نوكلياز مُؤثر شبيه بمنشط النسخ

📅 آخر تحديث: ٣ أغسطس ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٣ أغسطس ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 2 صور
الموسوعة الحرة
رسم تخطيطي لملء الفراغ لبروتين TALE-FokI الثنائي المدمج (أزرق: TALE؛ أخضر: FokI) المرتبط بالحمض النووي ( PDB : 1FOK ، 3UGM ) ، من تصميم ديفيد جودسيل

إنزيمات نوكلياز المؤثرات الشبيهة بمنشطات النسخ ( TALEN ) هي إنزيمات تقييد يمكن هندستها لقطع تسلسلات محددة من الحمض النووي. تُصنع هذه الإنزيمات عن طريق دمج نطاق ربط الحمض النووي الخاص بإنزيمات TALEN مع نطاق قطع الحمض النووي ( إنزيم نوكلياز يقطع خيوط الحمض النووي). يمكن هندسة إنزيمات TALEN للارتباط بأي تسلسل حمض نووي مرغوب فيه تقريبًا، وبالتالي، عند دمجها مع إنزيم نوكلياز، يمكن قطع الحمض النووي في مواقع محددة. [ 1 ] يمكن إدخال إنزيمات التقييد هذه إلى الخلايا، لاستخدامها في تحرير الجينات أو لتحرير الجينوم في الموقع ، وهي تقنية تُعرف باسم تحرير الجينوم باستخدام إنزيمات نوكلياز مُهندسة . إلى جانب إنزيمات نوكلياز أصابع الزنك وتقنية CRISPR/Cas9 ، تُعد إنزيمات TALEN أداة بارزة في مجال تحرير الجينوم .

نطاق ربط الحمض النووي TALE

تُعدّ مُؤثِّرات TAL بروتينات تُفرزها بكتيريا Xanthomonas عبر نظام الإفراز من النوع الثالث عند إصابتها للنباتات . [ 2 ] يحتوي نطاق ارتباط الحمض النووي على تسلسل متكرر ومحفوظ للغاية من 33-34 حمضًا أمينيًا، مع اختلاف في الحمضين الأمينيين الثاني عشر والثالث عشر. يُشار إلى هذين الموضعين باسم ثنائي البقايا المتغير المتكرر (RVD)، وهما شديدا التباين ويُظهران ارتباطًا قويًا بالتعرف على النيوكليوتيدات المُحددة . [ 3 ] [ 4 ] سمحت هذه العلاقة المباشرة بين تسلسل الأحماض الأمينية والتعرف على الحمض النووي بهندسة نطاقات ارتباط مُحددة بالحمض النووي عن طريق اختيار مجموعة من القطع المتكررة التي تحتوي على ثنائي البقايا المتغير المتكرر المناسب. [ 1 ] والجدير بالذكر أن التغييرات الطفيفة في ثنائي البقايا المتغير المتكرر وإدراج تسلسلات ثنائي البقايا المتغير المتكرر "غير التقليدية" يُمكن أن تُحسِّن من خصوصية الاستهداف. [ 5 ]

نطاق انقسام الحمض النووي

يمكن استخدام نطاق قطع الحمض النووي غير النوعي الموجود في نهاية إنزيم FokI الداخلي لإنشاء نوكليازات هجينة نشطة في اختبار الخميرة. [ 6 ] [ 7 ] هذه الكواشف نشطة أيضًا في الخلايا النباتية [ 8 ] [ 9 ] والخلايا الحيوانية. [ 9 ] [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] استخدمت الدراسات الأولية لتقنية TALEN نطاق قطع FokI من النوع البري، ولكن بعض الدراسات اللاحقة [ 11 ] [ 13 ] [ 14 ] استخدمت أيضًا متغيرات نطاق قطع FokI مع طفرات مصممة لتحسين خصوصية القطع [ 15 ] [ 16 ] ونشاط القطع. [ 17 ] يعمل نطاق FokI كجزيء ثنائي، مما يتطلب بنيتين بنطاقات ربط فريدة للحمض النووي لمواقع في الجينوم المستهدف مع التوجيه والتباعد المناسبين. يبدو أن كلاً من عدد بقايا الأحماض الأمينية بين نطاق ارتباط الحمض النووي TALE ونطاق انقسام FokI، وعدد القواعد بين موقعي ارتباط TALEN الفرديين، يُعدّان من المعايير المهمة لتحقيق مستويات عالية من النشاط. [ 10 ] [ 18 ]

الهندسة TALEN

تُتيح العلاقة البسيطة بين تسلسل الأحماض الأمينية وتعرّف نطاق ارتباط TALE على الحمض النووي هندسة البروتينات بكفاءة. في هذه الحالة، يُشكّل التخليق الجيني الاصطناعي إشكاليةً بسبب عدم التزاوج الصحيح للتسلسل المتكرر الموجود في نطاق ارتباط TALE. [ 19 ] يتمثل أحد الحلول في استخدام برنامج متاح للعموم (DNAWorks [ 20 ] ) لحساب قليل النوكليوتيدات المناسب للتجميع في عملية تجميع قليلة النوكليوتيدات على مرحلتين باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، متبوعةً بتضخيم الجين الكامل. كما تم الإبلاغ عن عدد من مخططات التجميع المعيارية لإنتاج تركيبات TALE المُهندسة. [ 9 ] [ 19 ] [ 21 ] [ 22 ] [ 23 ] [ 24 ] تُقدّم كلتا الطريقتين منهجًا مُنظّمًا لهندسة نطاقات ارتباط الحمض النووي، وهو مُشابه من حيث المفهوم لطريقة التجميع المعيارية لإنتاج نطاقات تعرّف الحمض النووي لأصابع الزنك .

آلية تعديل جينوم جينك المفضل (YFG) باستخدام تقنية TALEN. يتم تحديد التسلسل المستهدف، ثم يُصمم تسلسل TALEN مطابق ويُدخل في بلازميد. يُدخل البلازميد إلى الخلية المستهدفة حيث يُترجم لإنتاج إنزيم TALEN الفعال، الذي يدخل النواة ويرتبط بالتسلسل المستهدف ويقطعه. اعتمادًا على التطبيق، يمكن استخدام هذه التقنية لإحداث خطأ (لتعطيل جين مستهدف) أو لإدخال تسلسل DNA جديد في الجين المستهدف.

نقل الجينات

بعد تجميع تركيبات TALEN، تُدمج في البلازميدات ؛ ثم تُنقل هذه البلازميدات إلى الخلايا المستهدفة، فتُعبَّر منتجات الجينات وتدخل النواة للوصول إلى الجينوم. وبدلاً من ذلك، يمكن إيصال تركيبات TALEN إلى الخلايا على شكل mRNA، مما يمنع اندماج البروتين المُعبِّر عن TALEN في الجينوم. كما أن استخدام ناقل mRNA يُحسِّن بشكل كبير من مستوى إصلاح الحمض النووي الموجه بالتماثل (HDR) ونجاح عملية الإدخال الجيني أثناء تحرير الجينات.

تحرير الجينوم

الآليات

يمكن استخدام تقنية TALEN لتعديل الجينومات عن طريق إحداث كسور في الحمض النووي المزدوج (DSB)، والتي تستجيب لها الخلايا بآليات الإصلاح.

تُجري عملية الربط غير المتجانس للأطراف (NHEJ) ربطًا مباشرًا للحمض النووي من جانبي كسر مزدوج السلسلة، حيث يكون التداخل التسلسلي ضئيلًا جدًا أو معدومًا. تُحدث آلية الإصلاح هذه أخطاءً في الجينوم عبر عمليات الإدخال أو الحذف، أو إعادة ترتيب الكروموسومات؛ وقد تُؤدي أي من هذه الأخطاء إلى جعل منتجات الجينات المشفرة في ذلك الموقع غير وظيفية. [ 10 ] نظرًا لأن هذا النشاط قد يختلف باختلاف النوع، ونوع الخلية، والجين المستهدف، والنيوكلياز المستخدم، فينبغي مراقبته عند تصميم أنظمة جديدة. يمكن إجراء اختبار بسيط لقطع الحمض النووي المزدوج غير المتجانس، والذي يكشف أي اختلاف بين أليلين مُضخَّمين بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). يمكن تصوير نواتج القطع على هلامات الأغاروز البسيطة أو أنظمة الهلام المسطح.

بدلاً من ذلك، يمكن إدخال الحمض النووي إلى الجينوم من خلال NHEJ في وجود شظايا الحمض النووي المزدوجة الخارجية. [ 10 ]

يمكن أن يؤدي الإصلاح الموجه بالتماثل أيضًا إلى إدخال الحمض النووي الغريب في موقع كسر الحمض النووي المزدوج، حيث تُستخدم التسلسلات المزدوجة المنقولة كقوالب لإنزيمات الإصلاح. [ 10 ]

التطبيقات

استُخدمت تقنية TALEN لتعديل الجينومات النباتية بكفاءة عالية، [ 25 ] مما أدى إلى إنتاج محاصيل غذائية ذات أهمية اقتصادية وخصائص غذائية ممتازة. [ 26 ] كما استُخدمت لتطوير أدوات لإنتاج الوقود الحيوي . [ 27 ] بالإضافة إلى ذلك، استُخدمت هذه التقنية لهندسة خلايا جذعية جنينية بشرية مُعدلة وراثيًا، وخلايا جذعية مستحثة متعددة القدرات (IPSCs)، وخطوط خلايا دم حمراء بشرية، [ 11 ] [ 28 ] ولإنتاج ديدان C. elegans مُعدلة وراثيًا ، [ 12 ] وفئران مُعدلة وراثيًا ، [ 13 ] وفئران مُعدلة وراثيًا، [ 29 ] وأسماك زيبرا مُعدلة وراثيًا . [ 14 ] [ 30 ] علاوة على ذلك، يمكن استخدام هذه الطريقة لإنتاج كائنات مُعدلة وراثيًا. وقد حصل وو وزملاؤه على ماشية مُعدلة وراثيًا تحمل جين Sp110 باستخدام إنزيمات TALEN nickases لتحفيز زيادة مقاومتها لمرض السل. [ 31 ] وقد استُخدم هذا النهج أيضًا لإنتاج فئران معدلة وراثيًا عن طريق الحقن المجهري لـ mRNA الخاص بـ TALEN في أجنة أحادية الخلية. [ 32 ]

استُخدمت تقنية TALEN تجريبيًا لتصحيح الأخطاء الجينية المسببة للأمراض. [ 33 ] فعلى سبيل المثال، استُخدمت في المختبر لتصحيح العيوب الجينية التي تُسبب اضطرابات مثل فقر الدم المنجلي ، [ 28 ] [ 34 ] وجفاف الجلد المصطبغ ، [ 35 ] وانحلال البشرة الفقاعي . [ 36 ] وقد أظهرت الدراسات الحديثة إمكانية استخدام TALEN كأداة لتسخير جهاز المناعة لمكافحة السرطانات؛ إذ يُمكن للاستهداف بواسطة TALEN توليد خلايا تائية مقاومة للأدوية الكيميائية وتُظهر نشاطًا مضادًا للأورام. [ 37 ] [ 38 ]

نظريًا، تسمح الخصوصية الجينومية الشاملة لدمجات TALEN المُهندسة بتصحيح الأخطاء في المواقع الجينية الفردية عبر الإصلاح الموجه بالتماثل من قالب خارجي صحيح. [ 33 ] مع ذلك، عمليًا، فإن تطبيق TALEN في الموقع محدود حاليًا بسبب نقص آلية توصيل فعالة، وعوامل مناعية غير معروفة، وعدم اليقين بشأن خصوصية ارتباط TALEN. [ 33 ]

من التطبيقات الناشئة الأخرى لتقنية TALEN قدرتها على الاندماج مع أدوات هندسة الجينوم الأخرى، مثل النيوكليازات الضخمة . يمكن دمج منطقة ارتباط الحمض النووي لمؤثر TAL مع نطاق الانقسام للنيوكلياز الضخم لإنشاء بنية هجينة تجمع بين سهولة الهندسة ونشاط ارتباط الحمض النووي عالي التخصص لمؤثر TAL مع انخفاض تردد الموقع وخصوصية النيوكلياز الضخم. [ 39 ]

بالمقارنة مع تقنيات تعديل الجينوم الأخرى، تقع تقنية TALEN في المنتصف من حيث الصعوبة والتكلفة. على عكس تقنية ZFNs ، تتعرف TALEN على النيوكليوتيدات المفردة. من الأسهل بكثير هندسة التفاعلات بين نطاقات ربط الحمض النووي لتقنية TALEN والنيوكليوتيدات المستهدفة مقارنةً بإنشاء تفاعلات مع تقنية ZFNs وثلاثيات النيوكليوتيدات المستهدفة. [ 40 ] من ناحية أخرى، تعتمد تقنية CRISPR على تكوين معقدات الريبونوكليوتيدات بدلاً من التعرف على البروتين/الحمض النووي. تواجه جزيئات gRNA أحيانًا قيودًا تتعلق بالجدوى بسبب نقص مواقع PAM في التسلسل المستهدف، وعلى الرغم من إمكانية إنتاجها بتكلفة منخفضة، فقد أدى التطور الحالي إلى انخفاض ملحوظ في تكلفة تقنية TALEN، بحيث أصبحت في نطاق سعري وزمني مماثل لتقنية تعديل الجينوم القائمة على CRISPR .

دقة نوكلياز TAL المؤثر

قد يؤدي النشاط غير المستهدف للنيوكلياز النشط إلى حدوث كسور غير مرغوب فيها في سلسلتي الحمض النووي، مما قد ينتج عنه إعادة ترتيب الكروموسومات و/أو موت الخلايا. وقد أُجريت دراسات لمقارنة السمية النسبية المرتبطة بالنيوكلياز في التقنيات المتاحة. واستنادًا إلى هذه الدراسات [ 18 ] والمسافة النظرية القصوى بين ارتباط الحمض النووي ونشاط النيوكلياز، يُعتقد أن تركيبات TALEN تتمتع بأعلى دقة بين التقنيات المتاحة حاليًا. [ 41 ]

انظر أيضاً

مراجع

  1. 1 2 Boch J (فبراير 2011). " حكايات استهداف الجينوم". Nature Biotechnology . 29 (2): 135–6 . doi : 10.1038/nbt.1767 . PMID 21301438. S2CID 304571 .  
  2. ↑ بوش ج، بوناس يو (سبتمبر 2010). "مؤثرات عائلة Xanthomonas AvrBs3 من النوع الثالث: اكتشافها ووظيفتها". المراجعة السنوية لعلم أمراض النبات . 48 (1): 419-36 . Bibcode : 2010AnRvP..48..419B . doi : 10.1146/annurev-phyto-080508-081936 . PMID 19400638 . 
  3. ↑ Boch J, Scholze H, Schornack S, Landgraf A, Hahn S, Kay S, Lahaye T, Nickstadt A, Bonas U (ديسمبر 2009). "فك شفرة خصوصية ارتباط الحمض النووي لمؤثرات TAL من النوع الثالث". مجلة ساينس . 326 (5959): 1509-1512 . Bibcode : 2009Sci...326.1509B . doi : 10.1126/science.1178811 . PMID 19933107. S2CID 206522347 .  
  4. ↑ موسكو إم جيه، بوغدانوف إيه جيه (ديسمبر 2009). "شفرة بسيطة تحكم التعرف على الحمض النووي بواسطة مُؤثرات TAL". مجلة ساينس . 326 (5959): 1501. Bibcode : 2009Sci...326.1501M . doi : 10.1126/science.1178817 . PMID 19933106. S2CID 6648530 .  
  5. ^ Juillerat A، Pessereau C، Dubois G، Guyot V، Maréchal A، Valton J، Daboussi F، Poirot L، Duclert A، Duchateau P (يناير 2015). "الضبط الأمثل لخصوصية TALEN باستخدام RVDs غير التقليدية" . التقارير العلمية . 5 8150. بيب كود : 2015NatSR...5.8150J . دوى : 10.1038/srep08150 . بمك 4311247 . بميد 25632877 .  
  6. ↑ كريستيان م، سيرماك ت، دويل إي إل، شميدت س، تشانغ ف، هوميل أ، بوغدانوف أ ج، فويتاس د ف (أكتوبر 2010). "استهداف فواصل الحمض النووي المزدوجة باستخدام نوكليازات TAL المؤثرة" . علم الوراثة . 186 (2): 757-761 . doi : 10.1534/genetics.110.120717 . PMC 2942870. PMID 20660643 .  
  7. ↑ لي تي، هوانغ إس، جيانغ دبليو زد، رايت دي، سبالدينغ إم إتش، ويكس دي بي، يانغ بي (يناير 2011). "نوكليازات TAL (TALNs): بروتينات هجينة تتكون من مؤثرات TAL ونطاق قطع الحمض النووي FokI" . أبحاث الأحماض النووية . 39 (1): 359-372 . doi : 10.1093/nar/ gkq704 . PMC 3017587. PMID 20699274 .  
  8. ↑ محفوظ، م.م.، لي، ل.، شاميموزمان، م.، ويبوو، أ.، فانغ، ش.، تشو، ج.ك. (فبراير 2011). "إنزيم نوكلياز هجين مُهندس حديثًا يُشبه مُنشط النسخ (TALE) ذو خصوصية ارتباط جديدة بالحمض النووي يُحدث كسورًا في سلسلتي الحمض النووي" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 108 (6): 2623-2628 . Bibcode : 2011PNAS..108.2623M . doi : 10.1073/pnas.1019533108 . PMC 3038751. PMID 21262818 .  
  9. 1 2 3 سيرماك تي، دويل إي إل، كريستيان إم، وانغ إل، تشانغ واي، شميدت سي، بالر جيه إيه، سوميا إن في، بوغدانوف إيه جيه، فويتاس دي إف (يوليو 2011). "التصميم والتجميع الفعال لبنى TALEN المخصصة وغيرها من البنى القائمة على مؤثرات TAL لاستهداف الحمض النووي" . مجلة أبحاث الأحماض النووية . 39 (12): e82. doi : 10.1093/nar/gkr218 . PMC 3130291. PMID 21493687 .  
  10. ١ ٢ ٣ ٤ ٥ ميلر جيه سي، تان إس، كياو جي، بارلو كيه إيه، وانغ جيه، شيا دي إف، مينغ إكس، باشون دي إي، ليونغ إي، هينكلي إس جيه، دولاي جي بي، هوا كيه إل، أنكودينوفا آي، كوست جي جيه، أورنوف إف دي، تشانغ إتش إس، هولمز إم سي، تشانغ إل، غريغوري بي دي، ريبار إي جيه (فبراير ٢٠١١). "بنية نوكلياز TALE لتحرير الجينوم بكفاءة". مجلة Nature Biotechnology . ٢٩ (٢): ١٤٣-١٤٨ . doi : 10.1038/nbt.1755 . PMID 21179091. S2CID 53549397 .  
  11. ١ ٢ ٣ هوكيمير د، وانغ هـ، كياني س، لاي س س، غاو كيو، كاسادي ج ب، كوست ج ج، تشانغ ل، سانتياغو ي، ميلر ج س، زيتلر ب، شيرون ج م، مينغ إكس، هينكلي س ج، ريبار إي ج، غريغوري ب د، أورنوف ف د، جانيش ر (يوليو ٢٠١١). "الهندسة الوراثية للخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات باستخدام نوكليازات TALE" . مجلة Nature Biotechnology . ٢٩ (٨): ٧٣١-٧٣٤ . doi : 10.1038/nbt.1927 . PMC 3152587. PMID 21738127 .  
  12. وود إيه جيه ، لو تي دبليو، زيتلر بي، بيكل سي إس، رالستون إي جيه، لي إيه إتش، أمورا آر، ميلر جيه سي، ليونغ إي، مينغ إكس، تشانغ إل، ريبار إي جيه، غريغوري بي دي، أورنوف إف دي، ماير بي جيه (يوليو 2011). " التعديل الجيني الموجه عبر الأنواع باستخدام ZFNs وTALENs" . مجلة ساينس . 333 (6040): 307. Bibcode : 2011Sci...333..307W . doi : 10.1126/science.1207773 . PMC 3489282. PMID 21700836 .  
  13. 1 2 تيسون إل، أوسال سي، مينوريه إس، ليونغ إي، نايلز بي جيه، ريمي إس، سانتياغو واي، فينسنت إيه آي، مينغ إكس، تشانغ إل، غريغوري بي دي، أنيغون آي، كوست جي جيه (أغسطس 2011). "فئران معدلة وراثيًا تم إنتاجها عن طريق الحقن المجهري للأجنة بـ TALENs" . مجلة Nature Biotechnology . 29 (8): 695-696 . doi : 10.1038/nbt.1940 . PMID 21822240 . 
  14. 1 2 هوانغ ب، شياو أ، تشو م، تشو ز، لين س، تشانغ ب (أغسطس 2011). "استهداف الجينات الوراثية في سمك الزيبرا باستخدام TALENs مخصصة". مجلة Nature Biotechnology . 29 (8): 699-700 . doi : 10.1038/nbt.1939 . PMID 21822242. S2CID 28802632 .  
  15. ↑ دويون واي، فو تي دي، مندل إم سي، غرينبيرغ إس جي، وانغ جيه، شيا دي إف، ميلر جيه سي، أورنوف إف دي، غريغوري بي دي، هولمز إم سي (يناير 2011). "تعزيز نشاط نوكلياز أصابع الزنك من خلال تحسين البنى غير المتجانسة الإلزامية". نيتشر ميثودز . 8 (1): 74-79 . doi : 10.1038/nmeth.1539 . PMID 21131970. S2CID 14334237 .  
  16. ↑ Szczepek M, Brondani V, Büchel J, Serrano L, Segal DJ, Cathomen T (يوليو 2007). "إعادة تصميم واجهة التضاعف بناءً على البنية يقلل من سمية نوكليازات أصابع الزنك" ( ملف PDF) . Nature Biotechnology . 25 (7): 786–93 . doi : 10.1038/nbt1317 . PMID 17603476. S2CID 22079561 .  
  17. ↑ غو جيه، غاج تي، بارباس سي إف (يوليو 2010). "التطور الموجه لنطاق انقسام FokI مُحسَّن وعالي الكفاءة لنوكليازات أصابع الزنك" . مجلة البيولوجيا الجزيئية . 400 (1): 96-107 . doi : 10.1016/j.jmb.2010.04.060 . PMC 2885538. PMID 20447404 .  
  18. 1 2 موسولينو سي، موربيتزر آر، لوتج إف، دانيمان إن، لاهاي تي، كاثومين تي (نوفمبر 2011). "هيكل نوكلياز TALE جديد يُمكّن من تحرير الجينوم بكفاءة عالية مع سمية منخفضة" . مجلة أبحاث الأحماض النووية . 39 (21): 9283-9293 . doi : 10.1093/nar/gkr597 . PMC 3241638. PMID 21813459 .  
  19. 1 2 Zhang F, Cong L, Lodato S, Kosuri S, Church GM, Arlotta P (فبراير 2011). " بناء فعال لمؤثرات TAL محددة التسلسل لتعديل النسخ في الثدييات" . Nature Biotechnology . 29 (2): 149–53 . doi : 10.1038/nbt.1775 . PMC 3084533. PMID 21248753 .  
  20. ↑ هوفر د (2012). "استخدام DNAWorks في تصميم قليل النوكليوتيدات لتخليق الجينات القائم على تفاعل البوليميراز المتسلسل". تخليق الجينات . طرق في البيولوجيا الجزيئية. المجلد 852. الصفحات 215-223 . doi : 10.1007/978-1-61779-564-0_16 . ISBN   978-1-61779-563-3PMID 22328436​​ 
  21. ↑ موربيتزر ر، إلساسر ج، هاوسنر ج، لاهاي ت (يوليو 2011). "تجميع نطاقات ربط الحمض النووي من نوع TALE المخصصة عن طريق الاستنساخ المعياري" . أبحاث الأحماض النووية . 39 (13): 5790-9 . doi : 10.1093/nar/gkr151 . PMC 3141260. PMID 21421566 .  
  22. ↑ لي تي، هوانغ إس، تشاو إكس، رايت دي إيه، كاربنتر إس، سبالدينغ إم إتش، ويكس دي بي، يانغ بي (أغسطس 2011). "نوكليازات TAL المصممة والمُجمَّعة بشكل معياري لتعطيل الجينات واستبدالها في حقيقيات النوى" . مجلة أبحاث الأحماض النووية . 39 (14): 6315-25 . doi : 10.1093/nar/ gkr188 . PMC 3152341. PMID 21459844 .  
  23. ↑ جيسلر ر، شولز هـ، هان س، ستريوبل ج، بوناس يو، بيرنز إس إي، بوخ ج (2011). شيو إس إتش (محرر). " منشطات النسخ للجينات البشرية ذات الخصوصية القابلة للبرمجة للحمض النووي" . PLOS ONE . 6 (5) e19509. Bibcode : 2011PLoSO...619509G . doi : 10.1371/journal.pone.0019509 . PMC 3098229. PMID 21625585 .  
  24. ↑ ويبر إي، غروتزنر آر، فيرنر إس، إنجلر سي، ماريلونيه إس (2011). بندحمان إم (محرر). " تجميع مُؤثرات TAL المصممة بواسطة استنساخ غولدن غيت" . PLOS ONE . 6 (5) e19722. Bibcode : 2011PLoSO...619722W . doi : 10.1371/journal.pone.0019722 . PMC 3098256. PMID 21625552 .  
  25. ↑ تشانغ ي، تشانغ ف، لي إكس، بالر جيه إيه، تشي واي، ستاركير سي جي، بوغدانوف إيه جيه، فويتاس دي إف (يناير 2013). "تُمكّن النيوكليازات المؤثرة الشبيهة بمنشطات النسخ من هندسة جينوم النبات بكفاءة" . علم وظائف النبات . 161 (1): 20-27 . doi : 10.1104/pp.112.205179 . PMC 3532252. PMID 23124327 .  
  26. ↑ هاون وآخرون (سبتمبر 2014). "تحسين جودة زيت فول الصويا من خلال الطفرات الموجهة لعائلة جينات نازعة تشبع الأحماض الدهنية 2" . مجلة التكنولوجيا الحيوية النباتية . 12 (7): 934-940 . Bibcode : 2014PBioJ..12..934H . doi : 10.1111/pbi.12201 . PMID: 24851712 . 
  27. ↑ دابوسي ف، ليدوك س، مارشال أ، دوبوا ج، غيوت ف، بيريز-ميشو س، أماتو أ، فالتشياتوري أ، جويليرات أ، بيرديلي م، فويتاس د ف، كافاريك ل، دوشاتو ب (مايو 2014). "الهندسة الجينية تُمكّن الدياتوم Phaeodactylum tricornutum من التطور في مجال التقنية الحيوية" . Nature Communications . 5 3831. Bibcode : 2014NatCo...5.3831D . doi : 10.1038/ncomms4831 . PMID 24871200 . 
  28. وينرت ب ، فونيل أ ب، نورتون ل ج، بيرسون ر س، ويلكنسون-وايت ل إ، ليستر ك، فادولاس ج، بورتيوس م ه، ماثيوز ج م، كوينلان ك ج، كروسلي م (2015). "تعديل الجينوم لإدخال طفرة مفيدة تحدث بشكل طبيعي مرتبطة بزيادة غلوبين الجنين" . نيتشر كوميونيكيشنز . 6 7085. Bibcode : 2015NatCo...6.7085W . doi : 10.1038/ncomms8085 . hdl : 1959.4/unsworks_49831 . PMID 25971621 . 
  29. ↑ ديفيز ب، ديفيز ج، بريس س، بوليادي ر، شومسكا د، بهاتاشاريا س (2013). "طفرة موضعية في موقع Zic2 عن طريق الحقن المجهري لـ mRNA الخاص بـ TALEN في بويضات الفئران من سلالات CD1 وC3H وC57BL/6J" . PLOS ONE . 8 (3) e60216. Bibcode : 2013PLoSO...860216D . doi : 10.1371/journal.pone.0060216 . PMC 3610929. PMID 23555929 .  
  30. ↑ ساندر، جيه دي، كيد، إل، خايتر، سي، ريون، دي، بيترسون، آر تي، جونغ، جيه كيه، ييه، جيه آر (أغسطس 2011). "تعطيل الجينات المستهدفة في خلايا سمك الزيبرا الجسدية باستخدام TALENs المُهندسة" . مجلة Nature Biotechnology . 29 (8): 697-698 . doi : 10.1038/nbt.1934 . PMC 3154023. PMID 21822241 .  
  31. ↑ وو هـ، وانغ ي، تشانغ ي، يانغ م، ليف ج، ليو ج، تشانغ ي (مارس 2015). "إدخال جين SP110 بوساطة نيكاز TALE يمنح الماشية مقاومة متزايدة لمرض السل" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 112 (13): E1530-9. Bibcode : 2015PNAS..112E1530W . doi : 10.1073 / pnas.1421587112 . PMC 4386332. PMID 25733846 .  
  32. ^ بونس دي ليون الخامس، ميريلات آم، تيسون إل، أنيجون الأول، هاملر إي (2014). "جيل فئران GRdim بوساطة TALEN عن طريق إعادة التركيب المتماثل" . بلوس واحد . 9 (2) e88146. بيب كود : 2014PLoSO...988146P . دوى : 10.1371/journal.pone.0088146 . بمك 3921256 . بميد 24523878 .  
  33. 1 2 3 كارلسون دي إف، فارينكروغ إس سي، هاكيت بي بي (يناير 2012). "استهداف الحمض النووي باستخدام الأصابع وTALENs" . العلاج الجزيئي: الأحماض النووية . 1 (3) e3. doi : 10.1038/mtna.2011.5 . PMC 3381595. PMID 23344620 .  
  34. ↑ رامالينغام إس، أنالورو إن، كاندفيلو كيه، تشاندراسيكاران إس (2014). "توليد الخلايا الجذعية المحفزة متعددة القدرات البشرية الخاصة بأمراض معينة وتصحيحها جينيًا باستخدام تقنية TALEN". العلاج الجيني الحالي . 14 (6): 461-472 . doi : 10.2174/1566523214666140918101725 . PMID 25245091 . 
  35. ^ دوبوي أ، فالتون جيه، ليدوك إس، أرمييه جيه، جاليتو آر، جوبل أ، ليبوهوتيل سي، ستاري أ، باكيس إف، دوشاتو بي، ساراسين أ، دبوسي إف (2013). "العلاج الجيني المستهدف لخلايا جفاف الجلد المصطبغ باستخدام ميجانوكلياز و TALEN ™" . بلوس واحد . 8 (11) هـ78678. بيب كود : 2013PLoSO...878678D . دوى : 10.1371/journal.pone.0078678 . بمك 3827243 . بميد 24236034 .  
  36. ↑ أوزبورن إم جي، ستاركر سي جي، ماكلروي آن، ويبر بي آر، ريدل إم جي، شيا إل، ديفيو أب، غابرييل آر، شميدت إم، فون كالي سي، كارلسون دي إف، مايدر إم إل، جونغ جيه كيه، فاغنر جي إي، فويتاس دي إف، بلازار بي آر، تولار جي (يونيو 2013). "تصحيح الجينات المستندة إلى TALEN لانحلال البشرة الفقاعي" . العلاج الجزيئي . 21 (6): 1151– 9. دوى : 10.1038/mt.2013.56 . بمك 3677309 . بميد 23546300 .  
  37. ↑ فالتون ج، غيوت ف، مارشال أ، فيلهول ج م، جويليرات أ، دوكليرت أ، دوشاتو ب، بوارو ل (سبتمبر 2015). "خلايا CAR T مُهندسة مقاومة للأدوية المتعددة للعلاج المناعي المُركب الخيفي" . العلاج الجزيئي . 23 (9): 1507-1518 . doi : 10.1038 / mt.2015.104 . PMC 4817890. PMID 26061646 .  
  38. ↑ بوارو إل، فيليب ب، شيفر-مانيوي سي، لو كلير دي، شيون-سوتينيل آي، ديرنيام إس، بوتريل بي، باس سي، لومير إل، غاليتو آر، ليبوتيل سي، إيكيم جيه، تشيونغ جي دبليو، دوكليرت إيه، غوبل إيه، أرنولد إس، بيغز كيه، بول إم، شارينبيرغ إيه إم، سميث جيه (سبتمبر 2015). "منصة تصنيع الخلايا التائية متعددة الجينوم لعلاجات المناعة الخلوية التائية الجاهزة للاستخدام" . أبحاث السرطان . 75 (18): 3853-64 . doi : 10.1158/0008-5472.CAN-14-3321 . PMID 26183927 . 
  39. ↑ بويسيل إس، جارجور جيه، أستراخان إيه، أدي إيه، غوبل إيه، دوشاتو بي، شندور جيه، ستودارد بي إل، سيرتو إم تي، بيكر دي، شارينبيرغ إيه إم (فبراير 2014). "ميغاتالز: بنية نوكلياز نادرة القطع لهندسة الجينوم العلاجية" . أبحاث الأحماض النووية . 42 (4): 2591-2601 . doi : 10.1093/nar/gkt1224 . PMC 3936731. PMID 24285304 .  
  40. ↑ "مزايا وعيوب تقنيات ZFNS وTALENs وCRISPR/CAS" . مختبر جاكسون . مارس 2014.
  41. ↑ بوغليولي، إلسي؛ ريتشارد، ماغالي. "مجموعة بوسطن الاستشارية - تقرير عن دقة تحرير الجينات" (PDF) .