الحمض النووي الريبوزي الدليلي

📅 آخر تحديث: ١٧ يوليو ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ١٧ يوليو ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 2 صور
الموسوعة الحرة

الحمض النووي الريبوزي الدليل (gRNA) أو الحمض النووي الريبوزي الدليل المفرد (sgRNA) هو تسلسل قصير من الحمض النووي الريبوزي (RNA ) يوجه بروتينًا مرتبطًا بنظام CRISPR إلى هدفه من تسلسل الحمض النووي عبر اقتران قواعد واتسون-كريك . [ 1 ] [ 2 ] في البكتيريا والعتائق ، تُعدّ جزيئات gRNA جزءًا من نظام CRISPR -Cas الذي يعمل كآلية دفاع مناعي تكيفي لحماية الكائن الحي من الفيروسات. هنا، تعمل جزيئات gRNA القصيرة ككاشفات للحمض النووي الغريب وتوجه إنزيمات Cas التي تُحلل الحمض النووي الغريب. [ 1 ] [ 3 ]

تاريخ

اكتُشف الحمض النووي الريبوزي الدليل (gRNA) لتحرير الحمض النووي الريبوزي (RNA) عام 1990 على يد ب. بلوم، ون. باكالارا، ول. سيمبسون، من خلال التهجين بتقنية نورثرن بلوت في الحمض النووي الدائري للميتوكوندريا للطفيلي حقيقي النواة الليشمانيا تارينتولاي. استكشفت الأبحاث اللاحقة، التي أُجريت في منتصف العقد الأول من الألفية الثانية والسنوات التالية، بنية ووظيفة gRNA ونظام CRISPR-Cas. وحدث إنجازٌ هام عام 2012 عندما اكتُشف أن gRNA قادر على توجيه إنزيم Cas9 الداخلي لإحداث قطعٍ مُستهدفة في الحمض النووي المزدوج. أدى هذا الاكتشاف إلى منح جائزة نوبل في الكيمياء لعام 2020 لجينيفر دودنا وإيمانويل شاربنتييه، تقديرًا لمساهماتهما في تطوير تقنية تحرير الجينات CRISPR-Cas9.

الحمض النووي الريبوزي الموجه في الطلائعيات

تمتلك الطلائعيات التريبانوسومية وغيرها من الكينيتوبلاستيدات عملية تعديل ما بعد النسخ للحمض النووي الريبوزي (RNA) تُعرف باسم "تحرير الحمض النووي الريبوزي"، والتي تُجري إدخال/حذف اليوريدين داخل الميتوكوندريا . [ 4 ] [ 5 ] يكون الحمض النووي للميتوكوندريا دائريًا، وينقسم إلى دوائر كبيرة ودوائر صغيرة. تحتوي الميتوكوندريون على حوالي 50 دائرة كبيرة ، تحتوي على مناطق ترميزية وغير ترميزية، ويتكون كل منها من حوالي 20 كيلو قاعدة (kb). المنطقة الترميزية محفوظة بشكل كبير (16-17 كيلو قاعدة)، بينما تختلف المنطقة غير الترميزية باختلاف الأنواع. أما الدوائر الصغيرة فهي أصغر حجمًا (حوالي 1 كيلو قاعدة) ولكنها أكثر عددًا من الدوائر الكبيرة، إذ تحتوي الميتوكوندريون على عدة آلاف منها. [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] يمكن للدوائر الكبيرة أن تُشفّر " الجينات الخفية " وبعض جزيئات الحمض النووي الريبوزي المرشد (gRNA)، بينما يمكن للدوائر الصغيرة أن تُشفّر غالبية جزيئات الحمض النووي الريبوزي المرشد. تُظهر بعض جينات الحمض النووي الريبوزي الموجّه (gRNA) مواقع إدخال وحذف متطابقة حتى وإن كانت ذات تسلسلات مختلفة، بينما لا تُكمّل تسلسلات أخرى من الحمض النووي الريبوزي الموجّه (gRNA) الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) المُعدّل مسبقًا. تتشابك جزيئات الدوائر الكبيرة والصغيرة لتُشكّل شبكة ضخمة من الحمض النووي داخل الميتوكوندريا. [ 9 ] [ 8 ] [ 10 ]

لا يمكن ترجمة غالبية نسخ الحمض النووي الريبوزي الدائري الكبير إلى بروتينات بسبب حدوث انزياحات في إطار القراءة في تسلسلاتها. تُصحَّح هذه الانزياحات بعد النسخ من خلال إدخال وحذف بقايا اليوريدين في مواقع محددة، مما يُنشئ إطار قراءة مفتوحًا . يُترجم إطار القراءة المفتوح هذا لاحقًا إلى بروتين مُماثل لبروتينات الميتوكوندريا الموجودة في خلايا أخرى. [ 11 ] تتم عملية إدخال وحذف اليوريدين بواسطة جزيئات الحمض النووي الريبوزي الدليلية القصيرة (gRNAs)، التي تُشفِّر معلومات التحرير من خلال تسلسلات مُكمِّلة، وتسمح بتكوين أزواج قاعدية بين الجوانين واليوراسيل (GU) وكذلك بين الجوانين والسيتوزين (GC)، مما يُسهِّل عملية التحرير. [ 12 ]

وظيفة مركب gRNA-mRNA

تُستنسخ جزيئات الحمض النووي الريبوزي الدليل (gRNA) بشكل رئيسي من المنطقة بين الجينات في الحمض النووي الدائري الكبير، ولها تسلسلات مكملة للحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA). يحتوي الطرف 3' لجزيئات gRNA على ذيل أوليغوميري من نوع "U" (يتراوح طوله بين 5 و24 نيوكليوتيدًا) يقع في منطقة غير مشفرة، ولكنه يتفاعل ويُشكّل مُركّبًا مستقرًا مع المناطق الغنية بالأدينين والجوانين في الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) والحمض النووي الريبوزي الدليل (gRNA) قبل التعديل، ويتم تثبيت هذا المُركّب ديناميكيًا حراريًا بواسطة مُرساة 5' و3'. [ 13 ] يُساعد هذا الهجين الأولي في التعرّف على موقع mRNA المُحدد المراد تعديله. [ 14 ]

عادةً ما تتم عملية تعديل الحمض النووي الريبوزي (RNA) من الطرف 3' إلى الطرف 5' على الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA). تبدأ عملية التعديل الأولية عندما يشكل الحمض النووي الريبوزي الموجه (gRNA) ثنائيًا مع تسلسل mRNA مكمل يقع مباشرةً بعد موقع التعديل. يستقطب هذا الاقتران عددًا من معقدات البروتين النووي الريبوزي التي توجه عملية قطع أول قاعدة غير متطابقة مجاورة لمرساة gRNA-mRNA. بعد ذلك، يُدخل إنزيم يوريديل ترانسفيراز قاعدة "U" في الطرف 3'، ثم يقوم إنزيم ليغاز الحمض النووي الريبوزي بربط الطرفين المقطوعين. تتكرر هذه العملية في موقع التعديل التالي في الاتجاه المعاكس بطريقة مماثلة. عادةً ما يحمل الحمض النووي الريبوزي الموجه الواحد معلومات لعدة مواقع تعديل (كتلة تعديل)، ينتج عن تعديلها ثنائي gRNA/mRNA كامل. تُعرف هذه العملية من التعديل المتسلسل بنموذج سلسلة الإنزيمات. [ 14 ] [ 12 ] [ 15 ]

في حالة الحمض النووي الريبوزي الرسول "المُعدَّل بشكل شامل" [ 16 ] ، ينفك اللولب المزدوج، ويشكل جزيء gRNA آخر لولبًا مزدوجًا مع تسلسل الحمض النووي الريبوزي الرسول المُعدَّل، مما يبدأ جولة أخرى من التعديل. تشكل جزيئات gRNA المتداخلة هذه "نطاقًا" للتعديل. تحتوي بعض الجينات على نطاقات تعديل متعددة. [ 17 ] يختلف مدى التعديل لأي جين معين بين أنواع التريبانوسومات. يتمثل هذا الاختلاف في فقدان التعديل عند الطرف 3'، ربما بسبب فقدان فئات تسلسل الدوائر الصغيرة التي تشفر جزيئات gRNA محددة. تم اقتراح نموذج الاستبدال العكسي [ 18 ] لتفسير الفقدان الجزئي، وفي بعض الحالات، الفقدان الكامل للتعديل عبر التطور. على الرغم من أن فقدان التعديل عادةً ما يكون مميتًا، فقد لوحظت مثل هذه الخسائر في سلالات المختبر القديمة. يشير الحفاظ على التعديل على مدار التاريخ التطوري الطويل لهذه الطلائعيات القديمة إلى وجود ميزة انتقائية، لا تزال طبيعتها الدقيقة غير مؤكدة. [ 16 ]

ليس من الواضح لماذا تستخدم التريبانوسومات آلية معقدة كهذه لإنتاج الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA). ربما نشأت هذه الآلية في الميتوكوندريا المبكرة لسلف سلالة الطلائعيات الكينيتوبلاستية، إذ أنها موجودة في البودونيدات التي تُعد سلفًا للتريبانوسومات، [ 19 ] وقد لا تكون موجودة في اليوجلينات ، التي تفرعت من نفس السلف المشترك للكينيتوبلاستيدات.

تسلسلات الحمض النووي الريبوزي الدليلي

في طفيل الليشمانيا التارنتولية ، يتم تعديل 12 من أصل 18 جينًا ميتوكوندريًا باستخدام هذه العملية. أحد هذه الجينات هو Cyb. في الواقع، يتم تعديل الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) مرتين متتاليتين. بالنسبة للتعديل الأول، يكون التسلسل ذو الصلة على الحمض النووي الريبوزي الرسول كما يلي:

مرنا 5' AAAGAAAAGGCUUUAACUUCAGGUUGU 3'

يُستخدم الطرف 3' لتثبيت الحمض النووي الريبوزي الموجّه (gRNA) (gCyb-I gRNA في هذه الحالة) عن طريق اقتران القواعد (تُستخدم بعض أزواج G/U). أما الطرف 5' فلا يتطابق تمامًا، ويقوم أحد ثلاثة إنزيمات نووية داخلية محددة بقطع الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) عند موقع عدم التطابق.

جي آر إن إيه 3' آآآآآآآوآآآآووجاجوكاجوا 5' مرنا 5 'AA AGAAA AGGC UUUAACUUCAGGUUGU 3'

يتم الآن "إصلاح" الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) عن طريق إضافة اليوراسيل (U) في كل موقع تحرير بالتتابع، مما يعطي التسلسل التالي:

جي آر إن إيه 3' آآآآآآآوآآآآووجاجوكاجوا 5' مرنا 5'

يحتوي هذا الجين تحديدًا على موقعين متداخلين لتحرير الحمض النووي الريبوزي المرشد (gRNA). الطرف 5' لهذا الجزء هو نقطة التثبيت 3' لحمض نووي ريبوزي مرشد آخر (gCyb-II gRNA). [ 9 ]

الحمض النووي الريبوزي الدليل في بدائيات النوى

تقنية كريسبر في بدائيات النوى

تستخدم بدائيات النوى، كالبكتيريا والعتائق، تقنية كريسبر (CRISPR ) (تكرارات متناوبة قصيرة منتظمة متباعدة) وإنزيمات كاس المرتبطة بها، كنظام مناعة تكيفي. فعندما تُصاب بدائيات النوى بالفيروسات، وتتمكن من صدّ الهجوم، تقوم إنزيمات كاس المتخصصة بقطع الحمض النووي (DNA) (أو الحمض النووي الريبي RNA) للفيروس، ودمج الشظايا في الفراغات بين تسلسلات كريسبر. ثم يتم التعرف على هذه القطع المخزنة خلال هجمات الفيروسات اللاحقة، مما يسمح لإنزيمات كاس باستخدام نسخ الحمض النووي الريبي (RNA) لهذه القطع، إلى جانب تسلسلات كريسبر المرتبطة بها، كحمض نووي ريبي مرشد (gRNA) لتحديد التسلسلات الغريبة وتحييدها. [ 20 ] [ 21 ] [ 22 ]

البنية التخطيطية للمركب الثلاثي Cas9-sgRNA-DNA

بناء

يستهدف الحمض النووي الريبوزي الدليل (sgRNA) التسلسلات المكملة عبر اقتران قواعد واتسون-كريك البسيط. [ 23 ] في نظام CRISPR/cas من النوع الثاني، يوجه sgRNA إنزيم Cas لاستهداف مناطق محددة في الجينوم لقطع الحمض النووي المستهدف. يتكون sgRNA من مزيج مُهندس اصطناعياً من جزيئين من الحمض النووي الريبوزي: CRISPR RNA ( crRNA ) و crRNA المُنشط ( tracrRNA ). يرتبط crRNA بمنطقة الحمض النووي المستهدفة، بينما يُنشط tracrRNA نشاط إنزيم Cas9 الداخلي. يرتبط هذان المكونان ببنية رباعية الحلقات قصيرة، مما يؤدي إلى تكوين sgRNA. يتكون tracrRNA من أزواج قواعد تُشكل بنية جذعية حلقية، مما يُتيح ارتباطه بإنزيم Cas9 الداخلي . ينتج عن نسخ موقع CRISPR جزيء crRNA، الذي يحتوي على مناطق فاصلة محاطة بتسلسلات متكررة، يتراوح طولها عادةً بين 18 و20 زوجًا من القواعد النيتروجينية. يوجه هذا الجزيء إنزيم Cas9 إلى المنطقة المستهدفة المكملة على الحمض النووي، حيث يقوم بقطع الحمض النووي، مكونًا ما يُعرف بمركب المؤثر. يمكن للتعديلات في تسلسل crRNA داخل sgRNA أن تُغير موقع الارتباط، مما يسمح باستهداف دقيق لمناطق مختلفة من الحمض النووي، ويجعله نظامًا قابلًا للبرمجة لتحرير الجينوم. [ 24 ] [ 25 ] [ 26 ]

التطبيقات

تصميم الحمض النووي الريبوزي الموجه (gRNA)

تُحدد خصوصية استهداف نظام CRISPR-Cas9 بواسطة تسلسل مكون من 20 نيوكليوتيدًا (nt) في الطرف 5' من الحمض النووي الريبوزي الموجه (gRNA). يجب أن يسبق التسلسل المستهدف المطلوب النمط المجاور للبروتوسبيسر (PAM)، وهو تسلسل DNA قصير يتراوح طوله عادةً بين 2 و6 أزواج قاعدية، ويتبع منطقة DNA المستهدفة للقطع بواسطة نظام CRISPR، مثل CRISPR-Cas9. يُعد النمط المجاور للبروتوسبيسر (PAM) ضروريًا لكي يقوم إنزيم Cas بقطع الحمض النووي، ويقع عادةً على بُعد 3-4 نيوكليوتيدات أسفل موقع القطع. بمجرد أن يرتبط الحمض النووي الريبوزي الموجه (gRNA) بالهدف، يُحدث Cas9 قطعًا مزدوجًا في الحمض النووي على بُعد حوالي 3 نيوكليوتيدات أعلى النمط المجاور للبروتوسبيسر (PAM). [ 27 ] [ 28 ]

ينبغي أن يتجاوز محتوى GC الأمثل في التسلسل الدليلي 50%. يُحسّن ارتفاع محتوى GC استقرار ثنائي RNA-DNA ويقلل من التهجين غير المستهدف. يبلغ طول التسلسلات الدليلية عادةً 20 زوجًا قاعديًا، ولكن يمكن أن يتراوح طولها أيضًا بين 17 و24 زوجًا قاعديًا. يقلل التسلسل الأطول من التأثيرات غير المستهدفة. أما التسلسلات الدليلية الأقصر من 17 زوجًا قاعديًا فهي مُعرّضة لخطر استهداف مواقع جينية متعددة . [ 29 ] [ 30 ] [ 24 ]

كريسبر كاس9

مركب cas9، يوضح gRNA و PAM والكسر المزدوج الذي يحدث في الحمض النووي المستهدف.

تقنية كريسبر /كاس9 (CRISPR/Cas9) هي تقنية تُستخدم لتحرير الجينات والعلاج الجيني. كاس هو إنزيم نوكلياز داخلي يقطع الحمض النووي في موقع محدد بتوجيه من الحمض النووي الريبوزي الدليل (guide RNA). هذه تقنية دقيقة تستهدف مواقع محددة، ويمكنها إحداث تعطيل أو إدخال جينات، اعتمادًا على مسار إصلاح الحمض النووي المزدوج. تشير الأدلة إلى أن الحمض النووي الريبوزي الدليل (tracrRNA) ضروري لارتباط كاس9 بتسلسل الحمض النووي المستهدف، سواء في المختبر أو في الكائن الحي. يتكون نظام كريسبر-كاس9 من ثلاث مراحل رئيسية. تتضمن المرحلة الأولى إطالة القواعد في منطقة موقع كريسبر بإضافة فواصل من الحمض النووي الغريب في تسلسل الجينوم. تساعد بروتينات مثل كاس1 وكاس2 في إيجاد فواصل جديدة. أما المرحلة التالية فتتضمن نسخ كريسبر: حيث يتم التعبير عن الحمض النووي الريبوزي الدليل الأولي (pre-crRNA) من خلال نسخ مصفوفة تكرارات وفواصل كريسبر. بعد إجراء تعديلات إضافية، يتحول ما قبل crRNA إلى مناطق محاطة بفواصل مفردة، مكونًا crRNA قصيرًا. تتشابه عملية نضج الحمض النووي الريبوزي في النوعين الأول والثالث، لكنها تختلف في النوع الثاني. تتضمن المرحلة الثالثة ارتباط بروتين Cas9 وتوجيهه لقطع قطعة الحمض النووي. يرتبط بروتين Cas9 بمزيج من crRNA و tracrRNA، مكونًا مركبًا فعالًا. يعمل هذا المركب كحمض نووي ريبوزي موجه لبروتين Cas9، موجهًا نشاطه الإندونوكليازي. [ 31 ] [ 2 ] [ 3 ]

الطفرات الناتجة عن الحمض النووي الريبي

إحدى الطرق المهمة لتنظيم الجينات هي الطفرات الجينية في الحمض النووي الريبوزي (RNA)، والتي يمكن إحداثها من خلال تعديل الحمض النووي الريبوزي بمساعدة الحمض النووي الريبوزي الموجه (gRNA). [ 32 ] يستبدل الحمض النووي الريبوزي الموجه الأدينوزين بالإينوزين في مواقع مستهدفة محددة، مما يُعدّل الشفرة الوراثية. [ 33 ] يعمل إنزيم أدينوزين دي أميناز على الحمض النووي الريبوزي، مُحدثًا تعديلات ما بعد النسخ عن طريق تغيير الكودونات ووظائف البروتينات المختلفة. الحمض النووي الريبوزي الموجه عبارة عن جزيئات صغيرة من الحمض النووي الريبوزي النووي، والتي تُجري، جنبًا إلى جنب مع البروتينات الريبوزية، تعديلات داخل الخلايا على الحمض النووي الريبوزي، مثل إضافة مجموعة ميثيل إلى الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي (rRNA) وإدخال اليوريدين الكاذب في الحمض النووي الريبوزي ما قبل الريبوسومي. [ 34 ] يرتبط الحمض النووي الريبوزي الموجه بتسلسل الحمض النووي الريبوزي المضاد وينظم تعديل الحمض النووي الريبوزي. وقد لوحظ أن الحمض النووي الريبوزي المتداخل الصغير (siRNA) والحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) يُستخدمان عادةً كتسلسلات مستهدفة للحمض النووي الريبوزي، وأن التعديلات سهلة نسبيًا نظرًا لصغر حجمهما. [ 35 ]

انظر أيضاً

مراجع

  1. مالي ، براشانت؛ يانغ، لوهان؛ إسفلت، كيفن م.؛ آخ، جون؛ غويل، مارك؛ ديكارلو، جيمس إي.؛ نورفيل، جولي إي.؛ تشيرش، جورج م. (15 فبراير 2013). " هندسة الجينوم البشري الموجهة بالحمض النووي الريبوزي عبر Cas9" . مجلة ساينس . 339 (6121): 823-826 . Bibcode : 2013Sci...339..823M . doi : 10.1126/science.1232033 . ISSN 1095-9203 . PMC 3712628. PMID 23287722 .   
  2. 1 2 دودنا، جينيفر أ.؛ شاربنتييه، إيمانويل (28-11-2014). "الآفاق الجديدة لهندسة الجينوم باستخدام تقنية كريسبر-كاس9" . مجلة ساينس . 346 (6213) 1258096. doi : 10.1126/science.1258096 . ISSN 0036-8075 . PMID 25430774 .  
  3. 1 2 جينك، مارتن؛ تشيلينسكي، كريستوف؛ فونفارا، إينيس؛ هاور، مايكل؛ دودنا، جينيفر أ.؛ شاربنتييه، إيمانويل (17 أغسطس 2012). "إنزيم نووي داخلي قابل للبرمجة موجه بواسطة الحمض النووي الريبي المزدوج في المناعة البكتيرية التكيفية" . مجلة ساينس . 337 (6096): 816-821 . Bibcode : 2012Sci...337..816J . doi : 10.1126 / science.1225829 . ISSN 1095-9203 . PMC 6286148. PMID 22745249 .   
  4. ↑ سيمبسون، لاري؛ سبيسيغو، ساندرو؛ أفاسيزيف، روسلان (1 مارس 2003). "تعديل الحمض النووي الريبوزي (RNA ) عن طريق إدخال/حذف اليوريدين في ميتوكوندريا التريبانوسوما: عملية معقدة" . RNA . 9 (3): 265-276 . doi : 10.1261/rna.2178403 . ISSN 1355-8382 . PMC 1370392. PMID 12591999 .   
  5. ↑ لي، فينغ؛ غي، بنغ؛ هوي، وونغ هـ.؛ أتاناسوف، إيفو؛ روجرز، كيستريل؛ غو، تشيانغ؛ أوساتو، دارين؛ فاليك، أرنولد م.؛ تشو، ز. هونغ؛ سيمبسون، لاري (28-07-2009). "بنية مُركّب التحرير الأساسي (المُركّب L) المُشارك في تحرير الحمض النووي الريبوزي (RNA) عن طريق إدخال/حذف اليوريدين في ميتوكوندريا التريبانوسومات" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 106 (30): 12306-12310 . Bibcode : 2009PNAS..10612306L . doi : 10.1073/pnas.0901754106 . ISSN 1091-6490 . PMC 2708173 . PMID 19590014 .   
  6. ↑ إستيفيز، أنطونيو م.؛ سيمبسون، لاري (نوفمبر 1999). "تعديل الحمض النووي الريبوزي (RNA) عن طريق إدخال/حذف اليوريدين في ميتوكوندريا التريبانوسوما - مراجعة" . جين . 240 (2): 247-260 . doi : 10.1016/S0378-1119(99)00437-0 . PMID 10580144 . 
  7. ↑ أوكسنرايتر، تورستن؛ سيبريانو، مايكل؛ هاجدوك، ستيفن ل. (2007-01-01). "KISS: أداة البحث عن تسلسل تحرير الحمض النووي الريبوزي للكينيتوبلاستيدات" . RNA . 13 ( 1): 1-4 . doi : 10.1261/rna.232907 . ISSN 1355-8382 . PMC 1705751. PMID 17123956 .   
  8. 1 2 كوبر، سنكلير؛ وادزورث، إليزابيث س؛ أوكسنرايتر، تورستن؛ إيفنز، ألاسدير؛ سافيل، نيكولاس ج؛ شناوفر، أشيم (30 أكتوبر 2019). "تجميع وشرح جينوم الدائرة المصغرة للميتوكوندريا لسلالة قادرة على التمايز من التريبانوسوما البروسية" . أبحاث الأحماض النووية . 47 (21): 11304-11325 . doi : 10.1093/nar / gkz928 . ISSN 0305-1048 . PMC 6868439. PMID 31665448 .   
  9. بلوم ، ب .؛ باكالارا، ن.؛ سيمبسون، ل. (26 يناير 1990). "نموذج لتعديل الحمض النووي الريبوزي في ميتوكوندريا الكينيتوبلاستيد: جزيئات الحمض النووي الريبوزي "الموجهة" المنسوخة من الحمض النووي الدائري الكبير توفر المعلومات المعدلة". الخلية . 60 ( 2): 189-198 . doi : 10.1016/0092-8674(90)90735-w . ISSN 0092-8674 . PMID 1688737. S2CID 19656609 .   
  10. ↑ بلوم، دانيال؛ هان، أنيت دي؛ بورغ، جاني فان دين؛ بيرغ، مارلين فان دين؛ سلوف، بول؛ جيركو، ميلان؛ لوكس، يوليوس؛ بين، روب (يناير 2000). "تحتوي الحلقات المصغرة للميتوكوندريا في دودة بودونيد الحرة المعيشة، بودو سالتانس، على مجموعتين من جينات gRNA، ولا توجد في شبكات كبيرة" . RNA . 6 ( 1): 121-135 . doi : 10.1017/S1355838200992021 . ISSN 1355-8382 . PMC 1369900. PMID 10668805 .   
  11. ↑ ريد، إل كيه؛ مايلر، بي جيه؛ ستيوارت، كيه (يناير 1992). "تحرير مكثف لنسخ CR6 الدائرية الكبيرة المعالجة وغير المعالجة في طفيل التريبانوسوما البروسية" . مجلة الكيمياء البيولوجية . 267 (2): 1123-1128 . doi : 10.1016/s0021-9258(18)48405-0 . ISSN 0021-9258 . PMID 1730639 .  
  12. 1 2 أفاسيزيف، روسلان؛ أفاسيزيفا، إينا (سبتمبر 2011). "تعديل إدخال/حذف اليوريدين في التريبانوسومات: مجالٌ خصبٌ لنقل المعلومات الموجه بالحمض النووي الريبي" . WIREs RNA . 2 (5): 669-685 . doi : 10.1002/wrna.82 . ISSN 1757-7004 . PMC 3154072. PMID 21823228 .   
  13. ↑ بلوم، بيت؛ سيمبسون، لاري (يوليو 1990). "تحتوي جزيئات الحمض النووي الريبوزي الدليلية في ميتوكوندريا الكينيتوبلاستيد على ذيل أوليغونوكليوتيد غير مشفر في الطرف 3′، يشارك في التعرف على المنطقة المحررة مسبقًا". الخلية . 62 ( 2): 391-397 . doi : 10.1016/0092-8674(90)90375-o . ISSN 0092-8674 . PMID 1695552. S2CID 2181338 .   
  14. 1 2 كونيل، غريغوري جيه؛ بيرن، إيلين إم؛ سيمبسون، لاري (14 فبراير 1997). "إدخال اليوريدين في الحمض النووي الريبوزي الرسول للسيتوكروم ب في مستخلص الميتوكوندريا من الليشمانيا التارنتولية: دور البنية الثانوية للحمض النووي الريبوزي، سواءً كان ذلك معتمدًا على الحمض النووي الريبوزي الدليل أو مستقلًا عنه" . مجلة الكيمياء البيولوجية . 272 ​​(7): 4212-4218 . doi : 10.1074/jbc.272.7.4212 . ISSN 0021-9258 . PMID 9020135 .  
  15. ↑ بيرن، إي إم؛ كونيل، جي جي؛ سيمبسون، إل. (ديسمبر 1996). "تحرير الحمض النووي الريبوزي (RNA) بإدخال اليوريدين الموجه بواسطة الحمض النووي الريبوزي الدليلي في المختبر" . مجلة EMBO . 15 ( 23): 6758-6765 . doi : 10.1002/j.1460-2075.1996.tb01065.x . ISSN 0261-4189 . PMC 452499. PMID 8978701 .   
  16. 1 2 ماسلوف، ديمتري أ. (أكتوبر 2010). "مجموعة كاملة من الحمض النووي الريبوزي الرسول المُعدَّل في الميتوكوندريا في الليشمانيا المكسيكية الأمازونية LV78" . علم الطفيليات الجزيئي والكيميائي الحيوي . 173 (2): 107-114 . doi : 10.1016/j.molbiopara.2010.05.013 . ISSN 0166-6851 . PMC 2913609. PMID 20546801 .   
  17. ↑ ماسلوف، ديمتري أ.؛ سيمبسون، لاري (أغسطس 1992). "يعود استقطاب التحرير ضمن نطاق متعدد بوساطة الحمض النووي الريبوزي المرشد (gRNA) إلى تكوين روابط لـ gRNAs في الاتجاه المعاكس بواسطة التحرير في الاتجاه المعاكس" . الخلية . 70 (3): 459-467 . doi : 10.1016/0092-8674(92)90170-H . PMID 1379519 . 
  18. ↑ بروسيوس، يورغن (2003)، "مساهمة الحمض النووي الريبوزي (RNA) والتراجع الجيني في المستجدات التطورية" ، أصل وتطور وظائف الجينات الجديدة ، قضايا معاصرة في علم الوراثة والتطور، المجلد 10، دوردريخت: سبرينغر هولندا، الصفحات 99-116 ، doi : 10.1007/978-94-010-0229-5_1 ، ISBN   978-94-010-3982-6تم الاطلاع عليه بتاريخ 24 فبراير 2024
  19. ↑ ديشامب، ب.؛ لارا، إ.؛ ماراندي، و.؛ لوبيز-غارسيا، ب.؛ إيكيلوند، ف.؛ موريرا، د. (28-10-2010). "تحليل جينومي تطوري للكينيتوبلاستيدات يدعم أن التريبانوسومات نشأت من داخل البودونيدات". علم الأحياء الجزيئي والتطور . 28 (1): 53-58 . doi : 10.1093/molbev/msq289 . ISSN 0737-4038 . PMID 21030427 .  
  20. ↑ ويدينهيفت، بليك؛ ستيرنبرغ، صموئيل هـ.؛ دودنا، جينيفر أ. (فبراير 2012). "أنظمة إسكات الجينات الموجهة بالحمض النووي الريبي في البكتيريا والعتائق" . مجلة نيتشر . 482 (7385): 331-338 . رمز Bibcode : 2012Natur.482..331W . doi : 10.1038/nature10886 . ISSN 1476-4687 . PMID 22337052. S2CID 205227944 .   
  21. ↑ بهايا، ديفاكي؛ دافيسون، ميشيل؛ بارانغو، رودولف (2011). "أنظمة كريسبر-كاس في البكتيريا والعتائق: جزيئات RNA صغيرة متعددة الاستخدامات للدفاع التكيفي والتنظيم". المراجعة السنوية لعلم الوراثة . 45 : 273-297 . doi : 10.1146/annurev-genet-110410-132430 . ISSN 1545-2948 . PMID 22060043 .  
  22. ↑ تيرنز، مايكل ب.؛ تيرنز، ريبيكا م. (يونيو 2011). "أنظمة المناعة التكيفية القائمة على تقنية كريسبر" . الرأي الحالي في علم الأحياء الدقيقة . 14 ( 3): 321-327 . doi : 10.1016/j.mib.2011.03.005 . ISSN 1879-0364 . PMC 3119747. PMID 21531607 .   
  23. ↑ ستيوارت، كينيث د.؛ شناوفر، أشيم؛ إرنست، نانسي لويس؛ بانيغراهي، أسويني ك. (فبراير 2005). "الإدارة المعقدة: تحرير الحمض النووي الريبوزي في التريبانوسومات". اتجاهات في العلوم البيوكيميائية . 30 (2): 97-105 . doi : 10.1016/j.tibs.2004.12.006 . ISSN 0968-0004 . PMID 15691655 .  
  24. جيانغ ، فوغو؛ دودنا، جينيفر أ. (22 مايو 2017). " بنية وآليات CRISPR-Cas9" . المراجعة السنوية للفيزياء الحيوية . 46 (1): 505-529 . doi : 10.1146/annurev-biophys-062215-010822 . ISSN 1936-122X . PMID 28375731 .  
  25. ↑ تشيلينسكي، كريستوف؛ ماكاروفا، كيرا س.؛ شاربنتييه، إيمانويل؛ كونين، يوجين ف. (11 أبريل 2014). " تصنيف وتطور أنظمة كريسبر-كاس من النوع الثاني" . مجلة أبحاث الأحماض النووية . 42 (10): 6091-6105 . doi : 10.1093/nar/gku241 . ISSN 1362-4962 . PMC 4041416. PMID 24728998 .   
  26. ↑ تشيلينسكي، كريستوف؛ لو رون، أناييس؛ شاربنتييه، إيمانويل (مايو 2013). "عائلتا tracrRNA وCas9 لأنظمة المناعة من النوع الثاني CRISPR-Cas" . بيولوجيا الحمض النووي الريبي . 10 ( 5): 726-737 . doi : 10.4161/rna.24321 . ISSN 1547-6286 . PMC 3737331. PMID 23563642 .   
  27. ↑ هسو، باتريك د.؛ سكوت، ديفيد أ.؛ وينشتاين، جوشوا أ.؛ ران، ف. آن؛ كونرمان، سيلفانا؛ أغاروالا، فينيتا؛ لي، ينكينغ؛ فاين، إيلي ج.؛ وو، شويبينغ؛ شاليم، أوفير؛ كراديك، توماس ج.؛ مارافيني، لوتشيانو أ.؛ باو، غانغ؛ تشانغ، فنغ (سبتمبر 2013). "خصوصية استهداف الحمض النووي بواسطة نوكليازات Cas9 الموجهة بالحمض النووي الريبي" . مجلة Nature Biotechnology . 31 (9): 827-832 . doi : 10.1038/nbt.2647 . ISSN 1546-1696 . PMC 3969858. PMID 23873081 .   
  28. ↑ دونش، جون ج.؛ هارتينيان، إيلا؛ غراهام، دانيال ب.؛ توثوفا، زوزانا؛ هيغدي، مودرا؛ سميث، إيان؛ سولندر، ميغان؛ إيبرت، بنجامين ل.؛ خافيير، رامنيك ج.؛ روت، ديفيد إي. (ديسمبر 2014). " التصميم العقلاني لجزيئات sgRNA عالية النشاط لتعطيل الجينات بوساطة CRISPR-Cas9" . مجلة Nature Biotechnology . 32 (12): 1262-1267 . doi : 10.1038/nbt.3026 . ISSN 1546-1696 . PMC 4262738. PMID 25184501 .   
  29. ↑ لين، ياني؛ كراديك، توماس جيه؛ براون، ماثيو تي؛ ديشموخ، هارشافاردان؛ رانجان، بيوش؛ سارود، نيها؛ وايل، برايان إم؛ فيرتينو، باولا إم؛ ستيوارت، فرانك جيه؛ باو، جانج (يونيو 2014). "أنظمة CRISPR/Cas9 لها نشاط خارج الهدف مع إدخالات أو حذف بين تسلسلات الحمض النووي المستهدف وتسلسلات الحمض النووي الريبوزي الدليل" . مجلة أبحاث الأحماض النووية . 42 (11): 7473-7485 . doi : 10.1093/nar/gku402 . ISSN 1362-4962 . PMC 4066799. PMID 24838573 .   
  30. ↑ وونغ، ناثان؛ ليو، ويجون؛ وانغ، شياووي (18-09-2015). "WU-CRISPR: خصائص الحمض النووي الريبوزي الدليل الوظيفي لنظام CRISPR/Cas9" . علم الأحياء الجينومي . 16 218. bioRxiv 10.1101/026971 . doi : 10.1186/s13059-015-0784-0 . PMC 4629399. PMID 26521937 .   
  31. ^ كارفيليس، تاوتفيداس؛ غازيوناس، جيدريوس؛ ميكسيس، الجيرداس؛ بارانجو، رودولف؛ هورفاث، فيليب. سيكسنيز ، فيرجينيوس (2013/05/01). "يوجه crRNA وtracrRNA تداخل الحمض النووي بوساطة Cas9 في المكورات العقدية الحرارية" . بيولوجيا الحمض النووي الريبي . 10 (5): 841-851 . دوى : 10.4161 / rna.24203 . ردمك 1547-6286 . بمك 3737341 . بميد 23535272 .   
  32. ↑ باس، بريندا ل. (2002). "تعديل الحمض النووي الريبوزي بواسطة إنزيمات أدينوزين دي أميناز التي تعمل على الحمض النووي الريبوزي" . المراجعة السنوية للكيمياء الحيوية . 71 : 817-846 . doi : 10.1146/annurev.biochem.71.110601.135501 . ISSN 0066-4154 . PMC 1823043. PMID 12045112 .   
  33. ^ فوكودا، ماساتورا. أومينو، هيروميتسو؛ الأنف، كاناكو؛ نيشيتاروميزو، أزوسا؛ نوغوتشي، ريوما؛ ناكاجاوا ، هيرويوكي (2017/02/02). "بناء دليل الحمض النووي الريبي (RNA) لطفرات الحمض النووي الريبي (RNA) الموجهة نحو الموقع باستخدام تحرير الحمض النووي الريبي (A-to-I) داخل الخلايا" . التقارير العلمية . 7 41478. بيب كود : 2017NatSR...741478F . دوى : 10.1038/srep41478 . ISSN 2045-2322 . بمك 5288656 . بميد 28148949 .   
  34. ↑ مادن، ب. إي. (1990). "النيوكليوتيدات المعدلة العديدة في الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي حقيقي النواة". التقدم في أبحاث الأحماض النووية والبيولوجيا الجزيئية . 39 : 241-303 . doi : 10.1016/s0079-6603(08)60629-7 . ISBN 978-0-12-540039-8ISSN 0079-6603 . PMID 2247610 .​  
  35. ↑ ها، مينجو؛ كيم، في. ناري (أغسطس 2014). "تنظيم تكوين الحمض النووي الريبوزي الميكروي". مراجعات الطبيعة. بيولوجيا الخلية الجزيئية . 15 (8): 509-524 . doi : 10.1038/nrm3838 . ISSN 1471-0080 . PMID 25027649 .  

للمزيد من القراءة