كروماتوغرافيا التقارب

📅 آخر تحديث: ٣ أغسطس ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٣ أغسطس ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 3 صور
الموسوعة الحرة

الكروماتوغرافيا التقاربية هي طريقة لفصل الجزيئات الحيوية من المخاليط، تعتمد على تفاعل ارتباط جزيئي كبير عالي التخصص بين الجزيء الحيوي ومادة أخرى. يعتمد نوع تفاعل الارتباط على الجزيء الحيوي المراد فصله؛ فمثلاً ، تُستخدم تفاعلات الارتباط بين المستضد والضد ، والإنزيم والركيزة ، والمستقبل والرابط ، أو البروتين والحمض النووي [ 1 ] بشكل متكرر لعزل مختلف الجزيئات الحيوية. تتميز الكروماتوغرافيا التقاربية بانتقائيتها العالية ودقة فصلها [ 2 ] [ 3 ] ، مقارنةً بطرق الكروماتوغرافيا الأخرى.

مبدأ

تتميز كروماتوغرافيا التقارب بميزة التفاعلات الرابطة النوعية بين المادة المراد تحليلها (المذابة عادةً في الطور المتحرك ) وشريكها الرابط أو الليجاند (المثبت على الطور الثابت ). في تجربة كروماتوغرافيا التقارب النموذجية، يُربط الليجاند بمادة صلبة غير قابلة للذوبان - عادةً ما تكون بوليمرًا مثل الأغاروز أو البولي أكريلاميد - مُعدّلة كيميائيًا لإدخال مجموعات وظيفية تفاعلية يمكن لليجاند التفاعل معها، مُشكلاً روابط تساهمية مستقرة. [ 4 ] يُحمّل الطور الثابت أولًا في عمود يُضاف إليه الطور المتحرك. تبقى الجزيئات المرتبطة بالليجاند مُرتبطة بالطور الثابت. ثم يُضاف محلول غسيل لإزالة الجزيئات الحيوية غير المستهدفة عن طريق تعطيل تفاعلاتها الأضعف مع الطور الثابت، بينما تبقى الجزيئات الحيوية المراد تحليلها مُرتبطة. يمكن بعد ذلك إزالة الجزيئات الحيوية المستهدفة باستخدام ما يُسمى بمحلول الإذابة، الذي يُعطّل التفاعلات بين الجزيئات الحيوية المستهدفة المرتبطة والرابط. وبالتالي، يتم استعادة الجزيء المستهدف في محلول الإذابة. [ 5 ]

لا تتطلب كروماتوغرافيا التقارب معرفة الوزن الجزيئي أو الشحنة أو كراهية الماء أو غيرها من الخصائص الفيزيائية للمادة المراد تحليلها، مع أن معرفة خصائص ارتباطها مفيدة في تصميم بروتوكول الفصل. [ 5 ] يلخص الجدول أدناه أنواع تفاعلات الارتباط الشائعة الاستخدام في إجراءات كروماتوغرافيا التقارب.

التفاعلات البيولوجية النموذجية المستخدمة في كروماتوغرافيا التقارب [ 6 ]
الرقم التسلسليأنواع الليجاندالجزيء المستهدف
1نظير الركيزةالإنزيمات
2الأجسام المضادةمستضد
3الليكتينعديد السكاريد
4الحمض النوويتسلسل القاعدة التكميلية
5هرمونمستقبل
6أفيدينالبيوتين / جزيء مقترن بالبيوتين
7الكالمودولينشريك ارتباط الكالمودولين
8الجلوتاثيونبروتين اندماجي GST
9البروتين أ أو البروتين جالغلوبولينات المناعية
10النيكل - NTAبروتين اندماجي متعدد الهيستيدين

إعدادات الدفعات والأعمدة

مبدأ كروماتوغرافيا التقارب العمودي
الفصل الكروماتوغرافي الدفعي

يمكن تحقيق الارتباط بالطور الصلب باستخدام كروماتوغرافيا العمود، حيث تُعبأ المادة الصلبة على عمود، ثم يُمرر المزيج الأولي عبر العمود للسماح بالترسيب، ثم يُمرر محلول غسيل، ثم يُضاف محلول الإذابة ويُجمع. تُجرى هذه الخطوات عادةً عند الضغط الجوي. بدلاً من ذلك، يمكن تحقيق الارتباط باستخدام معالجة دفعية، على سبيل المثال، بإضافة المزيج الأولي إلى الطور الصلب في وعاء، ثم الخلط، وفصل الطور الصلب، وإزالة الطور السائل، والغسل، وإعادة الطرد المركزي، وإضافة محلول الإذابة، وإعادة الطرد المركزي، وإزالة المادة المُذابة.

في بعض الأحيان يتم استخدام طريقة هجينة بحيث يتم الربط بطريقة الدفعات، ولكن يتم تعبئة الطور الصلب المرتبط بالجزيء المستهدف على عمود ويتم إجراء الغسل والإذابة على العمود.

تُستخلص الروابط المستخدمة في كروماتوغرافيا التقارب من مصادر عضوية وغير عضوية. ومن أمثلة المصادر البيولوجية بروتينات المصل، واللكتينات، والأجسام المضادة. أما المصادر غير العضوية فتشمل حمض المورونيك، ومخلبات المعادن، وأصباغ التريازين. [ 7 ]

كما طُوّرت طريقة ثالثة، هي الامتصاص في طبقة موسعة، تجمع بين مزايا الطريقتين المذكورتين أعلاه. تُوضع جزيئات الطور الصلب في عمود يُضخ إليه الطور السائل من الأسفل ويخرج من الأعلى. ويضمن وزن الجزيئات عدم خروج الطور الصلب من العمود مع الطور السائل.

يمكن فصل أعمدة التقارب عن طريق تغيير تركيزات الملح، ودرجة الحموضة، ونقطة التعادل الكهربائي، والشحنة، والقوة الأيونية بشكل مباشر أو من خلال تدرج لفصل الجزيئات ذات الأهمية.

في الآونة الأخيرة، طُوّرت أنظمة تستخدم أكثر من عمود متصل على التوالي. وتكمن ميزتها مقارنةً بالأنظمة أحادية العمود في إمكانية تحميل مادة الراتنج بالكامل، حيث يُمرر المنتج غير المرتبط مباشرةً إلى عمود لاحق مزود بمادة راتنج جديدة. تُعرف هذه العمليات الكروماتوغرافية باسم كروماتوغرافيا التيار المعاكس الدورية (PCC). وبذلك، يمكن خفض تكلفة الراتنج لكل وحدة من المنتج المُنتَج بشكل كبير. ولأنه يمكن دائمًا غسل أحد الأعمدة وتجديده أثناء تحميل العمود الآخر، فإن عمودين يكفيان للاستفادة الكاملة من هذه المزايا. [ 8 ] ويمكن للأعمدة الإضافية أن توفر مرونة أكبر في أوقات الغسل والتجديد، ولكن على حساب تكاليف إضافية للمعدات والراتنج.

استخدامات محددة

يمكن استخدام كروماتوغرافيا التقارب في عدد من التطبيقات، بما في ذلك تنقية الأحماض النووية، وتنقية البروتين [ 9 ] من المستخلصات الخالية من الخلايا، والتنقية من الدم.

باستخدام تقنية كروماتوغرافيا التقارب، يمكن فصل البروتينات التي ترتبط بجزء معين عن البروتينات التي لا ترتبط بهذا الجزء. [ 10 ] ولأن هذه التقنية تعتمد على الخصائص البيولوجية للبروتين المطلوب، فهي تقنية مفيدة، ويمكن من خلالها تنقية البروتينات عدة مرات في خطوة واحدة. [ 11 ]

وسائل الإعلام المختلفة ذات الصلة

توجد العديد من وسائط التقارب المختلفة لمجموعة متنوعة من الاستخدامات المحتملة. [ 12 ] [ 9 ] [ 13 ] باختصار، هي وسائط مُنشَّطة/مُفعَّلة (بشكل عام) تعمل كفاصل وظيفي، ومصفوفة داعمة، وتُغني عن التعامل مع الكواشف السامة.

تُستخدم أوساط الأحماض الأمينية مع مجموعة متنوعة من بروتينات المصل، والبروتينات، والببتيدات، والإنزيمات، بالإضافة إلى الحمض النووي الريبوزي (rRNA) والحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين ثنائي السلسلة (dsDNA). وتُستخدم أوساط الأفيدين والبيوتين في عملية تنقية البيوتين/الأفيدين ومشتقاتهما.

يُستخدم ربط الكربوهيدرات غالبًا مع البروتينات السكرية أو أي مادة أخرى تحتوي على الكربوهيدرات؛ بينما تُستخدم الكربوهيدرات مع الليكتينات، والبروتينات السكرية، أو أي بروتين آخر ناتج عن استقلاب الكربوهيدرات. تُعد وسائط ربط الصبغة غير نوعية، لكنها تُحاكي الركائز والبروتينات البيولوجية. يُعد الجلوتاثيون مفيدًا لفصل البروتينات المؤتلفة الموسومة بـ GST. أما الهيبارين فهو رابط ذو ألفة عامة، وهو مفيد جدًا لفصل بروتينات تخثر البلازما، بالإضافة إلى إنزيمات الأحماض النووية والليبازات.

تُستخدم وسائط التفاعل الكارهة للماء بشكل شائع لاستهداف مجموعات الكربوكسيل الحرة والبروتينات.

تستخدم وسائط التقارب المناعي (المفصلة أدناه) الخصوصية العالية للمستضدات والأجسام المضادة للفصل؛ يتم تفصيل كروماتوغرافيا تقارب المعادن المثبتة أدناه وتستخدم التفاعلات بين أيونات المعادن والبروتينات (عادة ما تكون موسومة بشكل خاص) للفصل؛ النيوكليوتيد/الإنزيم المساعد الذي يعمل على فصل نازعات الهيدروجين والكينيزات والترانساميناز.

تُستخدم الأحماض النووية لحجز الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) والحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) والحمض النووي الريبوزي الريبوسومي (rRNA) وغيرها من الأحماض النووية/الأوليغونوكليوتيدات. وتُستخدم طريقة البروتين A/G لتنقية الغلوبولينات المناعية.

تم تصميم الوسائط المتخصصة لفئة أو نوع معين من البروتين/الإنزيم المساعد؛ هذا النوع من الوسائط سيعمل فقط على فصل بروتين أو إنزيم مساعد معين.

التقارب المناعي

يُستخدم هذا الإجراء أيضًا في تنقية الأجسام المضادة من مصل الدم باستخدام تقنية الفصل المناعي بالتقارب. فإذا كان المصل معروفًا باحتوائه على أجسام مضادة لمستضد معين (على سبيل المثال، إذا كان المصل مأخوذًا من كائن حي مُحصَّن ضد هذا المستضد)، فيمكن استخدامه لتنقية ذلك المستضد باستخدام هذه التقنية. تُعرف هذه التقنية أيضًا باسم كروماتوغرافيا التقارب المناعي. فعلى سبيل المثال، إذا تم تحصين كائن حي ضد بروتين اندماجي مع GST، فإنه سينتج أجسامًا مضادة ضد هذا البروتين الاندماجي، وربما أجسامًا مضادة ضد علامة GST أيضًا. بعد ذلك، يمكن ربط البروتين تساهميًا بدعامة صلبة مثل الأغاروز واستخدامه كرابط تقارب في تنقية الأجسام المضادة من المصل المناعي.

لضمان الدقة، يمكن ربط بروتين GST وبروتين GST المدمج بشكل منفصل. يُترك المصل في البداية ليرتبط بمصفوفة تقارب GST، مما يؤدي إلى إزالة الأجسام المضادة لجزء GST من البروتين المدمج. بعد ذلك، يُفصل المصل عن الدعامة الصلبة ويُترك ليرتبط بمصفوفة بروتين GST المدمج، مما يسمح بالتقاط أي أجسام مضادة تتعرف على المستضد على الدعامة الصلبة. غالبًا ما يتم استخلاص الأجسام المضادة المطلوبة باستخدام محلول منظم منخفض الحموضة ، مثل محلول الجليسين بدرجة حموضة 2.8. يُجمع المستخلص في محلول منظم متعادل من التريس أو الفوسفات، لمعادلة محلول الاستخلاص منخفض الحموضة ومنع أي تدهور في فعالية الجسم المضاد. يُعد هذا مثالًا جيدًا، حيث تُستخدم عملية تنقية التقارب لتنقية بروتين GST المدمج الأولي، وإزالة الأجسام المضادة غير المرغوب فيها لـ GST من المصل، وتنقية الجسم المضاد المستهدف.

يمكن أيضاً اختيار الأجسام المضادة وحيدة النسيلة للارتباط بالبروتينات بدقة عالية، حيث يتم إطلاق البروتين في ظروف معتدلة نسبياً. وقد يكون لهذا الأمر فائدة في أبحاث مستقبلية. [ 14 ]

تُستخدم استراتيجية مبسطة غالبًا لتنقية الأجسام المضادة المُنتجة ضد مستضدات الببتيد . عند إنتاج مستضدات الببتيد صناعيًا، تُضاف بقايا سيستين طرفية إما إلى الطرف الأميني (N) أو الطرف الكربوكسيلي (C) للببتيد. تحتوي بقايا السيستين هذه على مجموعة وظيفية سلفهيدريل، مما يُسهل ربط الببتيد ببروتين حامل (مثل هيموسيانين المحار ذي الثقب المفتاحي (KLH)). يُثبّت الببتيد نفسه المحتوي على السيستين على راتنج الأغاروز عبر بقايا السيستين، ثم يُستخدم لتنقية الجسم المضاد.

تم تنقية معظم الأجسام المضادة وحيدة النسيلة باستخدام كروماتوغرافيا التقارب القائمة على البروتين A أو البروتين G الخاص بالغلوبولين المناعي ، والمستخلص من البكتيريا. [ 15 ]

استُخدمت تقنية كروماتوغرافيا التقارب المناعي باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المثبتة على عمود متجانس بنجاح لالتقاط الحويصلات خارج الخلوية (مثل الإكسوسومات والإكسوميرات) من بلازما الدم البشري عن طريق استهداف بروتينات التتراسبانين والإنترغرينات الموجودة على سطح هذه الحويصلات. [ 16 ] [ 17 ]

تُعدّ تقنية كروماتوغرافيا التقارب المناعي أساسًا لشرائط اختبار الكروماتوغرافيا المناعية (ICT)، التي توفر وسيلة تشخيص سريعة في رعاية المرضى. وباستخدام هذه التقنية، يستطيع الفني إجراء التشخيص بجانب سرير المريض، دون الحاجة إلى مختبر. [ 18 ] يتميز الكشف بتقنية الكروماتوغرافيا المناعية (ICT) بدقة عالية في تحديد الميكروب المُسبب للعدوى. [ 19 ]

استُخدمت تقنية كروماتوغرافيا التقارب المناعي لعزل مكونات الدم بشكل انتقائي، بما في ذلك الخلايا الليمفاوية وبروتينات محددة، باستخدام أطوار ثابتة مُعدّلة بالأجسام المضادة. [ 20 ] على الرغم من أنها ليست طريقة روتينية لتقدير الوقت المنقضي منذ ترسب بقع الدم، إلا أن التحليلات الجزيئية المُستهدفة المُستخدمة في أبحاث تقدير الوقت المنقضي منذ ترسب بقع الدم - مثل علم البروتينات، وعلم الأيض، وتحليل الأحماض النووية - قد تتضمن خطوات إثراء قائمة على التقارب المناعي لتحسين حساسية الكشف عن المؤشرات الحيوية منخفضة الوفرة. [ 21 ] [ 22 ] كما تُستخدم طرق الكشف القائمة على الأجسام المضادة في علم الأمصال الجنائي لتحديد الدم وتقييم ثباته على الركائز بمرور الوقت، مما يُظهر الدور الأوسع للخصوصية المناعية في تحليل سوائل الجسم في الطب الشرعي. [ 23 ]

كروماتوغرافيا تقارب أيونات المعادن المثبتة

تعتمد تقنية كروماتوغرافيا تقارب أيونات المعادن المثبتة (IMAC) على الرابطة التساهمية التناسقية المحددة للأحماض الأمينية، وخاصة الهيستيدين، مع المعادن. تعمل هذه التقنية عن طريق السماح للبروتينات ذات الألفة لأيونات المعادن بالبقاء في عمود يحتوي على أيونات معدنية مثبتة، مثل الكوبالت أو النيكل أو النحاس لتنقية البروتينات أو الببتيدات المحتوية على الهيستيدين، أو الحديد أو الزنك أو الغاليوم لتنقية البروتينات أو الببتيدات المفسفرة. لا تمتلك العديد من البروتينات الموجودة في الطبيعة ألفة لأيونات المعادن، لذلك يمكن استخدام تقنية الحمض النووي المؤتلف لإدخال علامة بروتينية في الجين ذي الصلة. تشمل الطرق المستخدمة لفصل البروتين المطلوب تغيير الرقم الهيدروجيني، أو إضافة جزيء منافس، مثل الإيميدازول . [ 24 ] [ 25 ]

عمود كروماتوغرافي يحتوي على خرزات من النيكل والأغاروز يُستخدم لتنقية البروتينات التي تحمل علامات الهيستيدين

البروتينات المؤتلفة

ربما يكون الاستخدام الأكثر شيوعًا لتقنية كروماتوغرافيا التقارب هو تنقية البروتينات المُعاد تركيبها. تُوسَم البروتينات ذات التقارب المعروف بعلامات بروتينية لتسهيل تنقيتها. قد يكون البروتين مُعدَّلًا وراثيًا ليُمكن اختياره للارتباط بالتقارب؛ وهذا ما يُعرف بالبروتين المُدمج. تشمل العلامات البروتينية : الهيستيدين السداسي ( His )، وناقلة الغلوتاثيون- S (GST)، وبروتين ربط المالتوز (MBP)، وعلامة CL7 لمتغير الكوليسين E7. تتميز علامات الهيستيدين بتقاربها مع أيونات النيكل والكوبالت والزنك والنحاس والحديد ، والتي تُثبَّت بتكوين روابط تساهمية تناسقية مع عامل مُخلِّب مُدمج في الطور الثابت. وللإذابة، تُستخدم كمية زائدة من مُركَّب قادر على العمل كرابط لأيون معدني ، مثل الإيميدازول . يتمتع إنزيم GST بألفة تجاه الجلوتاثيون، المتوفر تجاريًا على شكل أجاروز غلوتاثيون. أثناء عملية الإذابة، يُستخدم فائض من الجلوتاثيون لإزاحة البروتين الموسوم. يتمتع إنزيم CL7 بألفة ونوعية تجاه بروتين المناعة 7 (Im7)، المتوفر تجاريًا على شكل راتنج أجاروز Im7. ولإذابة هذا البروتين، يُضاف بروتياز نشط ومحدد الموقع إلى راتنج Im7 لتحرير البروتين غير الموسوم. [ 26 ]

الليكتينات

كروماتوغرافيا الألفة بالليكتين هي نوع من كروماتوغرافيا الألفة، حيث تُستخدم الليكتينات لفصل مكونات العينة. الليكتينات، مثل كونكانافالين أ، هي بروتينات ترتبط بجزيئات كربوهيدرات محددة من ألفا-دي-مانوز وألفا-دي-جلوكوز. من جزيئات الكربوهيدرات الشائعة المستخدمة في كروماتوغرافيا الألفة بالليكتين: كونكانافالين أ-سيفاروز وWGA-أجاروز. [ 27 ] مثال آخر على الليكتين هو أغلوتينين جنين القمح الذي يرتبط بـ DN-أسيتيل-جلوكوزامين. [ 28 ] يُستخدم هذا النوع من الكروماتوغرافيا بشكل شائع لفصل البروتينات السكرية عن البروتينات غير السكرية، أو لفصل شكل سكري عن آخر. [ 29 ] على الرغم من وجود طرق متنوعة لإجراء كروماتوغرافيا الألفة بالليكتين، إلا أن الهدف هو استخلاص ربيطة سكرية للبروتين المطلوب. [ 27 ]

تخصص

يُستخدم فصل البروتينات باستخدام مصفوفة هلامية فريدة لكل بروتين على حدة في تقنية كروماتوغرافيا التقارب. فعلى سبيل المثال، تُنقى إنزيم بيتا-جالاكتوزيداز من بكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام كروماتوغرافيا التقارب مع استخدام مادة p-أمينوبينيل-1-ثيو-بيتا-دي-جالاكتوبيرانوزيل أجاروز كمصفوفة تقارب. يُستخدم هذا المركب لاحتوائه على مجموعة جالاكتوبيرانوزيل، التي تُعدّ ركيزة مثالية لإنزيم بيتا-جالاكتوزيداز. تسمح هذه الخاصية للإنزيم بالارتباط بالطور الثابت لمصفوفة التقارب، ويتم فصل بيتا-جالاكتوزيداز بإضافة تراكيز متزايدة من الملح إلى العمود. [ 30 ]

الفوسفاتاز القلوي

يمكن تنقية الفوسفاتاز القلوي من بكتيريا الإشريكية القولونية باستخدام مصفوفة DEAE-سليلوز. يتميز الفوسفاتاز القلوي بشحنة سالبة طفيفة، مما يسمح له بالارتباط بشكل ضعيف بمجموعات الأمين الموجبة الشحنة في المصفوفة. بعد ذلك، يمكن استخلاص الإنزيم بإضافة محلول منظم ذي تركيزات ملحية أعلى. [ 31 ]

كروماتوغرافيا التقارب مع البورونات

تعتمد تقنية كروماتوغرافيا التقارب مع البورونات على استخدام حمض البورونيك أو البورونات لفصل وتحديد كميات البروتينات السكرية . وقد طُبقت هذه التقنية سريريًا لتقييم حالة مرضى السكري على المدى الطويل من خلال تحليل الهيموجلوبين السكري لديهم . [ 28 ]

تنقية ألبومين المصل

يُعدّ تنقية الألبومين والغلوبولين الكلي باستخدام تقنية التقارب مفيدًا في إزالة فائض الألبومين والغلوبولين الكلي ألفا 2 عند إجراء قياس الطيف الكتلي. في تنقية ألبومين المصل باستخدام تقنية التقارب، يمكن استخدام سيباكرون بلو-سيفاروز كمادة ثابتة لجمع أو جذب بروتينات المصل. بعد ذلك، يمكن فصل بروتينات المصل عن المادة الماصة باستخدام محلول منظم يحتوي على ثيوسيانات (SCN⁻ ) . [ 32 ]

كروماتوغرافيا التقارب الضعيف

كروماتوغرافيا التقارب الضعيف [ 33 ] ( WAC ) هي تقنية كروماتوغرافيا تقارب تُستخدم في فحص التقارب في تطوير الأدوية. [ 34 ] [ 35 ] تعتمد WAC على تقنية كروماتوغرافيا سائلة تعتمد على التقارب، حيث تفصل المركبات الكيميائية بناءً على تقاربها الضعيف المتفاوت مع هدف مُثبَّت. كلما زاد تقارب المركب مع الهدف، زادت مدة بقائه في وحدة الفصل، مما يُعبَّر عنه بزمن احتجاز أطول. يُمكن قياس التقارب وتصنيفه من خلال معالجة أزمنة الاحتجاز المُستخلصة للمركبات المُحلَّلة. تُعد كروماتوغرافيا التقارب جزءًا من مجموعة أوسع من التقنيات المُستخدمة في تحديد أهداف الأدوية باستخدام الكيمياء البروتينية .

تم تطبيق تقنية WAC على عدد من البروتينات المستهدفة المختلفة، بما في ذلك البروتيازات ، والكينيزات ، والبروتينات المرافقة ، وبروتينات التفاعل بين البروتينات (PPI). وقد أثبتت تقنية WAC فعاليتها مقارنةً بالطرق التقليدية المستخدمة في فحص البروتينات باستخدام التجزئة. [ 35 ]

تاريخ

تم ابتكار وتطوير تقنية كروماتوغرافيا التقارب لأول مرة بواسطة بيدرو كواتريكاساس ومئير ويلتشيك . [ 36 ] [ 37 ]

مراجع

  1. ^ أيزبوروا-أولايزولا، أوير؛ ساستر تورانو، خافيير؛ بوكين، ألياكس؛ فو، أوي؛ بونز، جيرت جان؛ دي يونج، غيرهاردوس J.؛ بيترز ، رولاند ج. (يناير 2018). “الرحلان الكهربائي الشعري لتقييم التقارب الملزم لمثبطات توكسين الكوليرا المعتمدة على الكربوهيدرات”. الرحلان الكهربائي . 39 (2): 344-347 . دوى : 10.1002/elps.201700207 . اتش دي ال : 1874/362143 . بميد 28905402 . S2CID 33657660 .  
  2. ↑ نينفا، ألكسندر ج.؛ بالو، ديفيد ب.؛ بينور، ماريلي (2009). مناهج المختبر الأساسية للكيمياء الحيوية والتكنولوجيا الحيوية ( الطبعة الثانية). وايلي. ص 133. ISBN   978-0-470-08766-4.
  3. ↑ ""مقدمة في كروماتوغرافيا التقارب"" . bio-rad.com . Bio-Rad. 14 سبتمبر 2020 . تم الاطلاع عليه بتاريخ 14 سبتمبر 2020 .
  4. ↑ زاخاريو، مايكل، محرر. (2008). كروماتوغرافيا التقارب: الطرق والبروتوكولات ( الطبعة الثانية). توتوا، نيوجيرسي: دار هومانا للنشر. الصفحات 1-2 . ISBN   978-1-58829-659-7.
  5. 1 2 بونر، فيليب إل آر (2007). تنقية البروتين ( الطبعة الثانية). توتوا، نيوجيرسي: مجموعة تايلور وفرانسيس. ISBN  978-0-415-38511-4.
  6. ↑ كومار، براناف (2018). الفيزياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية . نيودلهي: منشورات باثفايندر. ص 11. ISBN  978-93-80473-15-4.
  7. ↑ فانالي، سالفاتور؛ حداد، بول ر.؛ بول، كولين ف.؛ شوينماكرز، بيتر؛ لويد، ديفيد، محرران. (2013). الكروماتوغرافيا السائلة: تطبيقات . كتيبات في علوم الفصل. سانت لويس: إلسيفير. ص 3. ISBN  978-0-12-415806-1.
  8. ↑ باور، دانيال؛ أنغاريتا، مونيكا؛ مولر-سباث، توماس؛ شتاينباخ، فابيان؛ موربيديلي، ماسيمو (2016). "مقارنة عمليات استخلاص البروتين A متعددة الأعمدة الدفعية والمستمرة من خلال التصميم الأمثل". مجلة التكنولوجيا الحيوية . 11 (7): 920-931 . doi : 10.1002/biot.201500481 . hdl : 11311/1013726 . PMID 26992151. S2CID 205492204 .  
  9. 1 2 "كيوب للتكنولوجيا الحيوية" . كيوب للتكنولوجيا الحيوية . تم الاطلاع عليه بتاريخ 11 سبتمبر 2019 .
  10. ↑ أهيرن، كيفن؛ راجاجوبال، إنديرا (12 فبراير 2015). الكيمياء الحيوية مجاناً وبسهولة ( الطبعة الثالثة). دار نشر دافنشي. ص 822. hdl : 10211.3/206119 .  
  11. ↑ غريشام، تشارلز م. (1 يناير 2013). الكيمياء الحيوية . بروكس/كول، سينغيج ليرنينج. ISBN 978-1-133-10629-6. OCLC 777722371 . 
  12. ↑ محمودي جوماري، محمد؛ سرايجورد أفشاري، ندى؛ فارسيمادان، مرضية؛ رستمي، ندى؛ أغاميري، شاهين؛ فرج اللهي، محمد م. (1 ديسمبر 2020). "فرص وتحديات تقنيات تنقية البروتين بمساعدة الوسم: تطبيقات في صناعة الأدوية" . Biotechnology Advances . 45 107653. doi : 10.1016/j.biotechadv.2020.107653 . ISSN 0734-9750 . PMID 33157154. S2CID 226276355 .   
  13. ↑ "الكروماتوغرافيا التقاربية" .
  14. ↑ تومسون، نانسي إي.؛ فولي، كاثرين إم.؛ ستالدر، إليزابيث إس.؛ بورغيس، ريتشارد آر. (2009). "الفصل 28: تحديد وإنتاج واستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المستجيبة للبوليول في كروماتوغرافيا التقارب المناعي". دليل تنقية البروتين، الطبعة الثانية . طرق في علم الإنزيمات. المجلد 463. الصفحات 475-494 . doi : 10.1016/s0076-6879(09)63028-7 . ISBN   978-0-12-374536-1PMID 19892188​​ 
  15. ↑ أولين، ماتياس (أبريل 2008). "التقارب كأداة في علوم الحياة" . تقنيات حيوية . 44 (5): 649-654 . doi : 10.2144/000112803 . PMID 18474040 . 
  16. ↑ مولتيا، إيفجين؛ تير، كريستال جينغ يينغ؛ بالفيانين، ماري؛ سيلجاندر، بيا؛ ريكولا، ماريا-ليسا (ديسمبر 2019). "عزل سريع لمجموعة عالية التخصص من الحويصلات خارج الخلوية المشتقة من الصفائح الدموية من بلازما الدم بواسطة عمود أحادي الكتلة ذي تقارب، مثبت عليه جسم مضاد بشري لـ CD61". مجلة Analytica Chimica Acta . 1091 : 160-168 . Bibcode : 2019AcAC.1091..160M . doi : 10.1016/j.aca.2019.09.022 . hdl : 10138/321264 . PMID 31679569. S2CID 203147714 .  
  17. ↑ مولتيا، إيفجين؛ ليانغسوبري، ثانابورن؛ جوسيلا، ماتي؛ رويز-خيمينيز، خوسيه؛ كيميل، ماريانا؛ ريكولا، ماريا-ليسا (6 أكتوبر 2020). "نظام عزل وتجزئة آلي مباشر للجزيئات الحيوية النانوية من بلازما الدم البشري" . الكيمياء التحليلية . 92 (19): 13058-13065 . doi : 10.1021/acs.analchem.0c01986 . PMC 7586295. PMID 32893620 .  
  18. ↑ لوبا، بيتر (2018). اختبارات التشخيص السريع: المبادئ والتطبيقات السريرية . برلين، ألمانيا: سبرينغر. الصفحات 71-72 . ISBN  978-3-662-54497-6.
  19. ↑ مولر، جيه دي؛ ويلكس، سي آر؛ أورايلي، كيه جيه؛ كوندورن، آر جيه؛ بول، آر؛ ماتيكزون، إيه. (أبريل 2004). "خصوصية اختبار الكروماتوغرافيا المناعية للجمرة الخبيثة". المجلة البيطرية الأسترالية . 82 (4): 220-222 . doi : 10.1111/j.1751-0813.2004.tb12682.x . PMID 15149073 . 
  20. ↑ موهر، فابيان؛ برزيبيللا، سابين؛ ليونهاردت، فرانزيسكا؛ ستيمبرجر، كريستيان؛ دريهر، ستيفان؛ مولر، توماس ر؛ فراسلي، سيمون ب؛ شميدت، جورج ب؛ كين، ماري لويز؛ ستادلر، هربرت؛ بوش، ديرك هـ (13 نوفمبر 2018). "فصل الخلايا الليمفاوية بكفاءة عالية باستخدام كروماتوغرافيا التقارب المناعي مباشرة من الدم الكامل" . التقارير العلمية . 8 .
  21. ↑ إليوت، كولين آي؛ شيفر، آرون بي؛ ستوتسبري، تيريزا إي (23 أكتوبر 2022). "جوهر الوقت: تحليل تلوي لتدهور الدم الكامل خارج الجسم الحي" . مجلة العلوم الجنائية الدولية: التآزر . 2 .
  22. ↑ ساكو، ماتيو أ؛ غوالتيري، سافيريو؛ تارالو، أليساندرو ب؛ كالانا، لوكا؛ روسا، رافاييل ل؛ أكويلا، إيزابيلا (8 يوليو 2024). "دور التحليلات الجزيئية في تقدير الوقت المنقضي منذ ترسب بقع الدم: مراجعة منهجية للأدبيات" (ملف PDF) . الكيمياء الجنائية . 30 .
  23. ↑ ميدينا-باز، فرانسيسكو؛ كوبا، براندون؛ كريفوروتسكي، إميلي؛ روكا، غابرييلا؛ زابيكو، سارة سي (20 مارس 2024). "تقييم الكشف عن الدم والسائل المنوي وجمع الحمض النووي من المسحات لمدة تصل إلى ثلاثة أشهر بعد وضعها على خمسة أنواع مختلفة من الأقمشة" . مجلة العلوم الجنائية الدولية . 25 .
  24. ↑ سينغ، نافين ك.؛ ديسوزا، روي ن.؛ بيبي، نور س.؛ فرنانديز-لاهور، مارسيلو (2015). "الاستخلاص المباشر للبروتينات الموسومة بـ His6 باستخدام الهلاميات المبردة ذات المسام الكبيرة المطورة لكروماتوغرافيا تقارب الأيونات المعدنية" . في: رايشيلت، س. (محرر). كروماتوغرافيا التقارب . طرق في البيولوجيا الجزيئية. المجلد 1286. نيويورك: دار هومانا للنشر. الصفحات 201-212 . doi : 10.1007/978-1-4939-2447-9_16 . ISBN   978-1-4939-2447-9PMID 25749956​​ 
  25. ↑ جابرك-بوريكار، فلادكا ك.؛ مينارت، فيكتور (2001). "آفاق كروماتوغرافيا تقارب المعادن المثبتة". مجلة طرق الكيمياء الحيوية والفيزياء الحيوية . 49 ( 1-3 ): 335-360 . doi : 10.1016/S0165-022X(01)00207-X . PMID 11694288 . 
  26. ↑ فاسيليفا، مارينا ن.؛ كلييف، سيرجي؛ فاسيليف، أليكسي د.؛ ويسون، هنتر؛ تشانغ، تشو؛ رينفرو، ماثيو ب.؛ وانغ، هينغبين؛ هيغينز، ن. باتريك؛ تشاو، لويز ت.؛ فاسيليف، ديمتري ج. (27 يونيو 2017). "تقنية كروماتوغرافيا فائقة الكفاءة وعالية التقارب في تنقية البروتينات المعقدة بخطوة واحدة" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 114 (26): E5138 –E5147. Bibcode : 2017PNAS..114E5138V . doi : 10.1073/pnas.1704872114 . ISSN 0027-8424 . PMC 5495267 . PMID 28607052 .   
  27. 1 2 فريز، إتش إتش (مايو 2001). "كروماتوغرافيا تقارب الليكتين". البروتوكولات الحالية في علم البروتين . الصفحات 9.1.1–9.1.9. doi : 10.1002/0471140864.ps0901s00 . ISBN  978-0-471-14086-3ISSN 1934-3663 . PMID 18429210. S2CID 3197260 .​​   
  28. 1 2 هاج، ديفيد (مايو 1999). "الكروماتوغرافيا التقاربية: مراجعة للتطبيقات السريرية" (ملف PDF) . الكيمياء السريرية . 45 (5): 593-615 . doi : 10.1093/clinchem/45.5.593 . PMID 10222345 . 
  29. ↑ "جي إي هيلث كير لايف ساينسز، الليكتين المثبت" . مؤرشف من الأصل في 3 مارس 2012. تم الاطلاع عليه في 29 نوفمبر 2010 .
  30. ↑ نينفا، ألكسندر جيه؛ بالو، ديفيد بي؛ بينور، ماريلي (2006). مناهج المختبر الأساسية للكيمياء الحيوية والتكنولوجيا الحيوية ( الطبعة الثانية). وايلي. ص 153.  
  31. ↑ نينفا، ألكسندر جيه؛ بالو، ديفيد بي؛ بينور، ماريلي (2010). مناهج المختبر الأساسية للكيمياء الحيوية والتكنولوجيا الحيوية ( الطبعة الثانية). هوبوكين، نيوجيرسي: جون وايلي. ص 240. ISBN   978-0-470-08766-4. OCLC 420027217 . 
  32. ^ نافال ، خافيير. كالفو، ميغيل. لامبريف، فيرمين؛ بينيرو ، أندريس (1 يناير 1983). “الكروماتوغرافيا المتقاربة لألبومين المصل: تجربة معملية توضيحية حول التفاعلات الجزيئية الحيوية”. التعليم البيوكيميائي . 11 (1): 5– 8. دوى : 10.1016/0307-4412(83)90004-3 . ردمك 1879-1468 . 
  33. ↑ زوبف، د.؛ أولسون، س. (يوليو 1990). "الكروماتوغرافيا ذات التقارب الضعيف". نيتشر . 346 (6279): 87-88 . Bibcode : 1990Natur.346...87Z . doi : 10.1038/346087a0 . ISSN 0028-0836 . S2CID 4306269 .  
  34. ↑ دوونغ-ثي، دكتور في الطب؛ ميبي، إي.؛ بيرغستروم، م.؛ فيكس، ت.؛ إيساكسون، ر.؛ أولسون، س. (2011). "الكروماتوغرافيا ذات التقارب الضعيف كنهج جديد لفحص الشظايا في اكتشاف الأدوية". الكيمياء الحيوية التحليلية . 414 (1): 138-146 . doi : 10.1016/j.ab.2011.02.022 . PMID 21352794 . 
  35. 1 2 ميبي، إي.؛ سيمونيت، هـ.؛ لو سترات، ل.؛ ديفيس، ب.؛ ماتاسوفا، ن.؛ مور، ج.د.؛ مروسيك، م.؛ موراي، ج.؛ هوبارد، ر.إي.؛ أولسون، س. (2013). "فحص الشظايا بواسطة كروماتوغرافيا التقارب الضعيف: مقارنة بالتقنيات الراسخة للفحص ضد HSP90". الكيمياء التحليلية . 85 (14): 6756-6766 . doi : 10.1021/ac400715t . PMID 23806099 . 
  36. ↑ "مئير ويلتشيك - مؤسسة وولف" . مؤسسة وولف . 9 ديسمبر 2018. تم الاطلاع عليه في 17 مارس 2021. كروماتوغرافيا التقارب هي تقنية حديثة ابتكرها كواتريكاساس وويلتشيك .
  37. ↑ كواتريكاساس، ب؛ ويلتشيك، م؛ أنفينسن، س.ب. (أكتوبر 1968). "التنقية الانتقائية للإنزيمات بواسطة كروماتوغرافيا التقارب" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم . 61 (2): 636-643 . Bibcode : 1968PNAS...61..636C . doi : 10.1073/pnas.61.2.636 . PMC 225207. PMID 4971842 .