير النسبي للفلوروفورات ذات الأطياف المتقاربة. [ 15 ]

ثلاثي الأبعاد في بالم وستورم

على الرغم من أن تقنيتي PALM وSTORM طُوِّرتا في الأصل كطرق تصوير ثنائية الأبعاد (x,y)، إلا أنهما سرعان ما تطورتا إلى تقنيات قادرة على التصوير ثلاثي الأبعاد (x,y,z). ولتحديد الموضع المحوري لجزيء فلوري واحد في العينة، تُستخدم حاليًا الطرق التالية: تعديل دالة انتشار النقطة لإدخال خصائص تعتمد على المحور z في الصورة ثنائية الأبعاد (x,y) (الطريقة الأكثر شيوعًا هي إدخال الاستجماتيزم في دالة انتشار النقطة)؛ الكشف متعدد المستويات ، حيث يُحدد الموضع المحوري بمقارنة صورتين لنفس دالة انتشار النقطة مع إبعاد إحداهما عن الأخرى؛ التحديد التداخلي للموضع المحوري للباعث باستخدام عدستين موضوعيتين متقابلتين وكواشف متعددة؛ [ 7 ] استخدام التركيز الزمني لحصر الإثارة/التنشيط؛ استخدام إثارة/تنشيط صفائح الضوء لحصرها في طبقة بسمك بضع مئات من النانومترات موضوعة بشكل عشوائي على طول المستوى z داخل العينة.

تصوير الخلايا الحية

يتطلب تكوين صورة PALM/STORM عادةً دورات متعددة من التنشيط والإثارة وإلغاء التنشيط/التبييض، مما يستلزم فترات زمنية طويلة، وبالتالي إجراء العملية على عينة ثابتة. وقد نُشرت عدة دراسات منذ عام 2007 [ 16 ] تُجري تصوير PALM/STORM على خلايا حية. وتعتمد القدرة على إجراء تصوير فائق الدقة للخلايا الحية باستخدام هذه التقنيات في نهاية المطاف على القيود التقنية لجمع عدد كافٍ من الفوتونات من باعث واحد في وقت قصير جدًا. ويعتمد هذا بدوره على كلٍ من القيود الفيزيائية الضوئية للمسبار وحساسية الكاشف المستخدم. وقد دُرست عمليات بطيئة نسبيًا (من ثوانٍ إلى عشرات الثواني) مثل تعديل تنظيم الالتصاقات البؤرية باستخدام PALM [ 17 ] ، بينما سمحت STORM بتصوير عمليات أسرع مثل انتشار غشاء الحفر المغلفة بالكلاثرين أو عمليات انشطار/اندماج الميتوكوندريا. يتمثل أحد التطبيقات الواعدة لتقنية PALM للخلايا الحية في استخدام التنشيط الضوئي لإجراء تتبع الجسيمات المفردة عالي الكثافة (sptPALM [ 18 ] )، مما يتغلب على القيد التقليدي لتتبع الجسيمات المفردة للعمل مع الأنظمة التي تعرض تركيزًا منخفضًا جدًا من الفلوروفورات.

التفاعلات النانوفوتونية

بينما تُستخدم قياسات PALM وSTORM التقليدية لتحديد البنية الفيزيائية للعينة، حيث تحدد شدة الأحداث الفلورية دقة تحديد الموقع، يمكن أيضًا استخدام هذه الشدة لرسم خرائط تفاعلات الفلوروفور مع البنى النانوية الضوئية . وقد أُجري ذلك على كلٍ من البنى المعدنية ( البلازمونية )، مثل قضبان الذهب النانوية، [ 19 ] [ 20 ] وكذلك البنى شبه الموصلة، مثل أسلاك السيليكون النانوية. [ 21 ] يمكن استخدام هذه الأساليب إما مع الفلوروفورات المُفعّلة على سطح العينة محل الدراسة (كما هو الحال في دراسات الجسيمات البلازمونية المذكورة هنا)، أو مع الفلوروفورات الممتصة عشوائيًا على الركيزة المحيطة بالعينة، مما يسمح برسم خرائط ثنائية الأبعاد كاملة لتفاعلات الفلوروفور مع البنية النانوية في جميع المواضع بالنسبة للبنية. [ 21 ]

أظهرت هذه الدراسات أنه بالإضافة إلى عدم اليقين القياسي في تحديد الموقع الناتج عن مطابقة دالة انتشار النقطة ، فإن التداخل الذاتي مع الضوء المتشتت بواسطة الجسيمات النانوية قد يؤدي إلى تشوهات أو إزاحات في دوال انتشار النقطة المصورة، [ 20 ] [ 21 ] مما يعقد تحليل هذه القياسات. ومع ذلك، قد يكون من الممكن الحد من هذه التشوهات، على سبيل المثال، عن طريق دمج أقنعة الأسطح الفائقة التي تتحكم في التوزيع الزاوي للضوء المسموح به في نظام القياس. [ 22 ]

الاختلافات عن العاصفة

تشترك تقنيتا PALM وSTORM في مبدأ أساسي مشترك، وقد ساهمت العديد من التطورات في زيادة ترابطهما. ومع ذلك، فهما تختلفان في عدة تفاصيل تقنية ونقطة جوهرية. من الناحية التقنية، تُجرى تقنية PALM على عينة بيولوجية باستخدام فلوروفورات مُعبَّر عنها خارجيًا على شكل تركيبات جينية مُدمجة مع بروتين فلوري قابل للتنشيط الضوئي . أما تقنية STORM فتستخدم الوسم المناعي للجزيئات الداخلية في العينة باستخدام أجسام مضادة مُوسومة بفلوروفورات عضوية. في كلتا الحالتين، يتم تحفيز الفلوروفورات ضوئيًا بين حالتي التشغيل (ON) والإيقاف (OFF). في تقنية PALM، يُحدِّد التنشيط الضوئي والتلاشي الضوئي عمر الفلوروفور بفترة زمنية محدودة، ويُفضَّل انبعاث مستمر للفلوروفور خلال هذه الفترة دون أي انقطاع في الفلورة. في تقنية STORM، استُغلَّ الوميض الضوئي العشوائي للفلوروفورات العضوية (التي عادةً ما تكون أكثر سطوعًا من البروتينات الفلورية) في الأصل لفصل الأصباغ المتجاورة. وفي هذا الصدد، كلما كان الوميض أكثر قوة، زادت احتمالية التمييز بين اثنين من الفلوروفورات المتجاورة.

في هذا السياق، استكشفت العديد من الدراسات البحثية إمكانات تقنية PALM في تحديد كمية جزيئات الفلوروفور (وبالتالي البروتينات المستهدفة) الموجودة في العينة عن طريق عدّ جزيئات الفلوروفور النشطة. [ 11 ] [ 23 ] [ 24 ] سيحدد النهج المستخدم في معالجة ديناميكيات الفلورة للعلامة الفلورية المستخدمة في التجارب الشكل النهائي للصورة فائقة الدقة، وإمكانية تحديد تطابق واضح بين حدث التموضع والبروتين في العينة.

الوسائط المتعددة

مراجع

  1. ↑ إي. بيتزيغ؛ جي إتش باترسون؛ آر. سوغرات؛ أو دبليو ليندواسير؛ إس. أولينيتش؛ جيه إس بونيفاسينو؛ إم دبليو ديفيدسون؛ جيه. ليبينكوت-شوارتز؛ إتش إف هيس (2006). "تصوير البروتينات الفلورية داخل الخلايا بدقة نانومترية" . مجلة ساينس . 313 (5793): 1642-1645 . رمز Bibcode : 2006Sci...313.1642B . doi : 10.1126/science.1127344 . PMID 16902090 . 
  2. ↑ إس تي هيس؛ تي بي جيرياجان؛ إم دي ماسون (2006). "التصوير فائق الدقة باستخدام مجهر التموضع بالتنشيط الضوئي الفلوري" . مجلة الفيزياء الحيوية . 91 (11): 4258-4272 . Bibcode : 2006BpJ....91.4258H . doi : 10.1529/biophysj.106.091116 . PMC 1635685. PMID 16980368 .  
  3. ↑ إم جيه راست؛ إم. بيتس؛ إكس. تشوانغ (2006). "التصوير دون حد الانعراج باستخدام مجهر إعادة البناء البصري العشوائي (STORM)" . مجلة Nature Methods . 3 (20): 793-796 . doi : 10.1038/nmeth929 . PMC 2700296. PMID 16896339 .  
  4. ↑ "طريقة العام 2008" . Nature Methods . 6 (1): 1– 109. 2009. doi : 10.1038/nmeth.f.244 .
  5. ↑ ها، تايكجيب وتينفيلد، فيليب (2012). "الفيزياء الضوئية للمجسات الفلورية للفيزياء الحيوية للجزيئات المفردة والتصوير فائق الدقة" . المراجعة السنوية للكيمياء الفيزيائية . 63 (1): 595-617 . Bibcode : 2012ARPC...63..595H . doi : 10.1146/annurev-physchem-032210-103340 . PMC 3736144. PMID 22404588 .  
  6. ↑ بو هوانغ، وهايزن بابكوك، وشياوي تشوانغ (2010). " كسر حاجز الانعراج: التصوير فائق الدقة للخلايا" . مجلة Cell . 143 (7): 1047-1058 . doi : 10.1016/j.cell.2010.12.002 . PMC 3272504. PMID 21168201 .  
  7. 1 2 شتينجل، جليب وجالبريث، جيمس أ. وجالبريث، كاثرين ج. وليبينكوت-شوارتز، جينيفر وجيليت، جينيفر م. ومانلي، سوليانا وسوجرات، رشيد وواترمان، كلير م. وكانشاناوونغ، باكورن وديفيدسون، مايكل و. وفيتر، ريتشارد د. وهيس، هارالد ف. (2009). "المجهر الفلوري التداخلي فائق الدقة يكشف البنية الخلوية ثلاثية الأبعاد" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم . 106 (9): 3125-3130 . Bibcode : 2009PNAS..106.3125S . doi : 10.1073/pnas.0813131106 . PMC 2637278. PMID 19202073 .  {{cite journal}}: صيانة CS1: أسماء متعددة: قائمة المؤلفين ( رابط )
  8. ↑ دبليو إي مورنر؛ دي بي فروم (2003). "طرق قياس طيف التألق لجزيء واحد ومجسات التألق الفردية". مراجعة الأدوات العلمية . 74 (8): 3597-3619 . Bibcode : 2003RScI...74.3597M . doi : 10.1063/1.1589587 . S2CID 11615310 . 
  9. ↑ إي. بيتزيغ (1995). "طريقة مقترحة للتصوير البصري الجزيئي". رسائل البصريات . 20 (3): 237-239 . Bibcode : 1995OptL...20..237B . doi : 10.1364/OL.20.000237 . PMID 19859146 . 
  10. ↑ كي. آي. مورتنسن؛ إل. إس. تشيرشمان؛ جيه. إيه. سبوديتش؛ إتش. فليفبيرج (2010). " تحليل التموضع الأمثل لتتبع الجزيئات المفردة والمجهر فائق الدقة" . مجلة نيتشر ميثودز . 7 (5): 377-381 . doi : 10.1038/nmeth.1447 . PMC 3127582. PMID 20364147 .  
  11. 1 2 غرينفيلد د، ماك إيفوي أ.ل، شروف هـ، كروكس ج.إ، وينغرين ن.س، وآخرون (2009). "التنظيم الذاتي لشبكة الانجذاب الكيميائي لبكتيريا الإشريكية القولونية المصورة باستخدام المجهر الضوئي فائق الدقة" . مجلة PLOS Biology . 7 (6) e1000137. doi : 10.1371/journal.pbio.1000137 . PMC 2691949. PMID 19547746 .   
  12. ↑ شروف هـ، غالبريث سي جي، غالبريث جيه إيه، وايت هـ، جيليت جيه، أولينيتش إس، ديفيدسون إم دبليو، بيتزيغ إي (2007). "التصوير فائق الدقة ثنائي اللون للمجسات المُعبر عنها جينيًا داخل مُركبات الالتصاق الفردية" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم . 104 (51): 20308-20313 . Bibcode : 2007PNAS..10420308S . doi : 10.1073/pnas.0710517105 . PMC 2154427. PMID 18077327 .  
  13. ↑ م. بيتس؛ ب . هوانغ؛ ج. ت. ديمبسي؛ إكس. تشوانغ (2007). "التصوير فائق الدقة متعدد الألوان باستخدام مجسات فلورية قابلة للتبديل الضوئي" . مجلة ساينس . 317 (5845): 1749-1753 . رمز Bibcode : 2007Sci...317.1749B . doi : 10.1126/science.1146598 . PMC 2633025. PMID 17702910 .  
  14. ↑ بوك، هـ.؛ وآخرون (2007). "مجهر نانوي فلوري ثنائي اللون في المجال البعيد يعتمد على باعثات قابلة للتحويل الضوئي". الفيزياء التطبيقية ب . 88 (2): 161-165 . Bibcode : 2007ApPhB..88..161B . doi : 10.1007/s00340-007-2729-0 . S2CID 122146697 .  
  15. ↑ تيستا، آي.، وورم، سي. أ.، ميدا، ر.، روثرميل، إي.، فون ميدندورف، سي.، فولينغ، ج.، جاكوبس، إس.، شونلي، أ.، هيل، إس. دبليو.، إيغلينغ، سي. (2010). " التصوير النانوي الفلوري متعدد الألوان في الخلايا الثابتة والحية عن طريق إثارة الفلوروفورات التقليدية بطول موجي واحد" . مجلة الفيزياء الحيوية . 99 (8): 2686-2694 . Bibcode : 2010BpJ....99.2686T . doi : 10.1016/j.bpj.2010.08.012 . PMC 2956215. PMID 20959110 .  
  16. ↑ هيس، صموئيل ت. وغولد، ترافيس ج. وجوديتي، ماناسا ف. وماس، سارة أ. وميلز، كيفن د. وزيمربرغ، جوشوا (2007). "التوزيع العنقودي الديناميكي للهيماغلوتينين المُحدد عند 40 نانومتر في أغشية الخلايا الحية يميز بين نظريات الحويصلات الدهنية" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم . 104 (44): 17370-17375 . Bibcode : 2007PNAS..10417370H . doi : 10.1073/pnas.0708066104 . PMC 2077263. PMID 17959773 .  {{cite journal}}: صيانة CS1: أسماء متعددة: قائمة المؤلفين ( رابط )
  17. ↑ شروف، هـ.، سي جي غالبريث، جيه إيه غالبريث، وإي. بيتزيغ (2008). "مجهر التموضع الضوئي للخلايا الحية لديناميكيات الالتصاق على المستوى النانوي" . نيتشر ميثودز . 5 (44): 417-423 . doi : 10.1038/nmeth.1202 . PMC 5225950. PMID 18408726 .  {{cite journal}}: صيانة CS1: أسماء متعددة: قائمة المؤلفين ( رابط )
  18. ↑ إس مانلي؛ جيه إم جيلت؛ جي إتش باترسون؛ إتش شروف؛ إتش إف هيس؛ إي بيتزيج؛ جيه ليبينكوت-شوارتز (2008). "رسم خرائط عالية الكثافة لمسارات الجزيئات المفردة باستخدام مجهر التموضع المُنشط ضوئيًا" . Nature Methods . 5 (2): 155–157 . doi : 10.1038/nmeth.1176 . PMID 18193054. S2CID 1101468 .  
  19. ↑ تشو، شياوتشون؛ أندوي، نيشا ماي؛ ليو، غوكون؛ تشودري، إريك؛ هان، كيو-سونغ؛ شين، هاو؛ تشين، بنغ (2012). "التصوير الكمي فائق الدقة يكشف أنماط التفاعل على المحفزات النانوية المفردة". مجلة نيتشر لتكنولوجيا النانو . 7 (4): 237-241 . Bibcode : 2012NatNa...7..237Z . doi : 10.1038 / nnano.2012.18 . ISSN 1748-3387 . PMID 22343380. S2CID 4654704 .   
  20. لين ، هونغ تشن؛ سينتينو، سيلفيا ب.؛ سو، ليانغ؛ كينينز، بارت؛ روشا، سوزانا؛ سليوا، ميشيل؛ هوفكينز، يوهان؛ أوجي-إي، هيروشي (2012). "رسم خرائط التألق المعزز سطحيًا على الجسيمات النانوية المعدنية باستخدام مجهر التموضع الضوئي فائق الدقة". ChemPhysChem . 13 (4): 973-981 . doi : 10.1002/cphc.201100743 . ISSN 1439-4235 . PMID 22183928 .  
  21. 1 2 3 جوهلين، إريك؛ سولاري، جاكوبو؛ مان، ساندر أ.؛ وانغ، جيا؛ شيميزو، توماس س.؛ غارنيت، إريك س. (2016). "التصوير فائق الدقة لتفاعلات الضوء والمادة بالقرب من أسلاك نانوية أحادية من أشباه الموصلات" . نيتشر كوميونيكيشنز . 7 13950. Bibcode : 2016NatCo...713950J . doi : 10.1038/ncomms13950 . ISSN 2041-1723 . PMC 5187462. PMID 27996010 .   
  22. ↑ باكلوند، ميكائيل ب.؛ أربابي، أمير؛ بيتروف، بيتر ن.؛ أربابي، إحسان؛ سوراب، سوميا؛ فرعون، أندريه؛ مورنر، و. إي. (2016). "إزالة تحيزات التموضع الناتجة عن التوجيه في مجهر الجزيء المفرد باستخدام قناع سطحي واسع النطاق" (ملف PDF) . مجلة Nature Photonics . 10 (7): 459-462 . Bibcode : 2016NaPho..10..459B . doi : 10.1038/nphoton.2016.93 . ISSN 1749-4885 . PMC 5001689. PMID 27574529 .   
  23. ↑ ب. أنيبال؛ س. فاني؛ م. سكارسيلي؛ يو. روثليسبيرغر؛ أ. رادينوفيتش (2011). "المجهر الكمي لتحديد المواقع المنشط ضوئيًا: كشف آثار الوميض الضوئي" . PLOS ONE . 6 (7): ص. e22678، 07. Bibcode : 2011PLoSO...622678A . doi : 10.1371/journal.pone.0022678 . PMC 3144238. PMID 21818365 .  
  24. ↑ لي، سانغ هيوك وشين، جاي ين ولي، أنتوني وبوستامانتي، كارلوس (2012). "عدّ جزيئات الفلورسنت المفردة القابلة للتنشيط الضوئي باستخدام مجهر التموضع الضوئي المنشط (PALM)" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم . 109 (43): 17436-17441 . Bibcode : 2012PNAS..10917436L . doi : 10.1073/pnas.1215175109 . PMC 3491528. PMID 23045631 .  {{cite journal}}: صيانة CS1: أسماء متعددة: قائمة المؤلفين ( رابط )
  25. ↑ إيزيدين، آي.، سبيشت، سي. جي.، ليليك، إم.، دارزاك، إكس.، تريلر، إيه.، وآخرون . (2011). "التصوير الديناميكي فائق الدقة للأشواك التغصنية باستخدام مسبار أكتين قابل للتحويل الضوئي ذي ألفة منخفضة" . PLOS ONE . 6 (1) e15611. Bibcode : 2011PLoSO...615611I . doi : 10.1371/journal.pone.0015611 . PMC 3022016. PMID 21264214 .   
  26. ↑ تاتافارتي، ف.، كيم، إ.، روديونوف، ف.، يو، ج. (2009). "دراسة ديناميكيات الأكتين تحت الشوكة في خلايا عصبية الحصين لدى الفئران باستخدام التصوير البصري فائق الدقة" . PLOS ONE . 4 (11) e7724. Bibcode : 2009PLoSO...4.7724T . doi : 10.1371/journal.pone.0007724 . PMC 2771285. PMID 19898630 .