كروماتوغرافيا الطور المعكوس

📅 آخر تحديث: ٢٥ يوليو ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٢٥ يوليو ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 1 صور
الموسوعة الحرة

الاستشراب السائل ذو الطور المعكوس ( RP-LC ) هو نمط من أنماط الاستشراب السائل يُستخدم فيه طور ثابت غير قطبي وأطوار متحركة قطبية لفصل المركبات العضوية. [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] في نمط الطور المعكوس، تبقى مكونات العينة الأكثر كراهية للماء في النظام لفترة أطول. وقد أُجريت الغالبية العظمى من عمليات الفصل والتحليل باستخدام الاستشراب السائل عالي الأداء (HPLC) في السنوات الأخيرة باستخدام نمط الطور المعكوس. [ 4 ] طُوِّر هذا النمط في البداية لفصل الجزيئات الحيوية، وهو الآن تقنية عامة تتوفر لها العديد من الأطوار الثابتة للاستخدام في الاستشراب السائل ذو الطور المعكوس، مما يتيح مرونة كبيرة في تطوير طرق الفصل. [ 5 ] [ 6 ]

تؤثر بعض العوامل على كيفية الاحتفاظ بالمكونات وفصلها في تقنية الاستشراب السائل ذي الطور العكسي (RP-LC):

  • الطبيعة الكيميائية للطور الثابت . يمكن تغطية الطور الثابت ببعض الروابط بكثافات ربط مختلفة (عدد الروابط المرتبطة لكل مساحة سطح).
  • يتكون الطور المتحرك من مذيب واحد أو خليط من عدة مذيبات، ويمكن مزجها بنسب مختلفة. وتختلف خصائص الأطوار المتحركة، مثل القطبية . وعندما يتكون الطور المتحرك في معظمه من مذيب واحد، مع إضافة كميات ضئيلة من مذيبات أخرى، تُسمى هذه المذيبات الأخرى "مُعدِّلات الطور المتحرك".
  • يؤثر الرقم الهيدروجيني للمرحلة المتحركة على حالة تأين المواد المذابة وقطبيتها. ويمكن تغيير ذلك باستخدام إضافات مثل المحاليل المنظمة .

عادةً، تتكون المرحلة الثابتة من طبقة من مادة كارهة للماء مرتبطة بسطح جزيئات هلام السيليكا المسامية . تأتي هذه الجزيئات بأشكال متنوعة (كروية، غير منتظمة)، وبأقطار مختلفة (أقل من 2، 3، 5، 7، 10 ميكرومتر )، وبأقطار مسام متفاوتة (60، 100، 150، 300 أنغستروم ). غالبًا ما تُعطى أقطار الجزيئات بأرقام الشبكة . على سبيل المثال، 2500 شبكة تُقابل قطر جزيء يبلغ 5 ميكرومتر. تتكون المواد الكارهة للماء عمومًا من سلاسل ألكيلية ، مثل C3، C4، C8، C18، أو أكثر. كلما زاد طول السلسلة، زادت مدة احتجاز مكونات العينة. وهذا بدوره يزيد من دقة الفصل، ولكنه يُطيل أيضًا مدة عملية الفصل الكروماتوغرافي. تستخدم معظم الطرق الحالية لفصل المواد الطبية الحيوية أعمدة C18، والتي تسمى أحيانًا بأسماء تجارية، مثل ODS ( أوكتاديسيل سيلان ) أو RP-18 (الطور العكسي 18).

تعمل أعمدة الطور العكسي التقليدية المصنوعة من السيليكا بكفاءة عالية ضمن نطاق حموضة معتدل. عند درجات حموضة منخفضة جدًا أو مرتفعة جدًا، قد تتدهور طبقة السيليكا السطحية والطبقة الكارهة للماء المرتبطة بها. في ظروف حمضية أو قلوية شديدة، يمكن استخدام جزيئات بوليمرية كارهة للماء، أو جزيئات سيليكا مهجنة بمجموعات عضوية، وذلك لفصل البروتينات باستخدام تقنية الاستشراب السائل ذي الطور العكسي (RP-LC).

تُصنع الجسيمات البوليمرية الكارهة للماء من بوليمر عضوي بدلاً من السيليكا. ومن الأمثلة الشائعة على ذلك بوليسترين ثنائي فينيل بنزين (PS-DVB). يتميز هذا الجسيم بخاصية كره الماء، مما يسمح للمركبات العضوية بالامتزاز عليه مباشرةً.

تذوب السيليكا النقية في الوسط القلوي. أما جزيئات السيليكا العضوية الهجينة فهي جزيئات تحتوي بنيتها على وحدات سيليكا ومجموعات عضوية. ويكون تركيبها النموذجي على النحو التالي: Si–O–Si ممزوجًا بـ Si–R–Si، حيث R رابطة عضوية، مثل مجموعة الإيثيلين . وهذا ما يجعل الجزيء أكثر مقاومة للوسط القلوي.

تتكون الأطوار المتحركة من مزيج من الماء والمذيبات العضوية القطبية، وعادةً ما تكون الميثانول والأسيتونيتريل . تحتوي هذه المزيجات عادةً على إضافات متنوعة مثل المحاليل المنظمة ( الأسيتات ، والفوسفات ، والسترات )، والمواد الفعالة سطحياً ( الألكيل أمينات أو الألكيل سلفونات )، وإضافات خاصة ( مثل EDTA ). يهدف استخدام هذه الإضافات، بأنواعها المختلفة، إلى زيادة الكفاءة والانتقائية والتحكم في احتفاظ المذاب.

المراحل الثابتة

تم وصف تاريخ وتطور الأطوار الثابتة ذات الطور المعكوس بالتفصيل في مقال من تأليف ماجورز ودولان وكار وسنايدر. [ 7 ]

في سبعينيات القرن الماضي، كانت معظم عمليات الفصل الكروماتوغرافي السائل تُجرى باستخدام جزيئات صلبة كأطوار ثابتة، مصنوعة من هلام السيليكا أو الألومينا غير المعدلة . يُشار إلى هذا النوع من التقنية الآن باسم كروماتوغرافيا الطور العادي . في كروماتوغرافيا الطور العادي، يكون الطور الثابت محبًا للماء ، بينما يكون الطور المتحرك غير قطبي/كاره للماء، ويتكون من مذيبات عضوية مثل الهكسان والهبتان .

مع ذلك، فإن كروماتوغرافيا الطور العادي غير مناسبة للعديد من الجزيئات الحيوية، لذا طُوّرت كروماتوغرافيا الطور المعكوس. وبالتحديد، فإن العديد من الجزيئات الحيوية قطبية، لذا فهي لا تذوب جيدًا في طور متحرك غير قطبي.

في كروماتوغرافيا الطور المعكوس، يكون الطور المتحرك قطبيًا، مما يُذيب الجزيئات المحبة للماء بكفاءة. ويُعد استخدام طور ثابت غير قطبي وأطوار متحركة قطبية عكسًا لكروماتوغرافيا الطور العادي، حيث تنعكس قطبية الطورين المتحرك والثابت - ومن هنا جاء مصطلح كروماتوغرافيا الطور المعكوس. [ 8 ] [ 9 ] ونتيجةً لذلك، تميل الجزيئات الكارهة للماء في الطور المتحرك القطبي إلى الامتزاز على الطور الثابت الكاره للماء، بينما تمر الجزيئات المحبة للماء في العينة عبر العمود وتُفصل أولًا. [ 8 ] [ 10 ] ويمكن فصل الجزيئات الكارهة للماء من العمود عن طريق تقليل قطبية الطور المتحرك باستخدام مذيب عضوي (غير قطبي)، مما يقلل من التفاعلات الكارهة للماء. وكلما زادت كراهية الجزيء للماء، زادت قوة ارتباطه بالطور الثابت، وزاد تركيز المذيب العضوي اللازم لفصله.

يؤثر حجم المسام أيضاً. فالجسيم ذو المسام الصغيرة يمنع الجزيئات الكبيرة من الوصول إلى معظم مساحة سطحه. وهذا يعني أن الجزيئات الأكبر حجماً ستبقى لفترة أقصر من الجزيئات الأصغر، حتى لو كانت متشابهة كيميائياً في جوانب أخرى.

تنطبق العديد من المعايير الرياضية لنظرية الكروماتوغرافيا والاعتبارات التجريبية المستخدمة في طرق الكروماتوغرافيا الأخرى على كروماتوغرافيا الطور العكسي السائل (على سبيل المثال، عامل الانتقائية، والفصل الكروماتوغرافي، وعدد الصفائح، وما إلى ذلك). [ 11 ]

أطوار ثابتة قائمة على السيليكا

رسم توضيحي مثالي لهلام السيليكا قبل وبعد المعالجة بأوكتاديسيل ترايكلوروسيلان ( C18H37SiCl3 ) . يتم تحويل معظم مجموعات السيلانول ( باللون الأحمر ) إلى مجموعات ألكيل سيلوكسي كارهة للماء . [ 12 ]

تُستخدم جزيئات هلام السيليكا بشكل شائع كطور ثابت في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) لعدة أسباب: [ 13 ] [ 14 ] [ 15 ] [ 16 ]

  1. تتمتع جزيئات هلام السيليكا بمساحة سطحية عالية لحدوث التفاعلات، سواء مع المواد المذابة أو عن طريق الارتباط بالروابط.
  2. لا يتفاعل جل السيليكا مع العديد من أنواع المذيبات والمواد المراد تحليلها.
  3. يمكن تعديل هلام السيليكا بمجموعات وظيفية متنوعة.
  4. جل السيليكا رخيص الثمن.
  5. يسهل تشكيل جزيئات هلام السيليكا بأقطار وأشكال وأحجام مسام محددة، وما إلى ذلك.

يمكن أن تتخذ جزيئات السيليكا أشكالاً مختلفة. فقد تكون صلبة تماماً ("متجانسة" أو "منصهرة")، أو مليئة بالثقوب ("مسامية")، أو ذات لب صلب وغلاف مسامي ("مسامية ظاهرياً"). كما يمكن أن يكون للجزيئات أقطار مختلفة، وكذلك المسام. [ 17 ]

صنّفت دستور الأدوية الأمريكي ( USP) أعمدة كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) وفقًا لأنواعها L#. [ 18 ] يُعدّ عمود السيليكا المرتبط بسلسلة كربونية ثمانية عشرية (C18) (تصنيف USP L1) الأكثر شيوعًا في هذا التصنيف. [ 19 ] يليه عمود السيليكا المرتبط بسلسلة كربونية ثمانية عشرية (C8) (L7)، ثم السيليكا النقية (L3)، ثم السيليكا المرتبطة بمجموعة سيانو (CN) (L10)، وأخيرًا السيليكا المرتبطة بمجموعة فينيل (L11). تجدر الإشارة إلى أن أعمدة C18 وC8 والفينيل تُستخدم كأطوار ثابتة مخصصة للطور العكسي، بينما يمكن استخدام أعمدة CN في وضع الطور العكسي اعتمادًا على المادة المراد تحليلها وظروف الطور المتحرك. لا تمتلك جميع أعمدة C18 خصائص احتجاز متطابقة. يمكن إجراء تعديل سطح السيليكا وظيفيًا في تفاعل أحادي أو متعدد باستخدام مركبات عضوية سيليكونية قصيرة السلسلة مختلفة، تُستخدم في خطوة ثانية لتغطية مجموعات السيلانول المتبقية ( التغطية الطرفية ). بينما تظل آلية الاحتفاظ العامة كما هي، فإن الاختلافات الطفيفة في التركيب الكيميائي السطحي للأطوار الثابتة المختلفة ستؤدي إلى تغييرات في الانتقائية.

تختلف قطبية الأعمدة الحديثة تبعًا للرابطة المرتبطة بالطور الثابت. PFP هو خماسي فلورو فينيل. CN هو سيانو. NH2 هو أمينو. ODS هو أوكتاديسيل أو C18. ODCN هو عمود ذو نمط مختلط يتكون من C18 ونتريل. [ 20 ]

المراحل المتنقلة

يتكون الطور المتحرك في كروماتوغرافيا الطور العكسي السائل (RP-LC) من مزيج من الماء أو المحاليل المنظمة المائية، تُضاف إليه مذيبات أخرى لفصل المواد المراد تحليلها من عمود الطور العكسي بشكل انتقائي. [ 8 ] [ 21 ] يجب أن تكون المذيبات المضافة قابلة للامتزاج بالماء. تُسمى هذه المذيبات أيضًا "مُعدِّلات"، لأنها تُعدِّل قطبية الطور المتحرك. يُعد الماء أكثر المذيبات قطبية في الطور المتحرك ذي الطور العكسي. ولزيادة قوة فصل الطور المتحرك، تُضاف عادةً مُعدِّلات لخفض قطبيته. تشمل المُعدِّلات الشائعة الأسيتونيتريل (ACN)، والميثانول (MeOH)، والإيزوبروبانول (IPA)، والإيثانول (EtOH)، والتتراهيدروفوران (THF).

اللزوجة

إذا كانت المادة المتصاعدة ذات لزوجة عالية، فإنها ستنتج ضغطًا عكسيًا عاليًا . وبالتالي، يُفضل استخدام المواد المتصاعدة ذات اللزوجة المنخفضة.

يُعدّ الإيزوبروبانول (IPA) مُذيبًا قويًا، ولكنه أيضًا شديد اللزوجة، مما يؤدي إلى ارتفاع الضغط العكسي. أما الأسيتونيتريل (ACN) والميثانول (MeOH) فهما أقل لزوجة من الإيزوبروبانول، مع العلم أن خليطًا بنسبة 50:50 من الميثانول والماء يكون شديد اللزوجة أيضًا. وبشكل عام، مع ازدياد نسبة المذيب العضوي إلى الماء من 0:1 إلى 1:0، تزداد اللزوجة، ثم تنخفض مجددًا.

بشكل عام، يزداد الضغط الخلفي عند زيادة معدل التدفق، أو انخفاض درجة حرارة الطور المتحرك، أو زيادة حجم جسيمات الطور الثابت.

الامتصاص

عند الكشف عن المكونات بصريًا، يجب أن يتمتع الطور المتحرك بنفاذية عالية عند الطول الموجي الذي يستخدمه الكاشف. وتكون معظم المذيبات أكثر شفافية عند الأطوال الموجية الأطول. ولذلك، يشير الباحثون عادةً إلى "أطوال موجية فاصلة" للمذيبات. الطول الموجي الفاصل للمذيب هو الطول الموجي الذي يتساوى عنده امتصاص المذيب مع وحدة امتصاص واحدة (1 AU) . ويجب استخدام المُعدِّل فقط مع الضوء الذي يزيد طوله الموجي عن الطول الموجي الفاصل.

القيم الشائعة الاستخدام: أسيتونيتريل 190 نانومتر، أسيتون 330 نانومتر، ثنائي إيثيل أمين 275 نانومتر، إيثانول 210 نانومتر، إيزوبروبيل أسيتات 205 نانومتر، إيزوبروبيل إيثر 220 نانومتر، ميثانول 205 نانومتر، 1-بروبانول 210 نانومتر، رباعي هيدروفيوران 230 نانومتر. [ 22 ] تمتص معظم الببتيدات فقط عند أطوال موجية منخفضة في طيف الأشعة فوق البنفسجية (عادةً أقل من 225 نانومتر)، وبالتالي، بالنسبة لتقنية الاستشراب السائل ذي الطور العكسي مع الببتيدات، فإن المُعدِّل الأكثر استخدامًا هو الأسيتونيتريل.

تنظيم درجة الحموضة

يمكن أن يؤثر الرقم الهيدروجيني للمرحلة المتحركة على احتفاظ المواد المراد تحليلها وانتقائيتها. [ 23 ] [ 24 ] بالنسبة للعينات التي تحتوي على مواد مذابة ذات مجموعات وظيفية متأينة، مثل الأمينات والكربوكسيلات والفوسفات والفوسفونات والكبريتات والسلفونات ، يمكن التحكم في تأين هذه المجموعات عن طريق التحكم في الرقم الهيدروجيني للمرحلة المتحركة. ويمكن التحكم في الرقم الهيدروجيني للمرحلة المتحركة باستخدام محاليل منظمة . [ 25 ]

بشكل عام، تتأين الجزيئات ذات المجموعات الوظيفية الحمضية بشكل متزايد في البيئات القلوية، وبالتالي يقل زمن بقائها. وعلى العكس، يزداد زمن بقائها في البيئات الحمضية. وينطبق العكس على الجزيئات ذات المجموعات الوظيفية القلوية. [ 26 ]

على سبيل المثال، تزداد الشحنة السالبة لمجموعات الكربوكسيل في المواد المذابة مع ارتفاع الرقم الهيدروجيني للطور المتحرك فوق قيمة pKa الخاصة بها، وبالتالي يصبح الجزيء بأكمله أكثر قطبية وأقل ثباتًا على الطور الثابت غير القطبي. في هذه الحالة، يؤدي رفع الرقم الهيدروجيني للطور المتحرك فوق 4-5 (وهو النطاق النموذجي لقيمة pKa لمجموعات الكربوكسيل) إلى زيادة تأينها، وبالتالي تقليل ثباتها. وبالمثل، عادةً ما يكون للجزيئات التي تحتوي على مجموعات أمينية قيمة pKa تقارب 8. ومع ذلك، نظرًا لأن هلام السيليكا غير مستقر في البيئات القلوية، فإن الرقم الهيدروجيني للطور المتحرك عادةً لا يتجاوز 8. لذلك، يكون التحكم في ثبات الأمينات محدودًا عندما يكون الطور الثابت قائمًا على هلام السيليكا. [ 27 ]

يُعد اختيار نوع المحلول المنظم عاملاً هاماً في تطوير طرق الفصل الكروماتوغرافي السائل عالي الأداء ذي الطور العكسي (RP-HPLC)، إذ يؤثر على الاحتفاظ والانتقائية وفصل المواد المراد تحليلها. [ 28 ] تُستخدم العديد من المحاليل المنظمة في RP-HPLC، بما في ذلك الفوسفات والأسيتات والفورمات والأمونيوم.

  • يعمل المحلول المنظم بشكل أكثر فعالية حول قيمة pKa الخاصة به، لذلك يجب أن تكون قيمة pKa للمحلول المنظم قريبة من الرقم الهيدروجيني المطلوب للمرحلة المتحركة.
  • يجب أن يكون المحلول المنظم متوافقًا مع المذيب المستخدم في الطور المتحرك، وخاصة مع المذيبات العضوية الشائعة المذكورة أعلاه، مثل الأسيتونيتريل والميثانول والإيزوبروبانول.
  • إذا تم استخدام مطيافية امتصاص الأشعة فوق البنفسجية للكشف، فيجب أن يكون للمحلول المنظم امتصاص منخفض عند الطول الموجي المختار.

يمكن أيضًا فصل المواد التحليلية المشحونة بواسطة كروماتوغرافيا الطور العكسي لتفاعل الأيونات . [ 30 ]

انظر أيضاً

مراجع

  1. ↑ الاتحاد الدولي للكيمياء البحتة والتطبيقية (IUPAC )، موسوعة المصطلحات الكيميائية ، الطبعة الخامسة (الكتاب الذهبي) (2025). النسخة الإلكترونية: (2006 – ) " كروماتوغرافيا الطور المعكوس ". doi : 10.1351/goldbook.R05376
  2. ↑ زوفيلا، بيتر؛ سكوتشيلاس، ماغدالينا؛ جاي ليو، ج.؛ باشيك، توماش؛ كاليسزان، رومان؛ وونغ، مينغ واه؛ بوسزيفسكي، بوغوسواف؛ هيبرغر، ك. (2019). "أنظمة توصيف واختيار الأعمدة في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء ذي الطور المعكوس". مراجعات كيميائية . 119 (6): 3674-3729 . doi : 10.1021/acs.chemrev.8b00246 . PMID 30604951. S2CID 58631771 .  
  3. ↑ دورسي، جون ج.؛ ديل، كين أ. (1989). "الآلية الجزيئية للاحتفاظ في كروماتوغرافيا السائل ذي الطور المعكوس". مراجعات كيميائية . 89 (2): 331-346 . doi : 10.1021/cr00092a005 .
  4. ↑ غانيش، ف.؛ بورنا باسوري، ب.؛ ساهيني، ك.؛ ناليني، س.ن. (2023). "سلوك الاحتفاظ بالمواد التحليلية في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء ذي الطور المعكوس - مراجعة" . كروماتوغرافيا الطب الحيوي . 37 (7) e5482. doi : 10.1002/bmc.5482 . ISSN 0269-3879 . PMID 35962484. S2CID 251540223 .   
  5. ↑ زوفيلا، بيتر؛ سكوتشيلاس، ماغدالينا؛ جاي ليو، ج.؛ باتشيك، توماش؛ كاليسزان، رومان؛ وونغ، مينغ واه؛ بوسزيفسكي، بوغوسواف (2019). "أنظمة توصيف واختيار الأعمدة في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء ذي الطور المعكوس" . مجلة Chemical Reviews . 119 (6): 3674–3729 . doi : 10.1021/acs.chemrev.8b00246 . ISSN 0009-2665 . PMID 30604951. S2CID 58631771 .   
  6. ↑ روسلي، هانداجايا؛ بوتري، رينديا م.؛ ألنى، أنيتا (2022). "التطورات الحديثة في الأطوار الثابتة للكروماتوغرافيا السائلة لفصل المركبات: من البروتينات إلى المركبات العضوية الصغيرة" . مجلة Molecules . 27 (3): 907. doi : 10.3390/molecules27030907 . ISSN 1420-3049 . PMC 8840574. PMID 35164170 .   
  7. ↑ ماجورز، رونالد؛ دولان، جون؛ كار، بيتر؛ سنايدر، لويد (2010). "آفاق جديدة في كروماتوغرافيا الطور المعكوس" . LCGC أمريكا الشمالية . LCGC أمريكا الشمالية - 06-01-2010. 28 (6): 418-430 .
  8. 1 2 3 أكول ميهتا (27 ديسمبر 2012). "مبدأ كروماتوغرافيا الطور المعكوس HPLC/UPLC (مع رسوم متحركة)" . فارما إكس تشينج . تم الاطلاع عليه في 10 يناير 2013 .
  9. ↑ إي مولنار وسي هورفاث (سبتمبر 1976). "الكروماتوغرافيا العكسية للمواد البيولوجية القطبية: فصل مركبات الكاتيكول بواسطة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء" . الكيمياء السريرية . 22 (9): 1497-1502 . doi : 10.1093/clinchem/22.9.1497 . PMID 8221. تاريخ الاسترجاع: 10 يناير 2013 . 
  10. ↑ (الكيمياء الحيوية السريرية، TWHrubey، 54)
  11. ↑ إيفانز، ديفيد آر إتش؛ روميرو، جوناثان كيه؛ ويستوبي، ماثيو (2009)، "الفصل 9 تركيز البروتينات وإزالة المواد المذابة"، دليل تنقية البروتين، الطبعة الثانية ، طرق في علم الإنزيمات، المجلد 463، إلسيفير، الصفحات 97-120 ، doi : 10.1016/s0076-6879(09)63009-3 ، ISBN   978-0-12-374536-1PMID 19892169 ، تم الاطلاع عليه بتاريخ 13 أكتوبر 2022 
  12. ↑ باب، بيتر ج. (2017). "عوامل السيليلة". موسوعة كيرك-أوتمير للتكنولوجيا الكيميائية . ص 1-15 . doi : 10.1002/0471238961.1909122516011605.a01.pub3 . ISBN  978-0-471-23896-6.
  13. ↑ "مزايا هلام السيليكا لتطبيقات التعبئة في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء - شركة AGC للمواد الكيميائية" . 10 نوفمبر 2020. تاريخ الاسترجاع: 17 أكتوبر 2023 .
  14. ↑ تشيو، هونغدنغ؛ ليانغ، شياوجينغ؛ صن، مين؛ جيانغ، شنغشيانغ (2011). "تطوير أطوار ثابتة قائمة على السيليكا لفصل الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء". الكيمياء التحليلية والكيمياء الحيوية التحليلية . 399 (10): 3307-3322 . doi : 10.1007/s00216-010-4611-x . ISSN 1618-2650 . PMID 21221544. S2CID 40721088 .   
  15. ↑ كلايسينز، هـ. أ.؛ فان ستراتن، م. أ. (2004). "مراجعة حول الاستقرار الكيميائي والحراري للأطوار الثابتة في كروماتوغرافيا السائل ذي الطور المعكوس" . مجلة الكروماتوغرافيا أ . الطور الثابت والاحتفاظ الكروماتوغرافي: تكريمًا لـ ج. ج. كيركلاند. 1060 (1): 23-41 . doi : 10.1016/j.chroma.2004.08.098 . ISSN 0021-9673 . 
  16. ↑ زوفيلا، بيتر؛ سكوتشيلاس، ماغدالينا؛ جاي ليو، ج.؛ باتشيك، توماش؛ كاليسزان، رومان؛ وونغ، مينغ واه؛ بوسزيفسكي، بوغوسواف (2019). "أنظمة توصيف واختيار الأعمدة في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء ذي الطور المعكوس" . مجلة Chemical Reviews . 119 (6): 3674–3729 . doi : 10.1021/acs.chemrev.8b00246 . ISSN 0009-2665 . PMID 30604951. S2CID 58631771 .   
  17. ↑ فيكيت، سزابولكس؛ أوله، إرزبيت؛ فيكيت، جين (2012). "الكروماتوغرافيا السائلة السريعة: هيمنة الجسيمات ذات النواة/القشرة والجسيمات الدقيقة جدًا" . مجلة الكروماتوغرافيا أ . 1228 : 57-71 . doi : 10.1016/j.chroma.2011.09.050 . PMID 21982449 . 
  18. ↑ "قائمة أعمدة USP L - أعمدة HPLC والوسائط السائبة" . SMT . تم الاسترجاع في 17-10-2023 .
  19. ↑ كواشف الكروماتوغرافيا في دستور الأدوية الأمريكي 2007-2008: المستخدمة في دستور الأدوية الأمريكي - الصيغة الوطنية ومنتدى دستور الأدوية . دستور الأدوية الأمريكي. 2007.
  20. ↑ زوفيلا، بيتر؛ سكوتشيلاس، ماغدالينا؛ جاي ليو، ج.؛ باتشيك، توماش؛ كاليسزان، رومان؛ وونغ، مينغ واه؛ بوسزيفسكي، بوغوسواف (27 مارس 2019). "توصيف الأعمدة وأنظمة الاختيار في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء ذي الطور المعكوس" . مجلة Chemical Reviews . 119 (6): 3674–3729 . doi : 10.1021/acs.chemrev.8b00246 . ISSN 0009-2665 . PMID 30604951. S2CID 58631771 .   
  21. ↑ بويز، باري؛ دونغ، مايكل (2018). "الاتجاهات الحديثة وأفضل الممارسات في اختيار الطور المتحرك في كروماتوغرافيا الطور المعكوس" . LCGC أمريكا الشمالية . LCGC أمريكا الشمالية - 10-01-2018. 36 (10): 752-768 .
  22. ↑ https://help.waters.com/help/en/product-support/alliance-is-system-support/715008450/6BCFA49.html
  23. ↑ هيرمان، إيمي ن.؛ هنري، ريتشارد أ. (1999). "أهمية التحكم في درجة حموضة الطور المتحرك في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء ذي الطور المعكوس" . نشرة كيستون الفنية .
  24. ↑ شونماكرز، بيتر جيه؛ فان مول، سيلفي؛ هايز، كارمل إم جي؛ أونك، لويس جي إم (1991). "تأثيرات الرقم الهيدروجيني في كروماتوغرافيا السائل ذي الطور المعكوس". مجلة Analytica Chimica Acta . 250 : 1-19 . Bibcode : 1991AcAC..250....1S . doi : 10.1016/0003-2670(91)85058-Z . ISSN 0003-2670 . 
  25. ↑ دولان، جون (2017-01-01). "العودة إلى الأساسيات: دور الرقم الهيدروجيني في الاحتفاظ والانتقائية" . LCGC أمريكا الشمالية . LCGC أمريكا الشمالية-01-01-2017. 35 (1): 22– 28.
  26. ↑ "كيف يؤثر الرقم الهيدروجيني الحمضي على عمليات الفصل باستخدام كروماتوغرافيا الطور المعكوس؟" . www.biotage.com . تاريخ الاسترجاع : 18-10-2023
  27. ↑ كيركلاند، جيه جيه؛ فان ستراتن، إم إيه؛ كلايسينز، إتش إيه (1995). "تأثيرات الطور المتحرك ذي الرقم الهيدروجيني العالي على أعمدة كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء ذات الطور العكسي القائمة على السيليكا". مجلة الكروماتوغرافيا أ . المؤتمر الدولي الثامن عشر حول كروماتوغرافيا السائل العمودية، الجزء الأول. 691 (1): 3-19 . doi : 10.1016/0021-9673(94)00631-I . ISSN 0021-9673 . S2CID 53646741 .  
  28. ↑ بويز، باري؛ دونغ، مايكل (2018). "الاتجاهات الحديثة وأفضل الممارسات في اختيار الطور المتحرك في كروماتوغرافيا الطور المعكوس" . LCGC أمريكا الشمالية . LCGC أمريكا الشمالية - 10-01-2018. 36 (10): 752-768 .
  29. ↑ دولان، جون. "دليل لاختيار المحلول المنظم لتقنية HPLC و LC-MS" (PDF) .
  30. ↑ جيلار، مارتن؛ فونتين، كينيث جيه؛ بودمان، ييفا؛ نوي، أوي دي؛ ياردلي، كورت آر؛ رينفيل، بول دي؛ راسل الثاني، ريب جيه؛ غيبلر، جون سي. (2002). "تحليل النيوكليوتيدات قليلة العدد باستخدام كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء ذي الطور العكسي للأزواج الأيونية: التنبؤ بالاحتفاظ" . مجلة الكروماتوغرافيا أ . 958 (1): 167-182 . doi : 10.1016/S0021-9673(02)00306-0 . ISSN 0021-9673 . PMID 12134814 .  
  • جداول تلخص أنواعًا مختلفة من الأطوار العكسية، ومعلومات عن عملية التوظيف الوظيفي