فأر مُخَدَّر

📅 آخر تحديث: ٢٨ يوليو ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٢٨ يوليو ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 4 صور
الموسوعة الحرة

الفأر المُعدَّل جينيًا (الفئران المُعطَّلة جينيًا) هو فأر مُعدَّل وراثيًا تم تعطيل جين واحد فيه من خلال طفرة مُستهدفة (تقنية اصطياد الجينات )، ويُستخدم في البحوث الأكاديمية والصيدلانية . تُحاكي هذه الفئران الأمراض البشرية، وتُعد أدوات مهمة لدراسة وظائف الجينات ( علم الجينوم الوظيفي ) واكتشاف الأدوية وتطويرها. لم يكن إنتاج الفئران المُعطَّلة جينيًا مُجديًا اقتصاديًا أو تقنيًا حتى عام 2008. [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ]

التكنولوجيا التي تم تطويرها بتمويل من المعاهد الوطنية للصحة (NIH) والعمل الذي أنجزه أعضاءأدى اتحاد فئران نوك آوت (KORC) إلى ابتكار أساليب فعّالة من حيث التكلفة لإنتاج فئران نوك آوت. وتتجلى أهمية تطوير الفئران كأداة أكثر تنوعًا لأبحاث الصحة البشرية في استثمار المعاهد الوطنية للصحة (NIH) مبلغ 120 مليون دولار عبرمشروع تسلسل جينوم الفئران ، الذي أسفر عن تسلسل أولي لسلالة مخبرية من الفأر البني أو فأر النرويج ( Rattus norvegicus ). [ 5 ] أدت التطورات الإضافية في تقنية نوكلياز أصابع الزنك في عام 2009 إلى إنتاج أول فأر معدل وراثيًا يحمل طفرات مستهدفة تنتقل عبر الخلايا الجنسية. [ 6 ] تقوم شركة SAGE Labs حاليًا بتسويق نماذج الفئران المعدلة وراثيًا لأمراض باركنسون ، وألزهايمر ، وارتفاع ضغط الدم ، والسكري باستخدام تقنية نوكلياز أصابع الزنك. [ 7 ] [ 8 ]

الاستخدام البحثي

تتشابه الفئران والجرذان والبشر في جميع جيناتهم تقريبًا باستثناء 1% منها [ 5 ] [ 9 ] [ 10 ]، مما يجعل القوارض نماذج حيوانية ممتازة لدراسة وظائف الجينات البشرية. تتميز كل من الفئران والجرذان بصغر حجمها وسهولة التعامل معها وقصر دورة حياتها، فضلًا عن كونها متجانسة وراثيًا. وبينما أثبتت الفئران جدواها كنموذج حيواني مفيد، وطُوّرت تقنيات لتعطيل جيناتها بشكل روتيني، إلا أن الجرذان تُعتبر في كثير من الأحيان حيوانات مخبرية أفضل لدراسة الأمراض البشرية ونمذجتها.

تتشابه الفئران مع البشر من الناحية الفسيولوجية أكثر من الفئران. فعلى سبيل المثال، يتشابه معدل ضربات قلب الفئران مع معدل ضربات قلب البشر، بينما يكون معدل ضربات قلب الفئران أسرع بخمس إلى عشر مرات. ويُعتقد على نطاق واسع أن الفئران تُعد نموذجًا أفضل من الفئران لدراسة أمراض القلب والأوعية الدموية ، والسكري، والتهاب المفاصل ، والعديد من اضطرابات المناعة الذاتية ، والاضطرابات العصبية ، والسلوكية، والإدمان لدى البشر. [ 11 ] إضافةً إلى ذلك، تُعد نماذج الفئران أفضل من نماذج الفئران لاختبار الديناميكا الدوائية وسمية المركبات العلاجية المحتملة، ويعود ذلك جزئيًا إلى تشابه عدد ونوع العديد من إنزيمات إزالة السموم لديها مع تلك الموجودة لدى البشر. [ 12 ] كما أن حجمها الأكبر يجعل الفئران أكثر ملاءمة للدراسة باستخدام الأجهزة، ويُسهل أيضًا عمليات مثل سحب عينات الدم، وفحص التوصيل العصبي، وإجراء العمليات الجراحية.

تتوفر تقنيات التعديل الجيني في الفئران، التي تُستخدم عادةً لمحاكاة الأمراض البشرية. ورغم وجود نماذج منشورة لحذف جينات ما يقارب 60% [ 13 ] من جينات الفئران، إلا أن غالبية الأمراض البشرية الشائعة لا يوجد لها نموذج فأر معدل جينيًا . تُعد نماذج الجرذان المعدلة جينيًا بديلًا للفئران، إذ تُمكّن من إحداث طفرات جينية جديدة غير متوفرة في الفئران. كما تُكمّل هذه النماذج نماذج الفئران المعدلة وراثيًا الموجودة. وتُسهّل مقارنة طفرات الفئران والجرذان التمييز بين الأنماط الظاهرية الخاصة بالقوارض والأنماط الظاهرية العامة للثدييات .

تحديات الإنتاج

استُخدمت نماذج الفئران في تطوير العديد من مجالات البحث الطبي، بما في ذلك أمراض القلب والأوعية الدموية، والاضطرابات النفسية (دراسات التدخل السلوكي والإدمان)، وتجديد الخلايا العصبية ، وداء السكري، وزراعة الأعضاء ، واضطرابات المناعة الذاتية ( التهاب المفاصل الروماتويدي )، والسرطان ، والتئام الجروح والعظام. وبينما يُوفر إكمال تسلسل جينوم الفأر معلومات بالغة الأهمية، فإن فهم كيفية ارتباط هذه الأمراض بوظيفة الجينات يتطلب طريقة فعّالة لإنشاء نماذج فئران مُعدّلة جينيًا (حذف جينات مُحددة) يتم فيها التلاعب بتسلسلات جينومية مُعينة. تعتمد معظم تقنيات التلاعب الجيني، بما في ذلك الطفرات العشوائية باستخدام مصيدة الجينات (القائمة على الفيروسات القهقرية وغير القائمة عليها)، وحذف/إدخال الجينات، والطفرات المشروطة، على زراعة ومعالجة الخلايا الجذعية الجنينية. [ 14 ] لم يتم عزل خلايا الفئران الجذعية الجنينية إلا مؤخرًا، ولم يُبلغ عن أي دليل على تعديل الجينات فيها. وبالتالي، فإن العديد من تقنيات التلاعب الجيني المُستخدمة على نطاق واسع في الفئران غير قابلة للتطبيق في الفئران.

الأساليب المبكرة

قبل التطور التجاري لتقنية الحمض النووي المتنقل في عام 2007 وتقنية نوكلياز أصابع الزنك في عام 2009، لم تكن هناك سوى تقنيتين لإنتاج نماذج فئران لأمراض بشرية: الاستنساخ والطفرات الكيميائية باستخدام N-إيثيل-N-نيتروزويوريا ( ENU ). على الرغم من إمكانية استخدام الاستنساخ عن طريق نقل نواة الخلية الجسدية (SCNT) نظريًا لإنتاج فئران تحمل طفرات محددة عن طريق تحوير الخلايا الجسدية، ثم استخدام هذه الخلايا في عملية SCNT، إلا أن هذا النهج لم يُستخدم بنجاح لإنتاج فئران معدلة وراثيًا. إحدى مشكلات هذه الاستراتيجية هي انخفاض كفاءة SCNT بشكل كبير، حيث لم تتجاوز نسبة نجاح المحاولة الأولى المنشورة 1%. [ 15 ] في المقابل، تُعد الطفرات باستخدام ENU استراتيجية شائعة لإحداث طفرات عشوائية في الفئران، ويمكن استخدامها أيضًا في الجرذان. تتضمن هذه الطفرات استخدام مادة كيميائية، هي N-إيثيل-N-نيتروزويوريا (ENU)، لإحداث تغييرات في قاعدة واحدة في الجينوم. ينقل مركب ENU مجموعة الإيثيل إلى جذور الأكسجين أو النيتروجين في الحمض النووي، مما يؤدي إلى عدم تطابق القواعد واستبدالها. يمكن إنتاج حيوانات طافرة عن طريق حقن فأر ذكر بمادة ENU، ثم تهجينه مع أنثى من النوع البري لإنتاج نسل طافر. تُحدث الطفرات الناتجة عن ENU معدلًا عاليًا من الطفرات العشوائية، بمعدل تغيير قاعدة واحدة تقريبًا في أي جين معين لكل 200-700 مشيج. [ 16 ] على الرغم من قدرته العالية على إحداث الطفرات، إلا أن اختراق ENU المادي محدود، حيث لا يتجاوز عدد الجينات المتحولة 500 جين لكل ذكر، ونسبة ضئيلة جدًا من إجمالي الطفرات لها نمط ظاهري ملحوظ. عادةً ما يلزم إحداث آلاف الطفرات في حيوان واحد لتوليد نمط ظاهري جديد واحد.

على الرغم من التحسينات الأخيرة في تقنية ENU، [ 17 ] [ 18 ] [ 19 ] فإن تحديد الطفرات المسؤولة عن نمط ظاهري معين عادةً ما يكون صعبًا ويستغرق وقتًا طويلاً. يجب فصل الطفرات المحايدة عن الطفرات المسببة للمرض، من خلال التكاثر المكثف. ببساطة، تُعدّ طرق ENU والاستنساخ غير فعّالة لإنشاء وتحديد مواقع تعطيل الجينات في الفئران لإنشاء نماذج جديدة للأمراض البشرية. حتى عام 2007، لم يتمكن أكبر مشروع لطفرات ENU في الفئران، والذي أدارته كلية الطب في ويسكونسن، من إنتاج سوى 9 سلالات من الفئران المعطلة جينيًا خلال خمس سنوات، بتكلفة متوسطة قدرها 200,000 دولار أمريكي لكل سلالة. على الرغم من أن بعض الشركات لا تزال تتبع هذه الاستراتيجية، فقد تحولت كلية الطب في ويسكونسن إلى طريقة أكثر كفاءة وجدوى تجارية باستخدام الحمض النووي المتحرك وتقنية CompoZr ZFN.

تقنية أصابع الزنك وتقنية نوكلياز TALE

إنزيمات النيوكلياز ذات الأصابع الزنكية (ZFNs) هي إنزيمات نيوكلياز هجينة تتكون من عنصرين رئيسيين. يتألف العنصر الأول من 3 إلى 4 نطاقات أصابع زنكية، بينما يتوافق العنصر الثاني مع نطاق النيوكلياز الخاص بإنزيم FokI الداخلي. عندما تتقارب وحدتان فرعيتان من ZFN وتتحدان، فإن نطاقاتهما النيوكليازية المتطابقة تحفز حدوث كسر مزدوج في الحمض النووي [ 20 ] [ 21 ] . أما إنزيمات النيوكلياز المؤثرة الشبيهة بمنشطات النسخ (TALENs) فهي بروتينات مُهندسة ترتبط بالحمض النووي، وتُسهل التحرير المُستهدف للجينوم عن طريق إحداث كسور مزدوجة في الحمض النووي في مواقع يُحددها المستخدم. تُعد الكسور المزدوجة مهمة للطفرات الموجهة للموقع، حيث تُحفز عمليات إصلاح الحمض النووي الطبيعية في الخلية، وتحديدًا إعادة التركيب المتماثل وربط النهايات غير المتماثلة. عندما تستخدم الخلية مسار الربط غير المتجانس لإصلاح انقطاع الحمض النووي المزدوج، غالبًا ما يؤدي عدم دقة الإصلاح إلى طفرات دقيقة الاستهداف. ينتج عن ذلك أجنة ذات جينات مُعطلة مُستهدفة. [ 6 ] [ 22 ] تسمح تقنيات الحقن المجهري القياسية بإنتاج فئران مُعدلة جينيًا في غضون 4-6 أشهر. تتمثل إحدى المزايا الرئيسية لتعطيل الجينات باستخدام تقنيتي ZFN وTALEN مقارنةً باستخدام الحمض النووي المتحرك في إمكانية استهداف جين معين بشكل فريد ومحدد للتعطيل. في المقابل، تكون عمليات التعطيل التي تتم باستخدام تقنية الحمض النووي المتحرك عشوائية، وبالتالي من غير المرجح أن تستهدف الجين المطلوب.

تقنية الحمض النووي المتنقلة

تستخدم تقنية الحمض النووي المتنقل (الجين القافز) عناصر النسخ العكسي والنسخ المتحركة لإنتاج نماذج فئران معدلة وراثيًا. تلبي هذه التقنية جميع معايير نجاح عملية تعطيل الجينات في الثدييات، إذ تسمح بإحداث طفرات عشوائية مباشرة في الخلايا الجنسية ( الحيوانات المنوية والبويضات ) للكائنات الحية النموذجية، بما في ذلك الفئران. باستخدام هذه التقنية، يتم تعطيل الجينات بشكل كامل ومستقر، وبتردد عالٍ، وعشوائيًا في جميع أنحاء الجينوم. يمكن تحديد الموقع الجينومي للطفرات بسهولة، مما يُنشئ مكتبة من الفئران المعدلة وراثيًا لاستخدامها لاحقًا. بمجرد إنشاء طفرات التعطيل العشوائية، يمكن إنشاء طفرات أكثر دقة، مثل الطفرات المشروطة، عن طريق تهجين سلالات الفئران المعدلة وراثيًا مع سلالات الفئران التي تُعبر عن إنزيم CRE recombinase بطريقة خاصة بالأنسجة. يمكن إنتاج طفرات الإدخال الجيني عن طريق تبادل الكاسيت بوساطة إعادة التركيب.

عناصر نقل الحمض النووي piggyBac (PB)

تقنية نقل البيانات بيغي باك

تتحرك عناصر النقل الجيني من نوع piggyBac (PB) عبر آلية "القص واللصق"، حيث يقوم إنزيم ناقل (ناقل PB)، المشفر بواسطة عنصر النقل نفسه، باستئصال عنصر النقل وإعادة دمجه في مواقع أخرى داخل الجينوم. يتعرف ناقل PB تحديدًا على التكرارات الطرفية المقلوبة (ITRs) لعنصر النقل المحيط به؛ ويرتبط بهذه التسلسلات ويحفز استئصال عنصر النقل. ثم يندمج عنصر PB في مواقع TTAA [ 23 ] في جميع أنحاء الجينوم، بطريقة عشوائية نسبيًا. لإنشاء طفرات اصطياد الجينات (أو لتكييفها لإنتاج حيوانات معدلة وراثيًا)، يُضاف ناقل PB في وضعية "trans" على بلازميد واحد، ويُنقل بالتزامن مع بلازميد يحتوي على عنصر نقل مانح، وهو عنصر نقل مُعاد التركيب يتكون من اصطياد جينات محاط بمواقع ارتباط ناقل PB (ITRs). يحفز إنزيم الترانسبيوزاز استئصال الترانسبوزون من البلازميد، ثم دمجه في الجينوم. ويؤدي الدمج ضمن منطقة الترميز إلى التقاط العناصر اللازمة للتعبير الجيني. يتميز PB بعدة خصائص مثالية: (1) يندمج بشكل تفضيلي داخل الجينات (50 إلى 67% من عمليات الإدماج تصيب الجينات)، (2) لا يُظهر أي انتقال موضعي (تغطية جينومية واسعة)، (3) لا يتأثر بتثبيط الإنتاج الزائد، حيث تؤدي المستويات المرتفعة من الترانسبيوزاز إلى انخفاض عملية النقل، (4) يُستأصل بشكل كامل من موقع التبرع، دون ترك أي أثر، على عكس Sleeping Beauty. [ 24 ] [ 25 ]

ترانسبوزونات الجميلة النائمة (SB)

تقنية النقل الآني الجميلة النائمة

يُعدّ ترانسبوزون "الجميلة النائمة" (SB) مشتقًا من عائلة Tc1/mariner الفائقة من ترانسبوزونات الحمض النووي، المنتشرة في جينومات الفقاريات واللافقاريات على حد سواء. مع ذلك، فإن ترانسبوزونات الحمض النووي الداخلية من هذه العائلة غير نشطة تمامًا في جينومات الفقاريات. وقد تم "تنشيط" ترانسبوزون Tc1/mariner نشط، تم تصنيعه من خلال محاذاة ترانسبوزونات غير نشطة من عائلة عناصر السلمونيات الفرعية، ليُشكّل الترانسبوزون المسمى "الجميلة النائمة". [ 26 ] يتحرك SB، كغيره من ترانسبوزونات الحمض النووي، عبر آلية القص واللصق، حيث يقوم إنزيم الترانسبوزاز، المُشفّر بواسطة الترانسبوزون نفسه، باستئصال الترانسبوزون وإعادة دمجه في مواقع أخرى داخل الجينوم. يتعرف بروتين SB، المكون من 340 حمضًا أمينيًا، على التكرارات الطرفية المعكوسة (ITRs) التي تُحيط بالترانسبوزون؛ ويرتبط بهذه التسلسلات ويُحفّز استئصال الترانسبوزون. ثم يندمج عنصر SB في مواقع عشوائية داخل الجينوم، على الرغم من أن بعض الدراسات تشير إلى تفضيلات طفيفة جدًا لوحدات النسخ. [ 27 ] [ 28 ] كما يوجد شرط بسيط يتمثل في وجود ثنائي نيوكليوتيد TA في الموقع المستهدف، كما هو الحال في جميع عناصر النقل Tc1/mariner. [ 29 ]

يُعدّ عنصر النقل SB أداةً فعّالةً لإحداث الطفرات الإدخالية في العديد من أنواع الفقاريات. وقد أظهر مؤخرًا فائدةً خاصةً في إحداث الطفرات في الخلايا الجنسية لدى كلٍّ من الفئران والجرذان. [ 30 ] [ 31 ] [ 32 ] [ 33 ] [ 34 ] [ 35 ] [ 36 ] هناك العديد من المزايا التي تجعل SB عنصرًا مُطفرًا جذابًا للغاية لاكتشاف الجينات: 1) لا يميل كثيرًا إلى الإدخال ضمن مناطق جينومية مُحددة أو ضمن تسلسلات تعرّف مُحددة، 2) تُوفّر عمليات الإدخال الجديدة لعنصر النقل علامة تسلسلية "موسومة" لتحديد الطفرة المُحددة بسرعة باستخدام طرق استنساخ PCR البسيطة، 3) يسمح إحداث الطفرات الإدخالية لعنصر النقل SB في الجسم الحي بتوليد طفرات مُتعددة بسرعة وسهولة في حيوان واحد، وفي نسيج واحد، مثل الورم الحميد الغدي.

عناصر النقل الرجعي LINE1 (L1)

تقنية النسخ العكسي L1

تُعدّ العناصر المتحركة (الترانسبوزونات) والعناصر المتحركة العكسية (الريتروترانسبوزونات) أدوات قيّمة لاكتشاف الجينات دون تحيّز، فهي عبارة عن قطع متنقلة من الحمض النووي تُستخدم لتعطيل الجينات. تتحرك العناصر المتحركة العكسية، مثل عناصر LINE (العناصر النووية المتناثرة الطويلة)، عبر آلية "النسخ واللصق"، وهي وفيرة في العديد من الكائنات حقيقية النواة. وقد ظلّت العديد من عناصر L1 المتحركة العكسية نشطة في الفئران والبشر. تحتوي عناصر L1 على مُحفّز داخلي صغير ضمن منطقة غير مترجمة 5′ لتوجيه التعبير الجيني، وإطارين مفتوحين للقراءة (ORFs)، ومنطقة غير مترجمة 3′ تحتوي على تسلسلات لإضافة ذيل عديد الأدينين. يشفر الإطاران المفتوحان للقراءة بروتينات ضرورية للنسخ العكسي الذاتي؛ يشفر ORF1 بروتينًا رابطًا للحمض النووي الريبي (RNA )، بينما يشفر ORF2 بروتينًا يحتوي على نشاط إنزيم نوكلياز داخلي (EN) وإنزيم نسخ عكسي (RT)، حيث يقومان بقطع موقع في الحمض النووي، ثم ينتجان نسخة منه عبر إنزيم النسخ العكسي. تُظهر هذه البروتينات خصوصية فائقة في الارتباط بالنسخة التي تشفرها والتأثير عليها، مما يُتيح تحريك الحمض النووي الريبي L1 الأصلي بشكل شبه حصري. باستخدام نشاط النسخ العكسي لبروتين ORF2، يُنسخ الحمض النووي الريبوزي L1 المُستنسخ إلى الحمض النووي DNA عبر عملية تُسمى النسخ العكسي المُوجَّه بالهدف (TPRT)، [ 37 ] ويُدمج في الجينوم. يحدث الدمج بانحياز طفيف لأي منطقة جينومية مُحددة، ويتطلب تسلسلًا توافقيًا بسيطًا، 5′TTTT′A-3′ (إلى جانب اختلافات طفيفة في هذا التسلسل). غالبًا ما تكون تسلسلات L1 المُدمجة مُقتطعة عند الطرف 5′، بمتوسط ​​حجم إجمالي يبلغ 1 كيلوبايت، ويحتوي العديد منها على تسلسلات طرفية 3′ فقط.

تمنح طبيعة النسخ العكسي عنصر L1 بعض المزايا الفريدة؛ إذ يمتلك هذا العنصر إمدادًا غير محدود تقريبًا من الطفرات الإدخالية نظرًا لنسخه المستمر من مُحفِّز، وهو ما يُعدّ مفيدًا للتطبيقات التي تتطلب عددًا كبيرًا من الطفرات في خلية واحدة. كما تُظهر عناصر L1 تغطية جينومية واسعة النطاق، مع توزيع عشوائي إلى حد كبير لعمليات الإدخال. [ 38 ] [ 39 ] [ 40 ] وتُعدّ عمليات إدخال L1 في المواقع الجينومية غير قابلة للعكس، وبالتالي فإن أي حدث طفري ناتج عن إدخال L1 يتم "وسمه" بواسطة تسلسلات L1.

انظر أيضاً

مراجع

  1. ↑ أبوت أ: حيوانات المختبر: جرذ عصر النهضة. الطبيعة 2004، 428:464-466.
  2. ↑ Zhou Q، Renard JP، Le Friec G، Brochard V، Beaujean N، Cherifi Y، Fraichard A، Cozzi J: توليد الفئران المستنسخة الخصبة عن طريق تنظيم تنشيط البويضات. العلوم 2003، 302:1179.
  3. ↑ Justice MJ, Noveroske JK, Weber JS, Zheng B, Bradley A: طفرات ENU في الفئران. علم الوراثة الجزيئية البشرية 1999، 8:1955–1963.
  4. ↑ كيتادا ك، إيشيشيتا إس، توساكا ك، تاكاهاشي آر، أويدا إم، كنغ فولكس فاجن، هوري ك، تاكيدا جي: الطفرات الموسومة بالترانسبوزون في الفئران. طرق نات 2007، 4: 131-133.
  5. 1 2 مشروع تسلسل جينوم الفئران، تسلسل جينوم الفأر البني يُقدّم رؤى ثاقبة حول تطور الثدييات. مجلة نيتشر، 2004. 428(6982): ص 493-521.
  6. 1 2 Guerts, AM, et. al, Knockout Rats via Embryo Microinjection of Zinc-Finger Nucleases. Science. Vol 325: 433 (24 July 2009) Geurts, AM; Cost, GJ; Freyvert, Y.; Zeitler, B.; Miller, JC; Choi, VM; Jenkins, SS; Wood, A.; Cui, X.; Meng, X.; Vincent, A.; Lam, S.; Michalkiewicz, M.; Schilling, R.; Foeckler, J.; Kalloway, S.; Weiler, H.; Menoret, S.; Anegon, I.; Davis, GD; Zhang, L.; Rebar, EJ; Gregory, PD; Urnov, FD; Jacob, HJ; Buelow, R. (2009). " فئران معدلة وراثيًا عن طريق الحقن المجهري للأجنة بنوكليازات أصابع الزنك" . مجلة ساينس . 325 (5939): 433. Bibcode : 2009Sci...325..433G . doi : 10.1126/science.1172447 . PMC 2831805. PMID 19628861 .  
  7. ↑ Wiecek, Andrew. "عام الفأر" ، BioTechniques ، 2009-10-01.
  8. ↑ "شركة سيجما-ألدريتش تطور نماذج لمرض باركنسون" مؤرشف بتاريخ 8 أكتوبر 2009 في أرشيف الإنترنت (Wayback Machine) ، موقع LaboratoryTalk
  9. ↑ الاتحاد الدولي لتسلسل الجينوم البشري، التسلسل الأولي وتحليل الجينوم البشري. مجلة نيتشر، 2001. 409(6822): ص 860-921.
  10. ↑ اتحاد تسلسل جينوم الفأر، التسلسل الأولي والتحليل المقارن لجينوم الفأر. مجلة نيتشر، 2002. 420(6915): ص 520-62.
  11. ↑ أبوت، أ.، حيوانات المختبر: جرذ عصر النهضة. الطبيعة، 2004. 428(6982): ص. 464-6.
  12. ↑ ليندبلاد-توه، ك.، تسلسل الجينوم: ثلاثة شركاء. نيتشر، 2004. 428(6982): ص. 475-6.
  13. ^ زامبروفيتش، 1998؛ سكارنيس وآخرون، 2004؛ وآخرون، 2004؛ نورد وآخرون، 2006
  14. ↑ كوهين-تانوجي، م. وبابينيه، س.، ما وراء الفئران المعدلة وراثيًا: منظورات جديدة للتعديل المبرمج لجينوم الثدييات. التكاثر البشري الجزيئي، 1998. 4(10): ص. 929-38.
  15. ↑ تشو، كيو، جي بي رينارد، جي لو فريك، في بروشارد، إن بوجان، واي شريفي، إيه فرايشارد، وجيه كوزي، توليد فئران مستنسخة خصبة عن طريق تنظيم تنشيط البويضات. مجلة ساينس، 2003. 302(5648): ص 1179.
  16. ↑ هيتوتسوماتشي، إس.، دي. إيه. كاربنتر، و دبليو. إل. راسل، تكرار الجرعة يزيد من فعالية N-إيثيل-N-نيتروزويوريا في إحداث الطفرات في الخلايا المنوية للفئران. وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية، 1985. 82(19): ص. 6619-21.
  17. ↑ براون، إس دي وهارديستي، آر إي، استراتيجيات الطفرات لتحديد المواقع الجينية الجديدة المرتبطة بالأنماط الظاهرية للأمراض. ندوات في بيولوجيا الخلية والتطور، 2003. 14(1): ص 19-24.
  18. ↑ تشين، واي.، دي. يي، ك. داينز، أ. تشاتيرجي، ج. كافالكولي، إي. شنايدر، ج. أوم، آر. بي. وويتشيك، وت. ماغنوسون، فحص قائم على النمط الجيني للطفرات المُستحثة بواسطة ENU في الخلايا الجذعية الجنينية للفئران. علم الوراثة الطبيعية، 2000. 24(3): ص. 314-7.
  19. ↑ زان، واي.، جيه دي هاغ، كيه إس تشين، إل إيه شيبيل، دي ويغينغتون، واي آر وانغ، آر هو، سي سي لوبيز-غواجاردو، إتش إل بروس، كيه آي بورتر، آر إيه ليونارد، إيه إيه هيت، إس إل شومر، إيه إف إليغبييدي، وإم إن غولد، إنتاج فئران معدلة وراثيًا باستخدام الطفرات الناتجة عن مادة ENU واختبار فحص قائم على الخميرة. مجلة Nature Biotechnology، 2003. 21(6): ص 645-51.
  20. ↑ كانتوس، كريستيان؛ فرانسيسكو، بيريجيو؛ تريجاتميكو، كورنياوان ر.؛ سلاميت-لودين، إينيز؛ تشادها-موهانتي، برابهجيت ك. (26-06-2014). "تحديد مواقع "الملاذ الآمن" في جينوم أرز إنديكا من خلال تسخير خاصية نوكليازات أصابع الزنك لتحفيز تلف الحمض النووي وإصلاحه" . مجلة فرونتيرز إن بلانت ساينس . 5 : 302. doi : 10.3389/fpls.2014.00302 . ISSN 1664-462X . PMC 4071976. PMID 25018764 .   
  21. ↑ تشانغ، و؛ وانغ، د؛ ليو، س؛ تشنغ، ش؛ جي، هـ؛ شيا، هـ؛ ماو، ك (مارس 2014). "تحسين كفاءة تحرير الجينوم بوساطة نوكلياز أصابع الزنك عن طريق إطلاق نسخ متعددة من جزء مانح خطي في الموقع من ناقل" . العلاج الجيني . 21 (3): 282-288 . doi : 10.1038/gt.2013.83 . ISSN 0969-7128 . PMID 24430236 .  
  22. ↑ تيسون وآخرون، فئران معدلة وراثيًا تم إنتاجها عن طريق الحقن المجهري للأجنة بـ TALENs. مجلة Nature Biotechnology، المجلد 29: 695-696 (5 أغسطس 2011). تيسون، ل.؛ أوسال، س.؛ مينوريه، س.ف.؛ ليونغ، إ.؛ نايلز، ب.ج.؛ ريمي، س.ف.؛ سانتياغو، ي.؛ فينسنت، أ.إ.؛ مينغ، ش.؛ تشانغ، ل.؛ غريغوري، ب.د.؛ أنيغون، إ.؛ كوست، ج.ج. (2011). "فئران معدلة وراثيًا تم إنتاجها عن طريق الحقن المجهري للأجنة بـ TALENs" . مجلة Nature Biotechnology . 29 (8): 695-696 . doi : 10.1038/nbt.1940 . PMID 21822240 . 
  23. ↑ فريزر، إم جيه، وآخرون، استئصال دقيق لعناصر النقل الخاصة بـ TTAA في حرشفيات الأجنحة، وهما piggyBac (IFP2) و tagalong (TFP3)، من جينوم الفيروس الباكولوفيروسي في خطوط خلوية من نوعين من حرشفيات الأجنحة. علم الأحياء الجزيئي للحشرات، 1996. 5(2): ص 141-151.
  24. ↑ ميترا، ر.، ج. فين-ثورنتون، و ن. ل. كريج، يمكن لـ piggyBac تجاوز تخليق الحمض النووي أثناء عملية النقل بالقص واللصق. مجلة EMBO، 2008.
  25. ↑ دينغ، إس.، وآخرون، نقل فعال لعنصر النقل piggyBac (PB) في خلايا الثدييات والفئران. الخلية، 2005. 122(3): ص. 473-83.
  26. ↑ إيفيكس، ز.، وآخرون، إعادة بناء جزيئية لـ Sleeping Beauty، وهو ترانسبوزون شبيه بـ Tc1 من الأسماك، وانتقاله في الخلايا البشرية. Cell، 1997. 91(4): ص. 501-10.
  27. ↑ فيجدال، تي جيه، وآخرون، الخصائص الفيزيائية المشتركة للحمض النووي التي تؤثر على اختيار الموقع المستهدف لعنصر Sleeping Beauty وعناصر Tc1/mariner القابلة للنقل الأخرى. مجلة علم الأحياء الجزيئي، 2002. 323(3): ص. 441-52.
  28. ↑ يانت، إس آر، وآخرون، رسم خرائط عالية الدقة على مستوى الجينوم لتكامل العناصر المتحركة في الثدييات. بيولوجيا الخلية الجزيئية، 2005. 25(6): ص. 2085-94.
  29. ↑ بلاسترك، آر إتش، زد. إزفاك، وزد. إيفيكس، الكائنات الدخيلة المقيمة: عائلة Tc1/mariner الفائقة من العناصر القابلة للنقل. تريندز جينيت، 1999. 15(8): ص. 326-332.
  30. ↑ جورتس، أ.م.، وآخرون، الطفرات الجينية وإعادة ترتيب الجينوم في الفأر نتيجة لتعبئة الترانسبيوزون من الكروموسومات المتكررة. PLoS Genet، 2006. 2(9): ص. e156.
  31. ↑ هوري، ك.، وآخرون، توصيف عملية نقل جين Sleeping Beauty وتطبيقها على الفحص الجيني في الفئران. بيولوجيا الخلية الجزيئية، 2003. 23(24): ص. 9189-207.
  32. ↑ كينغ، في دبليو، وآخرون، طفرات تشبعية خاصة بمنطقة معينة في خط الخلايا الجرثومية في الفئران باستخدام نظام ترانسبوزون Sleeping Beauty. Nat Methods، 2005. 2(10): ص. 763-9.
  33. ↑ كيتادا، ك.، وآخرون، الطفرات الموسومة بالترانسبوزون في الفئران. طرق نات، 2007. 4(2): ص. 131-3.
  34. ↑ جورتس، أ.م.، وآخرون، التعبير الجيني المشروط في الفأر باستخدام ناقل جيني من نوع Sleeping Beauty. مجلة BMC للتكنولوجيا الحيوية، 2006. 6: ص. 30.
  35. ↑ دوبوي، إيه جيه، إس. فريتز، ودي إيه لارجاسبادا، الانتقال وتعطيل الجينات في الخلايا الجرثومية الذكرية للفأر. جينيسيس، 2001. 30(2): ص. 82-8.
  36. ↑ دوبوي، إيه جيه، وآخرون، التعديل الوراثي للخلايا الجرثومية في الثدييات عن طريق النقل. وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية، 2002. 99(7): ص. 4495-9.
  37. ↑ لوان، د.د.، كورمان، م.هـ.، جاكوبتشاك، ج.ل.، وإيكبوش، ت.هـ.، النسخ العكسي لـ R2Bm RNA يبدأ بقطع في الموقع المستهدف على الكروموسوم: آلية للنسخ العكسي غير المرتبط بـ LTR. مجلة Cell، 1993. 72(4): ص 595-605.
  38. ↑ Ostertag، EM، وآخرون، نموذج فأر لإعادة نقل L1 البشري. نات جينيه، 2002. 32(4): ص. 655-60.
  39. ↑ بابوشوك، دي في، وآخرون، دمج L1 في نموذج فأر معدل وراثيًا. أبحاث الجينوم، 2006. 16(2): ص. 240-50.
  40. ↑ كوست، جي جي وبوك، جي دي. استهداف اندماج العناصر المتنقلة الرجعية البشرية يتم توجيهه بواسطة خصوصية إنزيم L1 الداخلي للمناطق ذات البنية غير العادية للحمض النووي. الكيمياء الحيوية، 1998. 37(51): ص. 18081-93.