كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء

الاستشراب السائل عالي الأداء ( HPLC )، والذي كان يُعرف سابقًا باسم الاستشراب السائل عالي الضغط ، هو تقنية استشرابية في الكيمياء التحليلية تُستخدم لفصل وتحديد وقياس كميات مكونات محددة ( المواد المراد تحليلها ) في المخاليط. يمكن أن تكون هذه المخاليط من مصادر غذائية ، ^أو كيميائية ، ^أو صيدلانية ، ^أو بيولوجية ، أو بيئية ، أو زراعية ، وما ^{إلى ذلك، حيث تكون العينة المُحللة}^إما سائلة أو مذابة في سائل ^.

يُعدّ HPLC في جوهره شكلاً مضغوطاً من أشكال كروماتوغرافيا الأعمدة ، حيث يستخدم مضخات ضغط بدلاً من قوة الجاذبية، وأعمدة أرق وأطول ذات جزيئات امتزاز أصغر. وهذا يزيد من دقته التحليلية.

تُستخدم تقنية كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) على نطاق واسع في التصنيع ( مثلًا ، أثناء عملية إنتاج المنتجات الصيدلانية والبيولوجية)، ^{[ 3 ]}^{[ 4 ]} والأغراض القانونية ( مثلًا ، الكشف عن أدوية تحسين الأداء في البول)، ^{[ 5 ]} والبحوث ( مثلًا ، فصل مكونات عينة بيولوجية معقدة، أو فصل مواد كيميائية اصطناعية متشابهة عن بعضها البعض)، والأغراض الطبية ( مثلًا ، الكشف عن مستويات فيتامين د في مصل الدم). ^{[ 6 ]}

تقوم مضخات الضغط العالي بدفع مخاليط من مذيبات مختلفة ( الطور المتحرك ، مثل الماء، والمحاليل المنظمة ، والأسيتونيتريل ، و/أو الميثانول ) عبر خليط العينة، حيث تلتقط المواد المراد تحليلها وتنقلها إلى أسطوانة ( عمود الكروماتوغرافيا ). يُملأ العمود بجزيئات صلبة مصنوعة من مادة ماصة ( الطور الثابت ). عادةً ما تُصنع هذه الجزيئات من السيليكا أو البوليمرات، ويتراوح قطرها بين 1.5 و50 ميكرومترًا. ^{[ 7 ]}^{[ 8 ]}^{[ 9 ]} يحدث الإذابة عندما يمر الطور المتحرك عبر الطور الثابت. يتفاعل كل مكون في العينة بشكل مختلف مع المادة الماصة والمذيبات، لذا تختلف معدلات إذابتها. ^{[ 2 ]} تؤدي هذه المعدلات المختلفة إلى الفصل التحليلي للمواد في السائل الخارج من العمود (الناتج). يدخل الناتج إلى كاشف كروماتوغرافي متخصص ، مثل كاشف الأشعة فوق البنفسجية ، والذي يُنتج رسمًا بيانيًا ( الكروماتوغرام ). الكروماتوجرام هو رسم بياني يوضح شدة إشارة الكاشف مقابل الزمن أو حجم الطور المتحرك. إذا كانت المواد المراد تحليلها منفصلة جيدًا، فسيُظهر الكروماتوجرام قممًا منفصلة جيدًا، قمة لكل مادة. تظهر كل مادة في وقتها المحدد (زمن الاحتفاظ) بمساحة تتناسب مع كميتها. ^{[ 7 ]}

يمكن وصف الكروماتوغرافيا بأنها عملية نقل كتلة تتضمن الامتزاز و/أو التوزيع . وكما ذُكر، تعتمد تقنية كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) على مضخات لتمرير سائل مضغوط ومزيج العينة عبر عمود مملوء بالمادة المازة (المكون النشط للعمود). قد تلتصق بعض المواد المراد تحليلها بقوة بالمادة المازة بدلاً من المذيب، بينما قد يحدث العكس مع مواد أخرى. أي أن للمواد المراد تحليلها معاملات توزيع مختلفة ، مما يؤدي إلى فصلها. يكون التفاعل بين المادة المراد تحليلها والطور الصلب والطور السائل تفاعلاً فيزيائياً أو كيميائياً قابلاً للانعكاس، وعادةً ما يكون مزيجاً من التفاعلات غير التساهمية . ^{[ 10 ]}^{[ 11 ]}

عملية

يُعدّ جهاز كروماتوغرافيا السائل معقدًا ^{[ 12 ]} ويعتمد على تقنية متطورة ودقيقة. ولتشغيل النظام بشكل صحيح، يجب أن يكون هناك حد أدنى من الفهم لكيفية معالجة الجهاز للبيانات لتجنب البيانات غير الصحيحة والنتائج المشوهة. ^{[ 13 ]}^{[ 14 ]}^{[ 15 ]}

يتميز الاستشراب السائل عالي الأداء (HPLC) عن الاستشراب السائل التقليدي (منخفض الضغط) بارتفاع ضغط التشغيل بشكل ملحوظ (حوالي 50-1400 بار)، بينما يعتمد الاستشراب السائل العادي عادةً على قوة الجاذبية لتمرير الطور المتحرك عبر العمود المعبأ. ونظرًا لصغر كمية العينة المفصولة في الاستشراب السائل التحليلي عالي الأداء، تتراوح أبعاد العمود النموذجية بين 2.1-4.6 مم في القطر، و30-250 مم في الطول. كما تُصنع أعمدة الاستشراب السائل عالي الأداء من جزيئات ماصة أصغر (1.5-50 ميكرومتر في متوسط حجم الجزيئات). وهذا ما يمنح الاستشراب السائل عالي الأداء قدرة فصل فائقة (القدرة على التمييز بين المركبات) عند فصل المخاليط في فترة زمنية أقصر، مما يجعله تقنية استشرابية شائعة. ^{[ 16 ]}

يتضمن المخطط التوضيحي لجهاز كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) عادةً خزانات للمذيبات، ومضخة واحدة أو أكثر، وجهاز إزالة الغازات من المذيب ، وجهاز أخذ العينات، وعمودًا، وكاشفًا. تُحضّر المذيبات مسبقًا وفقًا لاحتياجات الفصل، ثم تمر عبر جهاز إزالة الغازات لإزالة الغازات المذابة، وتُخلط لتكوين الطور المتحرك، ثم تتدفق عبر جهاز أخذ العينات، الذي ينقل مزيج العينة إلى تيار الطور المتحرك، الذي بدوره ينقله إلى العمود. توفر المضخات التدفق والتركيب المطلوبين للطور المتحرك عبر الطور الثابت داخل العمود، ثم مباشرةً إلى خلية التدفق داخل الكاشف. يُولّد الكاشف إشارة تتناسب مع كمية مكون العينة الخارج من العمود، مما يسمح بالتحليل الكمي لمكونات العينة. كما يُسجّل الكاشف وقت الخروج، أي زمن الاحتفاظ، الذي يُستخدم للتعرف الأولي على المكون. توفر الكواشف الأكثر تطورًا معلومات إضافية خاصة بخصائص المادة المراد تحليلها، مثل طيف الأشعة فوق البنفسجية والمرئية أو طيف الكتلة ، مما يُتيح فهمًا أفضل لخصائصها البنيوية. تُستخدم هذه الكواشف على نطاق واسع، مثل كاشف الأشعة فوق البنفسجية/المرئية، وكاشف مصفوفة الثنائيات الضوئية (PDA) / كاشف مصفوفة الثنائيات ، وكاشف مطياف الكتلة . ^{[ 17 ]}^{[ 18 ]}

يتحكم معالج دقيق رقمي وبرنامج مستخدم بجهاز كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) ويوفران تحليل البيانات. يمكن لبعض نماذج المضخات الميكانيكية في جهاز HPLC مزج مذيبات متعددة بنسب تتغير مع الزمن، مما يُولّد تدرجًا في التركيب في الطور المتحرك. تحتوي أجهزة HPLC الأحدث على فرن عمودي يسمح بضبط درجة الحرارة التي يتم عندها الفصل. ^{[ 19 ]}

يُدخل مزيج العينة المراد فصله وتحليله، بحجم صغير محدد (عادةً ميكرولترات)، في تيار الطور المتحرك المتدفق عبر العمود. تتحرك مكونات العينة عبر العمود، كلٌّ منها بسرعة مختلفة، وهي دالة لتفاعلاتها الفيزيائية المحددة مع المادة الماصة، أي الطور الثابت. تعتمد سرعة كل مكون على طبيعته الكيميائية، وعلى طبيعة الطور الثابت (داخل العمود)، وعلى تركيب الطور المتحرك. يُطلق على الوقت الذي يخرج فيه مُحلَّل معين (يخرج من العمود) اسم زمن الاحتفاظ. يُعد زمن الاحتفاظ، الذي يُقاس في ظل ظروف معينة، سمة مميزة لمُحلَّل معين.

تتوفر أنواع عديدة من الأعمدة، مملوءة بمواد ماصة تختلف في حجم الجسيمات والمسامية والتركيب الكيميائي السطحي. يتطلب استخدام مواد تعبئة ذات حجم جسيمات أصغر استخدام ضغط تشغيل أعلى ("ضغط خلفي")، وعادةً ما يُحسّن الفصل الكروماتوغرافي (درجة فصل القمم بين المواد التحليلية المتتالية الخارجة من العمود). قد تكون جسيمات المادة الماصة أيونية أو كارهة للماء أو قطبية.

الطريقة الأكثر شيوعًا في كروماتوغرافيا السوائل هي كروماتوغرافيا الطور المعكوس ، حيث تتضمن الأطوار المتحركة المستخدمة أي مزيج قابل للامتزاج من الماء أو المحاليل المنظمة مع مذيبات عضوية مختلفة (أكثرها شيوعًا الأسيتونيتريل والميثانول). تستخدم بعض تقنيات كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) أطوارًا متحركة خالية من الماء (انظر كروماتوغرافيا الطور العادي أدناه). قد يحتوي المكون المائي للطور المتحرك على أحماض (مثل حمض الفورميك أو الفوسفوريك أو حمض ثلاثي فلورو الأسيتيك ) أو أملاح للمساعدة في فصل مكونات العينة. يمكن تثبيت تركيب الطور المتحرك ("طريقة الإذابة متساوية التركيز") أو تغييره ("طريقة الإذابة المتدرجة") أثناء التحليل الكروماتوغرافي. عادةً ما تكون الإذابة متساوية التركيز فعالة في فصل المخاليط البسيطة. أما الإذابة المتدرجة فهي ضرورية للمخاليط المعقدة، ذات التفاعلات المتغيرة مع الطورين الثابت والمتحرك. لهذا السبب، في الإذابة المتدرجة، يتغير تركيب الطور المتحرك عادةً من قوة إذابة منخفضة إلى قوة عالية. تنعكس قوة الإذابة للطور المتحرك في أوقات احتجاز المادة المراد تحليلها، حيث أن قوة الإذابة العالية تُسرّع عملية الإذابة (مما يؤدي إلى تقصير أوقات الاحتجاز). على سبيل المثال، قد يبدأ منحنى التدرج النموذجي في كروماتوغرافيا الطور المعكوس بنسبة 5% من الأسيتونيتريل (في الماء أو محلول منظم مائي) ويتطور خطيًا إلى 95% من الأسيتونيتريل خلال 5-25 دقيقة. قد تتضمن منحنى التدرج أيضًا فترات من ثبات تركيب الطور المتحرك (مرحلة الثبات). على سبيل المثال، يمكن تثبيت تركيب الطور المتحرك عند 5% من الأسيتونيتريل لمدة 1-3 دقائق، يليه تغيير خطي حتى 95% من الأسيتونيتريل.

يعتمد تركيب الطور المتحرك المُختار على شدة التفاعلات بين مكونات العينة المختلفة ("المواد المراد تحليلها") والطور الثابت ( مثل التفاعلات الكارهة للماء في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء ذي الطور المعكوس). وبناءً على مدى انجذابها للطورين الثابت والمتحرك، تتوزع المواد المراد تحليلها بينهما أثناء عملية الفصل التي تجري في العمود. تشبه عملية التوزيع هذه تلك التي تحدث أثناء الاستخلاص السائل-السائل، ولكنها عملية مستمرة وليست متقطعة.

في المثال الذي يستخدم تدرج الماء/أسيتونيتريل، ستخرج المكونات الأكثر كراهية للماء (تخرج من العمود) لاحقًا، ثم، بمجرد أن يصبح الطور المتحرك أغنى بالأسيتونيتريل ( أي ، في محلول الطور المتحرك ذي معدل إخراج أعلى)، فإن عملية الإخراج تتسارع.

يعتمد اختيار مكونات الطور المتحرك والمواد المضافة (مثل الأملاح أو الأحماض) وظروف التدرج على طبيعة العمود ومكونات العينة. وغالبًا ما تُجرى سلسلة من التجارب على العينة لتحديد طريقة الفصل الكروماتوغرافي السائل عالي الأداء (HPLC) التي توفر فصلًا كافيًا.

التاريخ والتطور

قبل ظهور تقنية كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC)، كان العلماء يستخدمون تقنيات كروماتوغرافيا السائل العمودية المكتبية. كانت أنظمة كروماتوغرافيا السائل غير فعالة إلى حد كبير نظرًا لاعتماد معدل تدفق المذيبات على الجاذبية. وكانت عمليات الفصل تستغرق ساعات طويلة، وأحيانًا أيامًا. في ذلك الوقت، كانت كروماتوغرافيا الغاز (GC) أكثر قوة من كروماتوغرافيا السائل ( LC )، إلا أنه كان من الواضح استحالة فصل وتحليل البوليمرات الحيوية ذات الوزن الجزيئي العالي والقطبية الشديدة في الطور الغازي . ^{[ 20 ]} لم تكن كروماتوغرافيا الغاز فعالة في العديد من تطبيقات علوم الحياة والصحة للجزيئات الحيوية، لأنها في الغالب غير متطايرة وغير مستقرة حراريًا عند درجات الحرارة العالية لكروماتوغرافيا الغاز. ^{[ 21 ]} ونتيجة لذلك، تم اقتراح طرق بديلة سرعان ما أدت إلى تطوير تقنية كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC).

استكمالاً للعمل الرائد الذي قام به مارتن وسينج عام 1941 ، تنبأ كالفن جيدينجز ^{[ 22 ]} وجوزيف هوبر وآخرون في ستينيات القرن الماضي بإمكانية تشغيل تقنية الكروماتوغرافيا السائلة بكفاءة عالية عن طريق تقليل قطر جزيئات التعبئة إلى ما دون المستوى المعتاد في الكروماتوغرافيا السائلة (والكروماتوغرافيا الغازية) البالغ 150 ميكرومتر، واستخدام الضغط لزيادة سرعة الطور المتحرك. ^{[ 20 ]} خضعت هذه التنبؤات لتجارب وتحسينات مكثفة طوال الستينيات والسبعينيات وحتى يومنا هذا. ^{[ 23 ]} بدأت الأبحاث التطويرية المبكرة في تحسين جزيئات الكروماتوغرافيا السائلة، مثل جزيئات زيباكس التاريخية، وهي جزيئات مسامية سطحياً. ^{[ 24 ]}

شهدت سبعينيات القرن العشرين تطوراتٍ عديدة في مجال الأجهزة والمعدات. بدأ الباحثون باستخدام المضخات والحاقنات لتصميم نظام كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC) مبدئيًا. ^{[ 25 ]} كانت مضخات تضخيم الغاز مثاليةً لأنها تعمل بضغط ثابت ولا تتطلب موانع تسرب أو صمامات فحص لضمان تدفق ثابت وقياس كمي دقيق. ^{[ 21 ]} وحققت شركة دوبونت، قسم البوليمرات الصناعية (IPD)، إنجازاتٍ بارزة في مجال الأجهزة، مثل استخدام جهاز تدرج حجم التوقف المنخفض، بالإضافة إلى استبدال حاقن الحاجز بصمام حقن حلقي. ^{[ 21 ]}

على الرغم من أهمية تطوير الأجهزة، فإن تاريخ كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) يتمحور أساسًا حول تاريخ وتطور تقنية الجسيمات . ^{[ 21 ]}^{[ 26 ]} بعد إدخال جسيمات الطبقة المسامية، كان هناك اتجاه ثابت نحو تقليل حجم الجسيمات لتحسين الكفاءة. ^{[ 21 ]} ومع ذلك، مع تقليل حجم الجسيمات، ظهرت مشاكل جديدة. تنبع العيوب العملية من انخفاض الضغط المفرط اللازم لدفع السائل المتحرك عبر العمود وصعوبة تحضير حشوة متجانسة من مواد دقيقة للغاية. ^{[ 27 ]} في كل مرة يتم فيها تقليل حجم الجسيمات بشكل ملحوظ، عادةً ما تكون هناك حاجة إلى جولة أخرى من تطوير الأجهزة للتعامل مع الضغط. ^{[ 23 ]}^{[ 21 ]}

الأنواع

كروماتوغرافيا التقسيم

كانت كروماتوغرافيا التوزيع من أوائل أنواع الكروماتوغرافيا التي طورها الكيميائيون، وهي نادرة الاستخدام في الوقت الحاضر. ^{[ 28 ]} وقد طُبِّق مبدأ معامل التوزيع في كروماتوغرافيا الورق ، وكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، وتطبيقات فصل الطور الغازي والسائل -السائل . حاز آرتشر جون بورتر مارتن وريتشارد لورانس ميلينغتون سينج على جائزة نوبل في الكيمياء عام 1952 لتطويرهما هذه التقنية، التي استُخدمت لفصل الأحماض الأمينية . ^[²⁹^] تستخدم كروماتوغرافيا التوزيع مذيبًا محتجزًا، على سطح أو داخل حبيبات أو ألياف مادة صلبة داعمة "خاملة" كما هو الحال في كروماتوغرافيا الورق؛ أو تستفيد من تفاعل كولومبي و/أو تفاعل مانح للهيدروجين مع الطور الثابت. تتوزع جزيئات المادة المراد تحليلها بين الطور الثابت السائل والمذيب. وكما هو الحال في كروماتوغرافيا التفاعل المحب للماء (HILIC؛ وهي تقنية فرعية ضمن HPLC)، تفصل هذه الطريقة المواد المراد تحليلها بناءً على الاختلافات في قطبيتها. تستخدم تقنية HILIC في أغلب الأحيان طورًا ثابتًا قطبيًا مرتبطًا وطورًا متحركًا يتكون أساسًا من الأسيتونيتريل مع الماء كمكون قوي. وقد استُخدمت تقنية HPLC التقسيمية تاريخيًا على دعامات من السيليكا أو الألومينا غير المرتبطة. وتعمل كلتا التقنيتين بكفاءة لفصل المواد المراد تحليلها بناءً على الاختلافات القطبية النسبية. تتميز تقنية HILIC ذات الأطوار المرتبطة بقدرتها على فصل المواد المذابة الحمضية والقاعدية والمتعادلة في عملية كروماتوغرافية واحدة. ^[³⁰^]

تنتشر المواد التحليلية القطبية في طبقة الماء الثابتة المرتبطة بالطور الثابت القطبي، وبالتالي تُحتجز. كلما زادت قوة التفاعلات بين المادة التحليلية القطبية والطور الثابت القطبي (مقارنةً بالطور المتحرك)، زاد زمن الإذابة. تعتمد قوة التفاعل على المجموعات الوظيفية المكونة للبنية الجزيئية للمادة التحليلية، حيث تُحفز المجموعات الأكثر استقطابًا ( مثل الهيدروكسيل) والمجموعات القادرة على تكوين روابط هيدروجينية احتجازًا أكبر. كما يمكن للتفاعلات الكولومبية (الكهروستاتيكية) أن تزيد من الاحتجاز. استخدام مذيبات أكثر قطبية في الطور المتحرك يُقلل من زمن احتجاز المواد التحليلية، بينما تميل المذيبات الأكثر كراهية للماء إلى زيادة زمن الاحتجاز.

كروماتوغرافيا الطور العادي

كانت كروماتوغرافيا الطور العادي من أوائل أنواع كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) التي طورها الكيميائيون، إلا أن استخدامها تراجع خلال العقود الماضية. تُعرف هذه الطريقة أيضًا باسم كروماتوغرافيا الطور العادي عالي الأداء (NP-HPLC)، وهي تفصل المواد المراد تحليلها بناءً على انجذابها لسطح ثابت قطبي مثل السيليكا؛ وبالتالي، فهي تعتمد على قدرة المادة المراد تحليلها على التفاعل قطبيًا (مثل الروابط الهيدروجينية أو التفاعلات ثنائية القطب ) مع سطح المادة الماصة. تستخدم كروماتوغرافيا الطور العادي عالي الأداء طورًا متحركًا غير قطبي وغير مائي ( مثل الكلوروفورم )، وهي فعالة في فصل المواد المراد تحليلها سهلة الذوبان في المذيبات غير القطبية. ترتبط المادة المراد تحليلها بالطور الثابت القطبي وتُحتجز بواسطته. تزداد قوة الامتزاز مع زيادة قطبية المادة المراد تحليلها. لا تعتمد قوة التفاعل على المجموعات الوظيفية الموجودة في بنية جزيء المادة المراد تحليلها فحسب، بل تعتمد أيضًا على العوامل الفراغية . إن تأثير الإعاقة الفراغية على قوة التفاعل يسمح لهذه الطريقة بفصل (فصل) المتصاوغات الهيكلية .

يؤدي استخدام مذيبات أكثر قطبية في الطور المتحرك إلى تقليل زمن احتجاز المواد المراد تحليلها، بينما تميل المذيبات الأكثر كراهية للماء إلى إبطاء عملية الإذابة (زيادة زمن الاحتجاز). تميل المذيبات شديدة القطبية، مثل آثار الماء في الطور المتحرك، إلى الامتزاز على السطح الصلب للطور الثابت، مُكَوِّنةً طبقة ثابتة مرتبطة (مائية) يُعتقد أنها تلعب دورًا فعالًا في الاحتجاز. يُعد هذا السلوك خاصًا إلى حد ما بكروماتوغرافيا الطور العادي، لأنها تخضع بشكل شبه حصري لآلية امتزاز ( أي أن المواد المراد تحليلها تتفاعل مع سطح صلب بدلًا من الطبقة المذابة للرابطة المرتبطة بسطح المادة المازة؛ انظر أيضًا كروماتوغرافيا الطور المعكوس عالية الأداء أدناه). لا تزال كروماتوغرافيا الامتزاز تُستخدم إلى حد ما لفصل المتماكبات البنيوية في كل من كروماتوغرافيا العمود وكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة على دعامات السيليكا أو الألومينا المُنشَّطة (المجففة).

تراجعت شعبية تقنيتي الفصل الكروماتوغرافي عالي الأداء (HPLC) والفصل الكروماتوغرافي عالي الأداء ذي الطور العادي (NP-HPLC) في سبعينيات القرن الماضي مع تطور تقنية الفصل الكروماتوغرافي عالي الأداء ذي الطور المعكوس ، وذلك بسبب ضعف دقة أوقات الاحتفاظ نتيجة وجود طبقة من الماء أو المذيبات العضوية البروتونية على سطح وسائط الفصل الكروماتوغرافي المصنوعة من السيليكا أو الألومينا . تتغير هذه الطبقة مع أي تغيير في تركيب الطور المتحرك ( مثل مستوى الرطوبة)، مما يؤدي إلى انحراف أوقات الاحتفاظ.

في الآونة الأخيرة، أصبحت كروماتوغرافيا التقسيم شائعة مرة أخرى مع تطوير الأطوار المرتبطة بالهيليك والتي تُظهر قابلية تكرار محسنة، وذلك بفضل فهم أفضل لنطاق فائدة هذه التقنية.

كروماتوغرافيا الإزاحة

يُعدّ استخدام كروماتوغرافيا الإزاحة محدودًا نسبيًا، ويُستخدم في الغالب في كروماتوغرافيا التحضير. يعتمد مبدأها الأساسي على جزيء ذي ألفة عالية لمصفوفة الكروماتوغرافيا (المُزاح)، والذي يُستخدم للتنافس بفعالية على مواقع الارتباط، وبالتالي إزاحة جميع الجزيئات ذات الألفة الأقل. ^{[ 31 ]} ثمة اختلافات واضحة بين كروماتوغرافيا الإزاحة وكروماتوغرافيا الإذابة. في نمط الإذابة، تخرج المواد عادةً من العمود على شكل قمم غاوسية ضيقة. يُفضّل فصل القمم بشكل واسع، ويفضل أن يكون ذلك حتى خط الأساس، لتحقيق أقصى قدر من التنقية. تعتمد سرعة انتقال أي مكون من مكونات الخليط عبر العمود في نمط الإذابة على عوامل عديدة. ولكن لكي تنتقل مادتان بسرعات مختلفة، وبالتالي يتم فصلهما، يجب أن يكون هناك اختلافات جوهرية في تفاعل ما بين الجزيئات الحيوية ومصفوفة الكروماتوغرافيا. يتم ضبط معايير التشغيل لتعظيم تأثير هذا الاختلاف. في كثير من الحالات، لا يمكن تحقيق فصل القمم حتى خط الأساس إلا باستخدام الإذابة المتدرجة وأحمال منخفضة للعمود. لذا، من عيوب كروماتوغرافيا الإذابة، خاصةً على نطاق التحضير، تعقيد التشغيل الناتج عن ضخ المذيب المتدرج، وانخفاض الإنتاجية بسبب انخفاض كمية المذيب في العمود. تتميز كروماتوغرافيا الإزاحة عن كروماتوغرافيا الإذابة بفصل المكونات إلى مناطق متتالية من المواد النقية بدلاً من "قمم" منفصلة. ولأن هذه العملية تستفيد من اللاخطية في منحنيات الامتصاص، يمكن فصل كمية أكبر من المذيب على عمود معين مع استعادة المكونات النقية بتركيز أعلى بكثير.

الاستشراب السائل ذو الطور المعكوس (RP-LC)

مخطط كروماتوغرافي لمزيج معقد (ماء عطري) تم الحصول عليه بواسطة كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء ذات طور عكسي

يُعدّ الاستشراب السائل عالي الأداء ذو الطور المعكوس (RP-HPLC) ^{[ 32 ]} أكثر أنواع الاستشراب شيوعًا. يتميز هذا النوع بطور ثابت غير قطبي وطور متحرك مائي متوسط القطبية. يُستخدم RP-HPLC على نطاق واسع بين علماء الأحياء ومستخدمي علوم الحياة، حتى أنه يُشار إليه غالبًا باسم "HPLC" فقط. كما تستخدمه صناعة الأدوية بانتظام لتقييم الأدوية قبل طرحها في السوق.

في طرق الطور المعكوس، تُحتفظ المواد في النظام كلما زادت كراهيتها للماء. وللحفاظ على المواد العضوية، تتكون الأطوار الثابتة بشكل أساسي من حبيبات مسامية من هلام السيليكا معبأة في العمود. وعادةً ما تكون كروية الشكل بأقطار مختلفة (أقل من 2، 3، 5، 7، 10 ميكرومتر )، وأقطار مسام مختلفة (60، 100، 150، 300 أنغستروم ). وعلى سطحها روابط كيميائية من روابط ألكيلية مستقيمة السلسلة، مثل C3، C4، C8، C18. ويشير الرقم إلى عدد ذرات الكربون في الرابطة. على سبيل المثال، رابطة C3 هي بروبيل . وكلما زاد طول رابطة الهيدروكربون على الطور الثابت، زادت مدة احتفاظ مكونات العينة. تستخدم معظم الطرق الحالية لفصل المواد الطبية الحيوية طورًا ثابتًا من نوع C18، يُعرف أحيانًا بأسماء تجارية مثل ODS (أوكتاديسيل سيلان) أو RP-18 (الطور العكسي 18). ولتحضير هذه الأطوار الثابتة، تُعالج سطح جزيئات هلام السيليكا بـ RMe₂SiCl _،_حيث R عبارة عن مجموعة ألكيل _{ذات سلسلة}_{مستقيمة} مثل _{C₁₈H₃₇} أو C₈H₁₇ .

لفصل المركبات العطرية ، أو بشكل عام المركبات التي تحتوي على العديد من روابط باي ، يمكن أن تحتوي المرحلة الثابتة على روابط فينيل سطحية.

عند درجة حموضة أقل من 2، قد تنفصل الرابطة بين الليجاند وهلام السيليكا. وعند درجة حموضة أعلى من 8، قد تذوب السيليكا نفسها. وعند الحاجة إلى محاليل ذات درجة حموضة قصوى، يمكن تصنيع الطور الثابت من السيليكا المبلمرة بمواد عضوية، أو من بوليمرات عضوية كارهة للماء.

مع هذه الأطوار الثابتة، يكون زمن الاحتفاظ أطول للجزيئات غير القطبية، بينما تخرج الجزيئات القطبية بسهولة أكبر (تظهر مبكرًا في التحليل). يمكن لفني الكروماتوغرافيا زيادة أزمنة الاحتفاظ بإضافة المزيد من الماء إلى الطور المتحرك. نظرًا لأن الماء شديد القطبية، فإنه يجعل المادة غير القطبية تتفاعل بقوة أكبر مع الطور الثابت غير القطبي. وبالمثل، يمكن للباحث تقليل زمن الاحتفاظ بإضافة المزيد من المذيب العضوي غير القطبي إلى الطور المتحرك.

تعتمد تقنية الاستشراب السائل عالي الأداء ذو الطور العكسي (RP-HPLC) على مبدأ التفاعلات الكارهة للماء، والناجمة عن التناظر العالي في بنية الماء ثنائية القطب، والتي تلعب دورًا بالغ الأهمية في جميع العمليات الحيوية. تتيح هذه التقنية قياس قوى التفاعل هذه. يتناسب ارتباط المادة المراد تحليلها بالطور الثابت طرديًا مع مساحة سطح التلامس حول الجزء غير القطبي من جزيء المادة عند ارتباطه بالرابطة على الطور الثابت. يهيمن على هذا التأثير الكاره للمذيب قوة الماء في "تقليل التجويف" حول المادة المراد تحليلها وسلسلة C18 _{مقارنةً} بالمركب الناتج عن كليهما. تتناسب الطاقة المنبعثة في هذه العملية طرديًا مع التوتر السطحي للمذيب (الماء: 7.3 × 10⁻⁶ جول /سم² ^، الميثانول: 2.2 × 10⁻⁶ جول/سم² ^{) ومع السطح الكاره للماء لكل}^من المادة المراد تحليلها والرابطة على التوالي ^. يمكن تقليل الاحتفاظ بإضافة مذيب أقل قطبية (مثل الميثانول أو الأسيتونيتريل ) إلى الطور المتحرك لتقليل التوتر السطحي للماء. وتستفيد تقنية الإذابة المتدرجة من هذا التأثير عن طريق تقليل قطبية الطور المتحرك المائي وتوتره السطحي تلقائيًا أثناء عملية التحليل.

تلعب الخصائص البنيوية لجزيء المادة المراد تحليلها دورًا هامًا في خصائص احتجازها. نظريًا، يمكن احتجاز المادة ذات المساحة السطحية الكارهة للماء الأكبر (روابط C–H وC–C، وعمومًا الروابط الذرية غير القطبية، مثل SS وغيرها) لفترة أطول نظرًا لعدم تفاعلها مع بنية الماء. في المقابل، تُحتجز المواد ذات المساحة السطحية القطبية الأكبر (نتيجة وجود مجموعات قطبية، مثل -OH و-NH₂ _و COO⁻ أو -NH₃⁺ ^{في بنيتها}^{) بشكل أقل، لأنها تندمج بشكل أفضل في الماء. كما يمكن}_أن تتأثر التفاعلات مع الطور الثابت بالتأثيرات الفراغية، أو تأثيرات الاستبعاد، حيث قد يكون وصول مكون من جزيء كبير جدًا إلى مسام الطور الثابت محدودًا، حيث تحدث التفاعلات مع الروابط السطحية (سلاسل الألكيل). عادةً ما يؤدي هذا الإعاقة السطحية إلى انخفاض الاحتجاز.

يزداد زمن الاحتفاظ مع زيادة مساحة السطح الكارهة للماء (غير القطبية) للجزيئات. على سبيل المثال، يمكن للمركبات ذات السلاسل المتفرعة أن تخرج من عمود الفصل بسرعة أكبر من نظائرها الخطية، لأن مساحة سطحها الإجمالية أقل. وبالمثل، غالبًا ما تخرج المركبات العضوية ذات الروابط الأحادية بين ذرات الكربون (C–C) في وقت لاحق من تلك التي تحتوي على روابط ثنائية أو ثلاثية بين ذرات الكربون (C=C أو C≡C)، لأن الرابطة الثنائية أو الثلاثية تجعل الجزيء أكثر كثافة من الرابطة الأحادية.

يُعدّ الرقم الهيدروجيني للمرحلة المتحركة عاملاً مهماً آخر، إذ يُمكنه تغيير الخاصية الكارهة للماء للمادة التحليلية القابلة للتأين. ولهذا السبب، تستخدم معظم الطرق عاملاً منظماً ، مثل فوسفات الصوديوم ، للتحكم في الرقم الهيدروجيني. وتختلف تأثيرات التحكم في الرقم الهيدروجيني والمحاليل المنظمة باختلاف التطبيق، ولكنها تُحسّن عموماً الفصل الكروماتوغرافي للمواد التحليلية القابلة للتأين. وتؤدي المحاليل المنظمة وظائف متعددة:

التحكم في درجة الحموضة، مما يؤثر على حالة تأين المواد التحليلية القابلة للتأين.
تؤثر على الشحنة على الأجزاء القابلة للتأين من سطح الطور الثابت. على سبيل المثال، عادةً ما يكون سطح السيليكا بين روابط الطور مغطى بمجموعات السيلانول التي يمكن أن تفقد بروتوناتها .
تعمل كعوامل اقتران أيوني لمعادلة شحنة المادة المراد تحليلها.

إذا استُخدم مطياف الكتلة لتحليل المُستخلص، فغالبًا ما يُضاف حمض عضوي متطاير إلى المُستخلص، مثل حمض الخليك أو حمض الفورميك . ويُضاف فورمات الأمونيوم عادةً لتحسين الكشف عن بعض المواد المُحللة عن طريق تكوين مُركبات الأمونيوم مع المادة المُحللة ، وهي أكثر تطايرًا من المواد المُحللة نفسها.

يُستخدم حمض ثلاثي فلورو الأسيتيك (TFA) كمادة مضافة إلى الطور المتحرك على نطاق واسع في تحليل الخلائط المعقدة من العينات الطبية الحيوية، وخاصة الببتيدات والبروتينات، باستخدام كواشف تعتمد في الغالب على الأشعة فوق البنفسجية. كما يُحسّن TFA من احتجاز المواد المراد تحليلها، مثل الأحماض الكربوكسيلية ، في التطبيقات التي تستخدم كواشف أخرى (مثل الأشعة فوق البنفسجية والمرئية)، نظرًا لكونه حمضًا عضويًا قويًا نسبيًا. مع ذلك، نادرًا ما يُستخدم في طرق قياس الطيف الكتلي، بسبب الرواسب التي قد يُخلّفها في الكاشف ونظام توصيل المذيب، مما يُؤثر على التحليل والكشف.

تكون جزيئات السيليكا في الطور العكسي أقل عرضة للتلف مقارنةً بجزيئات السيليكا في الطور العادي، نظرًا لحمايتها بروابط كارهة للماء على سطحها. مع ذلك، تتكون معظم أعمدة الطور العكسي من جزيئات سيليكا مشتقة من الألكيل، وهي عرضة لتحلل السيليكا في الظروف الحمضية (الأس الهيدروجيني أقل من 2). كما تذوب السيليكا نفسها في الظروف القلوية (الأس الهيدروجيني أعلى من 8). توجد علامات تجارية مختارة لأعمدة الطور العكسي ذات جزيئات السيليكا الهجينة أو المقواة، والتي يمكن استخدامها في ظروف الأس الهيدروجيني القصوى. قد تؤدي الظروف الحمضية الشديدة أيضًا إلى تآكل الأجزاء المعدنية لأجهزة كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC).

كقاعدة عامة، في معظم الحالات، يجب غسل أعمدة كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء ذي الطور العكسي (RP-HPLC) بمذيب نظيف بعد الاستخدام لإزالة الأحماض أو المحاليل المنظمة المتبقية، وتخزينها في تركيبة مناسبة من المذيب. تتطلب بعض التطبيقات الطبية الحيوية بيئة غير معدنية لتحقيق الفصل الأمثل. في مثل هذه الحالات الحساسة، يتمثل اختبار محتوى المعدن في العمود في حقن عينة عبارة عن خليط من 2،2'- و4،4'- ثنائي البيريدين . نظرًا لقدرة 2،2'- ثنائي البيريدين على الارتباط بالمعادن، فإن شكل ذروة 2،2'- ثنائي البيريدين سيتشوه (يصبح ذا ذيل) عند وجود أيونات معدنية على سطح السيليكا .

كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي

تفصل كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي ( SEC ) ^{[ 33 ]} جزيئات البوليمر والجزيئات الحيوية بناءً على اختلاف أحجامها الجزيئية (في الواقع، نصف قطر ستوكس للجسيم ). تعتمد عملية الفصل على قدرة جزيئات العينة على النفاذ عبر مسام الكرات الهلامية المعبأة داخل العمود، وتعتمد على الحجم النسبي لجزيئات المادة المراد تحليلها وحجم مسام المادة الماصة. كما تعتمد العملية على عدم وجود أي تفاعلات مع سطح مادة التعبئة.

يوجد نوعان رئيسيان من هيئة الأوراق المالية والبورصات الأمريكية:

كروماتوغرافيا نفاذية الهلام (GPC) - فصل البوليمرات الاصطناعية (القابلة للذوبان في الماء أو المواد العضوية)، باستخدام المذيبات العضوية بشكل أساسي.
كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي (GFC) - فصل البوليمرات الحيوية القابلة للذوبان في الماء (عادة البروتينات)، باستخدام المذيبات المائية بشكل أساسي.

يعتمد مبدأ الفصل في كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي (SEC) على اختراق جزيئات الطور الثابت المسامية، كليًا أو جزئيًا، للمواد ذات الوزن الجزيئي العالي في العينة أثناء مرورها عبر العمود. يُختار مذيب الطور المتحرك بحيث يمنع تمامًا التفاعلات مع سطح الطور الثابت. في ظل هذه الظروف، كلما صغر حجم الجزيء، زادت قدرته على اختراق المسام، واستغرقت حركته عبر العمود وقتًا أطول. من ناحية أخرى، كلما كبر حجم الجزيء، زادت احتمالية عدم اختراقه مسام الطور الثابت بالكامل، بل وربما دورانه حولها، وبالتالي، يتم فصله مبكرًا. تُفصل الجزيئات بترتيب تنازلي حسب وزنها الجزيئي، حيث تخرج الجزيئات الأكبر حجمًا من العمود أولًا، تليها الجزيئات الأصغر. أما الجزيئات الأكبر من حجم المسام فلا تدخلها على الإطلاق، وتخرج معًا كأول قمة في الكروماتوجرام، وهذا ما يُسمى حجم الاستبعاد الكلي، الذي يُحدد حد الاستبعاد لعمود معين. ستخترق الجزيئات الصغيرة مسام جزيئات الطور الثابت بالكامل وسيتم فصلها في النهاية، مما يشير إلى نهاية الكروماتوجرام، وقد تظهر كعلامة اختراق كاملة.

في العلوم الطبية الحيوية، يُعتبر هذا النوع من الكروماتوغرافيا منخفض الدقة، ولذلك يُستخدم غالبًا في المرحلة النهائية من عملية التنقية. كما أنه مفيد لتحديد البنية الثالثية والرباعية للبروتينات المنقاة. يُستخدم كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي (SEC) بشكل أساسي لتحليل الجزيئات الكبيرة مثل البروتينات والبوليمرات. يعمل هذا النوع أيضًا بطريقة تحضيرية عن طريق احتجاز الجزيئات الأصغر في مسام الجسيمات. أما الجزيئات الأكبر فتمر ببساطة من خلال المسام لأنها كبيرة جدًا بحيث لا يمكنها الدخول إليها. وبالتالي، تتدفق الجزيئات الأكبر عبر العمود بسرعة أكبر من الجزيئات الأصغر؛ أي كلما صغر حجم الجزيء، زاد زمن الاحتفاظ به.

تُستخدم هذه التقنية على نطاق واسع لتحديد الوزن الجزيئي للسكريات المتعددة. وتُعدّ تقنية كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي (SEC) التقنية الرسمية المعتمدة في دستور الأدوية الأوروبي لمقارنة الأوزان الجزيئية لأنواع الهيبارين المختلفة منخفضة الوزن الجزيئي المتوفرة تجاريًا . ^{[ 34 ]}

كروماتوغرافيا التبادل الأيوني

إن كروماتوغرافيا التبادل الأيوني ( IEC ) أو كروماتوغرافيا الأيونات ( IC ) ^{[ 35 ]} هي تقنية تحليلية لفصل وتحديد المواد المذابة الأيونية في العينات المائية من مصادر بيئية وصناعية مثل صناعة المعادن، ومياه الصرف الصناعي، وفي الأنظمة البيولوجية، والعينات الصيدلانية، والأغذية، وما إلى ذلك.

في تقنية الفصل الأيوني، توجد مواقع مشحونة كهربائيًا مرتبطة بالطور الثابت. تتنافر أيونات المذاب المشحونة بنفس شحنة الأيونات الموجودة على العمود وتُفصل دون احتجاز، بينما تُحتجز أيونات المذاب المشحونة بشحنة معاكسة لشحنة المواقع المشحونة على العمود. وبشكل عام، تُحتجز الأيونات ذات الشحنة الأعلى ونصف القطر الأصغر بقوة أكبر. ويمكن فصل أيونات المذاب المحتجزة على العمود عن طريق تغيير تركيبة الطور المتحرك، كزيادة تركيز الملح ودرجة الحموضة، أو زيادة درجة حرارة الطور الثابت، وما إلى ذلك.

تشمل أنواع المبادلات الأيونية راتنجات البوليسترين ، ومبادلات أيونية من السليلوز والدكستران (الهلاميات)، والزجاج ذي المسام المتحكم بها أو هلام السيليكا المسامي . تسمح راتنجات البوليسترين بالتشابك، مما يزيد من استقرار السلسلة. ويقلل التشابك العالي من الانحراف، مما يزيد من زمن التوازن ويحسن الانتقائية في النهاية. تتميز مبادلات أيونية من السليلوز والدكستران بأحجام مسام أكبر وكثافة شحنة منخفضة، مما يجعلها مناسبة لفصل البروتينات.

يؤدي ارتفاع تركيز الأيونات المضادة (بالنسبة للمجموعات الوظيفية في الراتنجات) إلى تقليل زمن الاحتفاظ، نظرًا لتنافسها الشديد مع أيونات المذاب. ويؤدي انخفاض الرقم الهيدروجيني إلى تقليل زمن الاحتفاظ في التبادل الكاتيوني، بينما يؤدي ارتفاعه إلى تقليله في التبادل الأنيوني. فعلى سبيل المثال، عند خفض الرقم الهيدروجيني للمذيب في عمود التبادل الكاتيوني، تتوفر أيونات هيدروجين أكثر للتنافس على المواقع على الطور الثابت الأنيوني، مما يؤدي إلى فصل الكاتيونات ضعيفة الارتباط.

يستخدم هذا النوع من الكروماتوغرافيا على نطاق واسع في التطبيقات التالية: تنقية المياه، والتركيز المسبق للمكونات النزرة، وكروماتوغرافيا تبادل الليجاند، وكروماتوغرافيا تبادل الأيونات للبروتينات، وكروماتوغرافيا تبادل الأنيونات ذات الرقم الهيدروجيني العالي للكربوهيدرات والسكريات قليلة الوحدات، وغيرها.

كروماتوغرافيا التقارب

تعتمد تقنية كروماتوغرافيا التقارب عالية الأداء (HPAC) ^{[ 36 ]} على تمرير محلول العينة عبر عمود معبأ بطور ثابت يحتوي على ربيطة نشطة بيولوجيًا مثبتة. هذه الربيطة هي في الواقع مادة أساسية ذات ألفة ارتباط نوعية للجزيء المستهدف في محلول العينة. يرتبط الجزيء المستهدف بالربيطة، بينما تمر الجزيئات الأخرى في محلول العينة عبر العمود، مع احتجاز ضئيل أو معدوم. بعد ذلك، يُفصل الجزيء المستهدف من العمود باستخدام محلول فصل مناسب.

تعتمد هذه العملية الكروماتوغرافية على قدرة المواد الفعالة المرتبطة على تكوين مركبات مستقرة، نوعية، وقابلة للانعكاس، وذلك بفضل تعرفها البيولوجي على مكونات محددة من العينة. يتضمن تكوين هذه المركبات مشاركة قوى جزيئية مشتركة، مثل تفاعل فان دير فالس ، والتفاعل الكهروستاتيكي، وتفاعل ثنائي القطب، والتفاعل الكاره للماء، والرابطة الهيدروجينية. تتشكل رابطة فعالة ونوعية من خلال عمل متزامن ومتضافر لعدة من هذه القوى في مواقع الارتباط المتكاملة.

كروماتوغرافيا الطور العادي المائي

تُعرف كروماتوغرافيا الطور العادي المائي ( ANP ) أيضًا باسم كروماتوغرافيا التفاعل الهيدروفيلي السائل ( HILIC ). ^{[ 37 ]} وهي تقنية كروماتوغرافية تشمل منطقة الطور المتحرك الواقعة بين كروماتوغرافيا الطور المعكوس (RP) وكروماتوغرافيا الطور العادي العضوي (ONP). تُستخدم HILIC لتحقيق انتقائية فريدة للمركبات المحبة للماء، ^{[ 38 ]} حيث تُظهر ترتيب فصل الطور العادي، باستخدام "مذيبات الطور المعكوس"، أي مذيبات قطبية نسبيًا وغير مائية في الغالب في الطور المتحرك. ^{[ 37 ]} العديد من الجزيئات البيولوجية، وخاصة تلك الموجودة في السوائل البيولوجية، هي مركبات قطبية صغيرة لا تحتفظ جيدًا بواسطة كروماتوغرافيا الطور المعكوس عالية الأداء (HPLC). هذا ما جعل كروماتوغرافيا التفاعل الهيدروفيلي السائل (HILIC) بديلاً جذابًا ونهجًا مفيدًا لتحليل الجزيئات القطبية. بالإضافة إلى ذلك، نظرًا لأن HILIC تُستخدم بشكل روتيني مع الخلائط المائية التقليدية مع المذيبات العضوية القطبية مثل الأسيتونيتريل والميثانول، فإنه يمكن ربطها بسهولة بمطياف الكتلة (MS). ^{[ 38 ]}

الاستخلاص متساوي التركيز والاستخلاص المتدرج

أثناء عملية الفصل، قد يبقى تركيب الطور المتحرك ثابتًا أو يتغير. إذا بقي ثابتًا، تُسمى العملية متساوية التركيز (أي ذات تركيب ثابت ). وقد صاغ هذا المصطلح تشابا هورفاث ، أحد رواد تقنية كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC). ^{[ 39 ]}^{[ 40 ]}

إذا طرأ تغيير، تُسمى العملية حينها بالإذابة المتدرجة . ^{[ 41 ]}^{[ 42 ]} على سبيل المثال، يمكن أن تبدأ الإذابة المتدرجة بنسبة 10% من الميثانول في الماء، وتنتهي بنسبة 90% من الميثانول في الماء بعد 20 دقيقة. يُطلق عادةً على مُكوّني الطور المتحرك اسم "أ" و"ب"؛ حيث يُمثل "أ" المذيب "الضعيف" الذي يسمح للمذاب بالخروج ببطء، بينما يُمثل "ب " المذيب "القوي" الذي يُخرج المذابات من العمود بسرعة. في كروماتوغرافيا الطور المعكوس ، غالبًا ما يكون المذيب "أ" هو الماء أو محلول منظم مائي، بينما يكون "ب" مذيبًا عضويًا قابلًا للامتزاج بالماء، مثل الأسيتونيتريل أو الميثانول أو رباعي هيدروفيوران أو الإيزوبروبانول .

في عملية الإذابة متساوية التركيز، يزداد عرض الذروة مع زمن الاحتفاظ خطيًا وفقًا للمعادلة الخاصة بعدد الصفائح النظرية (N). قد يُشكل هذا عيبًا كبيرًا عند تحليل عينة تحتوي على مواد تحليلية ذات نطاق واسع من معاملات الاحتفاظ. باستخدام طور متحرك أضعف، يطول زمن التشغيل، مما يؤدي إلى اتساع الذروات التي تُذاب ببطء، وبالتالي انخفاض الحساسية. من شأن استخدام طور متحرك أقوى أن يُحسّن من مشكلة زمن التشغيل واتساع الذروات اللاحقة، ولكنه يُؤدي إلى ضعف فصل الذروات، خاصةً بالنسبة للمواد التحليلية التي تُذاب بسرعة والتي قد لا يتوفر لها وقت كافٍ للفصل التام. تُعالج هذه المشكلة من خلال تغيير تركيبة الطور المتحرك في عملية الإذابة المتدرجة.

من خلال البدء بمرحلة متحركة أضعف وتقويتها تدريجيًا أثناء التشغيل، يقلل الإذابة المتدرجة من احتجاز المكونات المتأخرة في الخروج، مما يؤدي إلى خروجها بشكل أسرع، وبالتالي الحصول على قمم أضيق (وأعلى) لمعظم المكونات، مع السماح في الوقت نفسه بفصل المكونات المبكرة في الخروج بشكل كافٍ. كما يُحسّن هذا من شكل القمم ذات الذيل، حيث يدفع التركيز المتزايد للمذيب العضوي الجزء الذيل من القمة إلى الأمام. ويزيد هذا أيضًا من ارتفاع القمة (تبدو القمة "أكثر حدة")، وهو أمر مهم في تحليل الآثار. قد يتضمن برنامج التدرج زيادات "خطوية" مفاجئة في نسبة المكون العضوي، أو ميولًا مختلفة في أوقات مختلفة - كل ذلك وفقًا للرغبة في الحصول على فصل مثالي في أقل وقت ممكن.

في عملية الإذابة متساوية التركيز، لا يتغير ترتيب الاحتفاظ بتغير أبعاد العمود (الطول والقطر الداخلي)، أي أن القمم تخرج بنفس الترتيب. أما في عملية الإذابة المتدرجة، فقد يتغير ترتيب الإخراج بتغير الأبعاد أو معدل التدفق، إذا تم تصغيرها أو تكبيرها وفقًا للتغير ^{[ 43 ].}

ينشأ المحرك الأساسي في كروماتوغرافيا الطور المعكوس من الترتيب العالي لبنية الماء. ويتمثل دور المكون العضوي في الطور المتحرك في تقليل هذا الترتيب العالي، وبالتالي تقليل قوة التثبيط التي يُحدثها المكون المائي.

حدود

نظري

تنطبق نظرية الكروماتوغرافيا العامة على HPLC. ^{[ 44 ]} هذه النظرية هي الأساس لاختبارات ملاءمة النظام في دستور الأدوية الأمريكي ، ^{[ 45 ]} وهي مجموعة من المعايير الكمية لمدى ملاءمة نظام HPLC للتحليل المطلوب في أي خطوة منه.

تُمثَّل هذه العلاقة أيضًا بعامل معياري عديم الوحدات يُعرف بمعامل الاحتفاظ ، أو مُعامل الاحتفاظ، وهو قياس تجريبي لنسبة السعة، كما هو موضح في شكل معايير الأداء. يُمثل t _R زمن احتفاظ المكون المحدد، بينما يُمثل t ₀ الزمن اللازم لخروج مادة غير محتجزة من النظام دون أي احتفاظ، ولذلك يُسمى زمن الفراغ.

يتم استخدام النسبة بين عوامل الاحتفاظ، k'، لكل قمتين متجاورتين في الكروماتوجرام في تقييم درجة الفصل بينهما، وتسمى عامل الانتقائية ، α، كما هو موضح في الرسم البياني لمعايير الأداء.

تم تطوير معيار عدد الصفائح N لقياس كفاءة النظام في ظروف متساوية التركيز، أي عندما يكون تركيب الطور المتحرك ثابتًا طوال عملية الفصل. أما في ظروف التدرج، حيث يتغير تركيب الطور المتحرك مع مرور الوقت أثناء عملية الفصل الكروماتوغرافي، فمن الأنسب استخدام معيار سعة الذروة P _c لقياس كفاءة النظام. ^{[ 46 ]} يُعرَّف مفهوم سعة الذروة في الكروماتوغرافيا بأنه عدد الذروات التي يمكن فصلها ضمن نافذة احتجاز محددة مسبقًا بمعامل فصل معين، عادةً ما يكون ~1. ويمكن أيضًا تصوره على أنه زمن التشغيل مُقاسًا بمتوسط عرض الذروات. يوضح الشكل الخاص بمعايير الأداء المعادلة. في هذه المعادلة، يُمثل tg زمن التدرج، بينما يُمثل w(ave) متوسط عرض الذروات عند القاعدة.

تُستمدّ المعايير بشكل أساسي من مجموعتين من نظريات الكروماتوغرافيا: نظرية الصفائح (كجزء من كروماتوغرافيا التوزيع )، ونظرية معدل الكروماتوغرافيا/ معادلة فان ديمتر . وبالطبع، يمكن تطبيقها عمليًا من خلال تحليل مخططات كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC)، مع العلم أن نظرية المعدل تُعتبر النظرية الأكثر دقة.

تُشابه هذه المعايير حساب عامل الاحتفاظ في فصل الكروماتوغرافيا الورقية ، لكنها تصف مدى كفاءة فصل كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) لمزيج إلى مكونين أو أكثر، يتم الكشف عنهما على شكل قمم (حزم) في الكروماتوغرام. وتشمل معايير HPLC: عامل الكفاءة ( N )، وعامل الاحتفاظ (كابا برايم)، وعامل الفصل (ألفا). وتُمثل هذه العوامل مجتمعةً متغيرات في معادلة الفصل، التي تصف مدى جودة فصل قمم مكونين أو تداخلها. وتُستخدم هذه المعايير في الغالب لوصف عمليات الفصل في الطور العكسي والطور العادي في HPLC، لأن هذه العمليات عادةً ما تكون أكثر دقةً من غيرها من أنماط HPLC ( مثل التبادل الأيوني والاستبعاد الحجمي).

حجم الفراغ هو مقدار المساحة داخل العمود التي يشغلها المذيب. وهو المساحة الموجودة داخل العمود خارج مادة التعبئة الداخلية. يُقاس حجم الفراغ على الكروماتوغرام كأول قمة مكون يتم رصدها، والتي عادةً ما تكون المذيب الموجود في خليط العينة؛ من الناحية المثالية، يتدفق مذيب العينة عبر العمود دون التفاعل معه، ولكنه يظل قابلاً للكشف عنه بشكل منفصل عن مذيب HPLC. يُستخدم حجم الفراغ كعامل تصحيح.

يقيس عامل الكفاءة ( N ) عمليًا مدى وضوح قمم المكونات في الكروماتوجرام، كنسبة مساحة قمة المكون (زمن الاحتفاظ) إلى عرض القمة عند أوسع نقطة لها (عند خط الأساس). تشير القمم الطويلة والحادة والضيقة نسبيًا إلى أن طريقة الفصل قد أزالت المكون بكفاءة من الخليط؛ أي بكفاءة عالية. تعتمد الكفاءة بشكل كبير على عمود HPLC وطريقة HPLC المستخدمة. عامل الكفاءة مرادف لرقم الصفائح، أو "عدد الصفائح النظرية".

يقيس عامل الاحتفاظ ( كابا برايم ) مدة بقاء أحد مكونات الخليط ملتصقًا بالعمود، ويُقاس ذلك بمساحة المنطقة أسفل منحنى قمته في مخطط الكروماتوغرافيا (لأن مخططات كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء تعتمد على الزمن). لكل قمة في مخطط الكروماتوغرافيا عامل احتفاظ خاص بها ( مثلًا ، كابا 1 لعامل احتفاظ القمة الأولى). ويمكن تصحيح هذا العامل باستخدام حجم الفراغ في العمود.

معامل الفصل ( ألفا ) هو مقارنة نسبية لمدى جودة فصل مكونين متجاورين في الخليط ( أي ، نطاقين متجاورين على الكروماتوجرام). يُعرَّف هذا المعامل كنسبة بين معاملات الاحتفاظ لزوج من قمم الكروماتوجرام المتجاورة، ويمكن تصحيحه أيضًا بحجم الفراغ في العمود. كلما زادت قيمة معامل الفصل عن 1.0، كان الفصل أفضل، حتى حوالي 2.0، وبعدها قد لا تكون هناك حاجة إلى طريقة HPLC للفصل. تربط معادلات الفصل بين العوامل الثلاثة بحيث تُحسِّن الكفاءة العالية ومعاملات الفصل فصل قمم المكونات في فصل HPLC.

القطر الداخلي

يُعدّ القطر الداخلي لعمود كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) معيارًا هامًا. ^{[ 47 ]} إذ يُمكن أن يؤثر على استجابة الكشف عند تقليله نتيجةً لانخفاض الانتشار الجانبي لحزمة المذاب. كما يُمكن أن يؤثر على انتقائية الفصل، عندما لا يتم تعديل معدل التدفق وحجم الحقن بما يتناسب مع القطر الأصغر أو الأكبر المستخدم، سواءً في الوضع المتساوي التركيز أو الوضع المتدرج. ^{[ 48 ]} ويُحدد القطر الداخلي كمية المادة المراد تحليلها التي يُمكن تحميلها على العمود. تُستخدم الأعمدة ذات الأقطار الأكبر عادةً في التطبيقات التحضيرية، مثل تنقية المنتجات الدوائية لاستخدامها لاحقًا. ^{[ 49 ]} وقد أظهرت الأعمدة ذات الأقطار الداخلية المنخفضة حساسيةً مُحسّنة واستهلاكًا أقل للمذيبات في كروماتوغرافيا السائل فائق الأداء (UHPLC) الحديثة. ^{[ 50 ]}

تُستخدم الأعمدة ذات القطر الداخلي الأكبر (أكثر من 10 مم) لتنقية كميات قابلة للاستخدام من المواد نظرًا لقدرتها الكبيرة على التحميل.

تُعدّ الأعمدة ذات المقياس التحليلي (4.6 مم) النوع الأكثر شيوعًا من الأعمدة، على الرغم من أن الأعمدة الأضيق تكتسب شعبية متزايدة. ^{[ 50 ]} تُستخدم هذه الأعمدة في التحليل الكمي التقليدي للعينات، وغالبًا ما تستخدم كاشف امتصاص الأشعة فوق البنفسجية والمرئية .

تُستخدم الأعمدة ذات القطر الضيق (1-2 مم) في التطبيقات التي تتطلب حساسية أعلى، سواء باستخدام كواشف الأشعة فوق البنفسجية والمرئية الخاصة، أو الكشف الفلوري ، أو طرق الكشف الأخرى مثل كروماتوغرافيا السائل-مطياف الكتلة.

تُستخدم الأعمدة الشعرية (أقل من 0.3 مم) بشكل حصري تقريبًا مع وسائل الكشف البديلة مثل مطياف الكتلة . وعادةً ما تُصنع من أنابيب شعرية من السيليكا المنصهرة ، بدلاً من أنابيب الفولاذ المقاوم للصدأ التي تستخدمها الأعمدة الأكبر حجمًا.

حجم الجسيمات

تُجرى معظم عمليات الفصل الكروماتوغرافي السائل عالي الأداء (HPLC) التقليدية باستخدام طور ثابت مُلصق بالسطح الخارجي لجزيئات السيليكا الكروية الصغيرة (خرزات متناهية الصغر). تأتي هذه الجزيئات بأحجام متنوعة، وتُعد الخرزات التي يبلغ قطرها 5 ميكرومتر الأكثر شيوعًا. توفر الجزيئات الأصغر عمومًا مساحة سطح أكبر وفصلًا أفضل، ولكن الضغط المطلوب للحصول على السرعة الخطية المثلى يزداد عكسيًا مع مربع قطر الجزيء. ^{[ 51 ]}^{[ 52 ]}^{[ 53 ]}

وفقًا للمعادلات ^{[ 54 ]} الخاصة بسرعة العمود وكفاءته وضغطه الخلفي ، فإن تقليل قطر الجسيمات إلى النصف مع الحفاظ على حجم العمود نفسه، سيؤدي إلى مضاعفة سرعة العمود وكفاءته، ولكنه سيزيد الضغط الخلفي أربعة أضعاف. كما أن استخدام الجسيمات الصغيرة في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) يقلل من اتساع الخط. ^{[ 55 ]} تُستخدم الجسيمات الأكبر حجمًا في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء التحضيرية (بأقطار أعمدة تتراوح من 5 سم إلى أكثر من 30 سم) وفي تطبيقات أخرى غير كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء، مثل استخلاص الطور الصلب .

حجم المسام

تتميز العديد من الأطوار الثابتة بمساميتها لتوفير مساحة سطح أكبر. توفر المسامات الصغيرة مساحة سطح أكبر، بينما تتميز المسامات الأكبر حجماً بحركية أفضل، خاصةً بالنسبة للمواد التحليلية الأكبر حجماً. على سبيل المثال، قد يدخل بروتين أصغر قليلاً من حجم المسام إلى داخلها، ولكنه لا يخرج منها بسهولة.

ضغط المضخة

تختلف المضخات في قدرتها على تحمل الضغط، ولكن يُقاس أداؤها بقدرتها على توفير معدل تدفق حجمي ثابت وقابل للتكرار . قد يصل الضغط إلى 60 ميجا باسكال (6000 رطل/بوصة ^مربعة )، أو ما يعادل 600 ضغط جوي تقريبًا. وقد طُوّرت أنظمة كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) الحديثة للعمل عند ضغوط أعلى بكثير، وبالتالي فهي قادرة على استخدام أحجام جسيمات أصغر بكثير في الأعمدة (<2 ميكرومتر). يمكن لأنظمة "كروماتوغرافيا السائل فائقة الأداء" أو UHPLC، والتي تُعرف أيضًا باسم أنظمة كروماتوغرافيا الضغط العالي جدًا، ^[⁵⁶^] العمل عند ضغوط تصل إلى 120 ميجا باسكال (17405 رطل/بوصة ^مربعة )، أو ما يعادل 1200 ضغط جوي تقريبًا. ^[⁵⁷^] يُعد مصطلح "UPLC" ^[⁵⁸^] علامة تجارية لشركة Waters Corporation ، ولكنه يُستخدم أحيانًا للإشارة إلى تقنية UHPLC الأكثر عمومية.

أجهزة الكشف

تنقسم كواشف كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) إلى فئتين رئيسيتين: كواشف عامة وكواشف انتقائية. تقيس الكواشف العامة عادةً خاصيةً عامة ( مثل معامل الانكسار ) عن طريق قياس الفرق في الخاصية الفيزيائية بين الطور المتحرك والطور المتحرك مع المذاب، بينما تقيس الكواشف الانتقائية خاصيةً للمذاب ( مثل امتصاص الأشعة فوق البنفسجية والمرئية ) من خلال الاستجابة للخاصية الفيزيائية أو الكيميائية للمذاب. ^{[ 59 ]} تستخدم كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) في الغالب كاشف امتصاص الأشعة فوق البنفسجية والمرئية ؛ ومع ذلك، يمكن استخدام مجموعة واسعة من كواشف الكروماتوغرافيا الأخرى. يُعد كاشف الهباء الجوي المشحون (CAD) كاشفًا عامًا يُكمل كشف امتصاص الأشعة فوق البنفسجية والمرئية . ومن أنواع الكواشف الشائعة الاستخدام كواشف معامل الانكسار، التي توفر قراءات عن طريق قياس التغيرات في معامل انكسار المذيب أثناء مروره عبر خلية التدفق. في بعض الحالات، من الممكن استخدام كواشف متعددة، على سبيل المثال، تجمع كروماتوغرافيا السائل-مطياف الكتلة (LCMS) عادةً بين كاشف الأشعة فوق البنفسجية والمرئية ومطياف الكتلة.

عند استخدام جهاز HPLC-ECD مع كاشف كهروكيميائي (ECD)، فإنه يكشف بشكل انتقائي عن النواقل العصبية مثل: النورأدرينالين ، والدوبامين ، والسيروتونين ، والغلوتامات ، وحمض غاما -أمينوبيوتيريك (GABA)، والأستيل كولين، وغيرها، وذلك في تطبيقات أبحاث التحليل الكيميائي العصبي. ^{[ 60 ]} ويكشف جهاز HPLC-ECD عن النواقل العصبية بتركيزات تصل إلى نطاق الفيمتومولار . وتشمل الطرق الأخرى للكشف عن النواقل العصبية: كروماتوغرافيا السائل-مطياف الكتلة، واختبار ELISA، أو المقايسات المناعية الإشعاعية.

أخذ العينات التلقائي

يمكن حقن أعداد كبيرة من العينات تلقائيًا في نظام كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) باستخدام أجهزة أخذ العينات الآلية. إضافةً إلى ذلك، تتميز هذه الأجهزة بحجم وتقنية حقن متطابقين تمامًا في كل مرة، مما يوفر دقة عالية في حجم الحقن. كما يُمكن تحريك العينة داخل حجرة أخذ العينات، مما يُعزز تجانسها. ^{[ 61 ]}

التطبيقات

تصنيع

تُستخدم تقنية الاستشراب السائل عالي الأداء (HPLC) على نطاق واسع في العلوم المخبرية والسريرية. وهي تقنية شائعة الاستخدام في تطوير المستحضرات الصيدلانية، نظرًا لكونها وسيلة موثوقة للحصول على نقاء المنتج وضمانه. ^{[ 62 ]} ورغم قدرة HPLC على إنتاج منتجات عالية الجودة (نقية) للغاية، إلا أنها ليست دائمًا الطريقة الأساسية المستخدمة في إنتاج المواد الدوائية الخام. ^{[ 63 ]} ووفقًا لدستور الأدوية الأوروبي، تُستخدم HPLC في 15.5% فقط من عمليات التخليق الدوائي. ^{[ 64 ]} بينما تُستخدم في 44% من عمليات التخليق الدوائي في دستور الأدوية الأمريكي. ^{[ 65 ]} وقد يُعزى ذلك إلى اختلاف القيود المالية والزمنية، إذ تُعدّ HPLC تقنية مكلفة عند استخدامها على نطاق واسع. وللأسف، فإن الزيادة في الخصوصية والدقة والضبط التي توفرها HPLC تُقابلها زيادة في التكلفة.

قانوني

تُستخدم هذه التقنية أيضًا للكشف عن المخدرات غير المشروعة في عينات متنوعة. ^{[ 66 ]} وكانت الطريقة الأكثر شيوعًا للكشف عن المخدرات هي المقايسة المناعية . ^{[ 67 ]} وتتميز هذه الطريقة بسهولة استخدامها. إلا أن هذه السهولة تأتي على حساب الدقة والشمولية في الكشف عن نطاق واسع من المخدرات، ولذلك، تم استخدام كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) كطريقة بديلة. وبما أن HPLC طريقة لتحديد (وربما زيادة) نقاء المخدرات، فإن استخدامها وحده في تقييم تركيزاتها لم يكن كافيًا. لذا، غالبًا ما تُجرى HPLC في هذا السياق بالتزامن مع مطياف الكتلة . ^{[ 68 ]} ويُغني استخدام كروماتوغرافيا السائل-مطياف الكتلة (LC-MS) بدلًا من كروماتوغرافيا الغاز-مطياف الكتلة (GC-MS) عن الحاجة إلى الاشتقاق باستخدام عوامل الأستلة أو الألكلة، والتي قد تُشكل خطوة إضافية مُرهقة. ^{[ 69 ]} استُخدمت تقنية LC-MS للكشف عن مجموعة متنوعة من المواد، مثل المنشطات، ومستقلبات الأدوية، ومقترنات الغلوكورونيد، والأمفيتامينات، والمواد الأفيونية، والكوكايين، والبنزوديازيبينات، والكيتامين، وLSD، والقنب، والمبيدات الحشرية. ^{[ 70 ]}^{[ 71 ]} يقلل إجراء التحليل الكروماتوغرافي السائل عالي الأداء (HPLC) بالتزامن مع قياس الطيف الكتلي من الحاجة المُلحة لتوحيد إجراءات تجارب HPLC.

بحث

يمكن إجراء فحوصات مماثلة لأغراض البحث، للكشف عن تركيزات المرشحين السريريين المحتملين مثل مضادات الفطريات وأدوية الربو. ^{[ 72 ]} من الواضح أن هذه التقنية مفيدة في رصد أنواع متعددة في العينات المجمعة، ولكنها تتطلب استخدام محاليل قياسية عند البحث عن معلومات حول هوية الأنواع. تُستخدم هذه التقنية كطريقة لتأكيد نتائج تفاعلات التخليق، حيث أن النقاء ضروري في هذا النوع من الأبحاث. ومع ذلك، لا يزال قياس الطيف الكتلي الطريقة الأكثر موثوقية لتحديد الأنواع.

العلوم الطبية والصحية

في التطبيقات الطبية، يُستخدم مطياف الكتلة (MS) عادةً ككاشف في التحليل الكروماتوغرافي السائل عالي الأداء (HPLC)، ولذلك تُسمى هذه التقنية LC-MS ^{[ 73 ]} أو LC-MS/MS اختصارًا لـ MS الترادفي، حيث يتم تشغيل نوعين من مطياف الكتلة بالتتابع. ^{[ 74 ]} وعندما يكون جهاز HPLC متصلًا بأكثر من كاشف، يُطلق عليه نظام LC مُدمج. تُعد التطبيقات الصيدلانية ^[⁷⁵^] من أبرز مستخدمي تقنيات HPLC وLC-MS وLC-MS/MS. ^[⁷⁶^] ويشمل ذلك تطوير الأدوية ^[⁷⁷^] وعلم الأدوية، وهو الدراسة العلمية لتأثيرات الأدوية والمواد الكيميائية على الكائنات الحية، ^[⁷⁸^] والطب الشخصي، ^[⁷⁹^] والصحة العامة ^[⁸⁰^]^[⁸¹^] والتشخيص. ^[⁸²^] في حين أن البول هو الوسط الأكثر شيوعًا لتحليل تركيزات الأدوية، فإن مصل الدم هو العينة التي تُجمع لمعظم التحليلات الطبية باستخدام HPLC. ^[⁸³^] من أهم أدوار تقنيتي LC-MS وLC-MS/MS في المختبرات السريرية فحص حديثي الولادة (NBS) للكشف عن الاضطرابات الأيضية ^[⁸⁴^] والتشخيصات اللاحقة. ^[⁸⁵^]^[⁸⁶^] تأتي عينات الرضع على شكل بقع دم جافة (DBS)، ^[⁸⁷^] وهي سهلة التحضير والنقل، مما يتيح تشخيصًا آمنًا ومتاحًا، محليًا وعالميًا.

تم اختبار طرق أخرى للكشف عن الجزيئات المفيدة في الدراسات السريرية مقارنةً بتقنية كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC)، وتحديدًا المقايسات المناعية. في أحد الأمثلة على ذلك، قورنت مقايسات ارتباط البروتين التنافسية (CPBA) بتقنية HPLC من حيث الحساسية في الكشف عن فيتامين د. ونظرًا لفائدة هذه المقايسات في تشخيص نقص فيتامين د لدى الأطفال، فقد وُجد أن حساسيتها ونوعيتها لا تتجاوز 40% و60% على التوالي من قدرة تقنية HPLC. ^{[ 88 ]} وعلى الرغم من ارتفاع تكلفة تقنية HPLC، إلا أن دقتها تكاد تكون لا تُضاهى.

انظر أيضاً

مراجع

↑ كازاكيفيتش، يوري؛ لوبروتو، روزاريو، محرران. (2007). كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء لعلماء الصيدلة . هوبوكين، نيوجيرسي: وايلي-إنترساينس. ISBN 978-0-471-68162-5.
1 2 علي، عبدو حسين (20 يونيو 2022). "الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC): مراجعة" . حوليات التقدم في الكيمياء . 6 (1): 010–020 . doi : 10.29328/journal.aac.1001026 (غير نشط في 29 يناير 2026).{{cite journal}}: صيانة CS1: تم تعطيل DOI اعتبارًا من يناير 2026 ( رابط )
↑ ليفين، شولاميت (يناير 2004). "الأطوار الثابتة ذات الطور المعكوس في العلوم الصيدلانية" . مجلة الكروماتوغرافيا السائلة والتقنيات ذات الصلة . 27 ( 7-9 ): 1353-1376 . doi : 10.1081/JLC-120030606 . ISSN 1082-6076 . S2CID 97490509 .
↑ جيربر، ف.؛ كرومن، م.؛ بوتجيتر، هـ.؛ روث، أ.؛ سيفرين، س.؛ سبوندلين، س. (2004). "الجوانب العملية للكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء ذات الطور العكسي السريع باستخدام أعمدة معبأة بجزيئات 3 ميكرومتر وأعمدة متجانسة في تطوير وإنتاج المستحضرات الصيدلانية وفقًا لممارسات التصنيع الجيدة الحالية". مجلة الكروماتوغرافيا أ . 1036 (2): 127-133 . doi : 10.1016/j.chroma.2004.02.056 . PMID 15146913 .
↑ باين، شيرلي؛ كارلين، ميشيل (2017). التطبيقات الجنائية للكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء ( الطبعة الأولى). مطبعة سي آر سي. رقم ISBN 978-0-429-25196-2.
↑ سيجر، كريستوف؛ سالزمان، ليندا (1 أغسطس 2020). "بعد عقد آخر: أصبح التحليل الطيفي الكتلي المقترن بالكروماتوغرافيا السائلة (LC-MS/MS) إجراءً روتينيًا في التشخيص السريري" . الكيمياء الحيوية السريرية . تطورات وتطبيقات قياس الطيف الكتلي في الطب المخبري. 82 : 2-11 . doi : 10.1016/j.clinbiochem.2020.03.004 . ISSN 0009-9120 . PMID 32188572. S2CID 213186669 .
1 2 "الكروماتوغرافيا" . web.njit.edu . تم الاطلاع عليه في 5 أغسطس 2024 .
↑ أونغر، ك.ك.، محرر (1 يناير 1979)، الفصل 5: أعمدة السيليكا - إجراءات التعبئة وخصائص الأداء ، مجلة مكتبة الكروماتوغرافيا، المجلد 16، إلسيفير، الصفحات 169-186 ، doi : 10.1016/S0301-4770(08)60809-X ، ISBN 978-0-444-41683-4تم الاطلاع عليه بتاريخ 5 أغسطس 2024
↑ شو، يان؛ كاو، تشينغ؛ سفيك، فرانتيسك؛ فريشيه، جان إم جيه (15 أبريل 2010). " عمود بوليمر متجانس مسامي مع جسيمات نانوية ذهبية مرتبطة بالسطح لالتقاط وفصل الببتيدات المحتوية على السيستين" . الكيمياء التحليلية . 82 (8): 3352-3358 . Bibcode : 2010AnaCh..82.3352X . doi : 10.1021/ac1002646 . ISSN 0003-2700 . PMC 2875083. PMID 20302345 .
↑ "التفاعل الجزيئي للطور الثابت في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء" . www.imtakt.com . تم الاطلاع عليه بتاريخ 8 أغسطس 2024 .
^ كادليكوفا، زوزانا؛ كاليكوفا، كفيتا؛ فولبريشتوفا، دينيسا؛ تيساروفا، إيفا؛ جيلار ، مارتن (16 أغسطس 2020). "طريقة تقييم التفاعلات الأيونية في التحليل الكروماتوغرافي السائل" . مجلة اللوني أ . 1625 461301. دوى : 10.1016/j.chroma.2020.461301 . ISSN 0021-9673 . بميد 32709344 .
↑ دونغ، مايكل (2018). "عشرة استنتاجات منطقية في التحليل الصيدلاني باستخدام كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء" . LCGC Europe . LCGC Europe-08-01-2018. 31 (8): 432– 436.
↑ سنايدر، لويد ر.؛ كيركلاند، جوزيف ج.؛ جلايتش، جوزيف ل. (2012). تطوير طرق HPLC العملية ( الطبعة الثانية). جون وايلي وأولاده.
↑ ماكماستر، مارفن سي. (2007). HPLC: دليل المستخدم العملي ( الطبعة الثانية). هوبوكين، نيوجيرسي: وايلي-إنترساينس. ISBN 978-0-471-75401-5.
↑ هاناي، توشيهيكو؛ هاناي، ت. (1999). HPLC: دليل عملي . سلسلة دراسات الكروماتوغرافيا التابعة للجمعية الملكية للكيمياء. كامبريدج: الجمعية الملكية للكيمياء. ISBN 978-0-85404-515-0.
↑ كوشكون، أوزليم (2016). " تقنيات الفصل: الكروماتوغرافيا" . عيادات إسطنبول الشمالية . 3 (2): 156-160 . doi : 10.14744/nci.2016.32757 . ISSN 2536-4553 . PMC 5206469. PMID 28058406 .
↑ "كيف تعمل أجهزة الكشف في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء - الولايات المتحدة" . www.thermofisher.com . تاريخ الاطلاع: 29 يناير 2026 .
^ نيكولين، برانكو؛ اماموفيتش، بيلما؛ ميدانهوديتش-فوك، سايرا؛ رصين ، ميروسلاف (20 مايو 2004). "الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء في التحاليل الصيدلانية" . الجزيئات الحيوية والطب الحيوي . 4 (2): 5– 9. دوي : 10.17305/bjbms.2004.3405 . ISSN 2831-090X . بمك 7250120 . بميد 15629016 .
↑ هايدورن، مايكل (2016). "تقنية أكثر مرونة لضبط درجة حرارة العمود في نقل طريقة الكروماتوغرافيا السائلة" (ملف PDF) . شركة ثيرمو فيشر العلمية (ورقة بيضاء).
1 2 كارغر، باري ل. (1997). "HPLC: منظورات مبكرة وحديثة". مجلة التعليم الكيميائي . 74 (1): 45. Bibcode : 1997JChEd..74...45K . doi : 10.1021/ed074p45 .
1 2 3 4 5 6 هنري، ريتشارد أ. (1 فبراير 2009) "الأيام الأولى لتقنية HPLC في شركة دوبونت" مؤرشف في 1 أغسطس 2020 على موقع Wayback Machine . مجلة الكروماتوغرافيا على الإنترنت. شركة أفانستار للاتصالات.
↑ جيدينجز، كالفن (1965). ديناميكيات الكروماتوغرافيا: المبادئ والنظرية . مارسيل ديكر.
1 2 ليفين، شولاميت (2017). غرينبيرغ، نيلو؛ كار، بيتر دبليو (محررون). الأعمدة ذات اللب الصلب أو الأعمدة المسامية بالكامل في كروماتوغرافيا السائل فائق الأداء - أي طريق نسلك لتحسين كفاءة الفصل؟ . التقدم في الكروماتوغرافيا. المجلد 55 (الطبعة 1 ). بوكا راتون: مطبعة سي آر سي. الصفحات 185-203 . ISBN 978-1-315-15807-5.
↑ إيلر، آر كيه (1979) كيمياء السيليكا . جون وايلي وأولاده. نيويورك.
↑ كارغر، بي إل؛ بيري، إل في (1971). "الفصل السريع للستيرويدات باستخدام كروماتوغرافيا السائل على أعمدة محملة بكثافة عالية بالطور الثابت" . الكيمياء السريرية . 17 (8): 757-64 . doi : 10.1093/clinchem/17.8.757 . PMID 4254537 .
↑ نوي، أوفه د. (1997). أعمدة HPLC: النظرية والتكنولوجيا والتطبيق . نيويورك، نيويورك: وايلي في سي إتش. ISBN 978-0-471-19037-0.
↑ جيدينجز، ج. كالفن (1965) ديناميكيات الكروماتوغرافيا، الجزء الأول: المبادئ والنظرية . مارسيل ديكر، نيويورك. ص 281.
↑ إيتري، سي. (2001). "معالم بارزة في علم الكروماتوغرافيا: نشأة كروماتوغرافيا التقسيم" (ملف PDF) . LCGC . 19 (5): 506-512 . مؤرشف من الأصل (ملف PDF) في 4 مارس 2016. تم الاطلاع عليه في 26 فبراير 2016 .
↑ مارتن، أ. ج. ب.؛ سينج، ر. ل. م. (1941). "فصل الأحماض الأمينية الأحادية العليا بالاستخلاص السائل-السائل بالتيار المعاكس: تركيب الأحماض الأمينية في الصوف" . مجلة الكيمياء الحيوية . 35 ( 1-2 ): 91-121 . doi : 10.1042/bj0350091 . PMC 1265473. PMID 16747393 .
↑ ليندسي، س.؛ كيلي، د. (1987). كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء . وايلي. OSTI 7013902 . من مراجعة Hung, LB; Parcher, JF; Shores, JC; Ward, EH (1988). "الأساس النظري والتجريبي لبرمجة تغطية السطح في كروماتوغرافيا الغاز-الصلب باستخدام غاز حامل قابل للامتصاص". مجلة الجمعية الكيميائية الأمريكية 110 (11): 1090-1096 . Bibcode : 1988AnaCh..60.1090H . doi : 10.1021/ac00162a003 .
↑ كروماتوغرافيا الإزاحة . Sacheminc.com. تم الاطلاع عليه بتاريخ 7 يونيو 2011. مؤرشف بتاريخ 15 سبتمبر 2008 في أرشيف الإنترنت (Wayback Machine).
^ لوبروتو، روزاريو؛ كازاكيفيتش، يوري (22 يناير 2007)، "HPLC ذو المرحلة العكسية" ، في كازاكيفيتش، يوري؛ LoBrutto، Rosario (eds.)، HPLC لعلماء الصيدلة (1 ed.)، Wiley، pp. 139– 239، doi : 10.1002/9780470087954.ch4 ، ISBN 978-0-471-68162-5تم الاطلاع عليه بتاريخ 10 أكتوبر 2023
↑ كازاكيفيتش، يوري؛ لوبروتو، روزاريو (22 يناير 2007)، "كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي" ، في كازاكيفيتش، يوري؛ لوبروتو، روزاريو (محرران)، كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء لعلماء الصيدلة ( الطبعة الأولى)، وايلي، الصفحات 263-279 ، doi : 10.1002/9780470087954.ch6 ، ISBN 978-0-471-68162-5تم الاطلاع عليه بتاريخ 10 أكتوبر 2023
↑ مولوي، باربرا؛ هيث، آلان؛ شرايفر، زاكاري؛ جاميسون، فابيان؛ الحكيم، علي؛ موريس، تينا س.؛ سزايك، أنيتا ي. (1 أغسطس 2014). "طرق دستور الأدوية الأمريكي لتحليل الهيبارين: التحديد الكروماتوغرافي لتوزيعات الوزن الجزيئي لهيبارين الصوديوم". الكيمياء التحليلية والكيمياء الحيوية التحليلية . 406 (20): 4815-4823 . doi : 10.1007/s00216-014-7940-3 . hdl : 1721.1/104914 . ISSN 1618-2650 . PMID 24958344. S2CID 492085 .
^ فريتز، جيمس س. جيردي، دوغلاس ت. (25 أبريل 2000). اللوني الأيوني (1 ed.). وايلي. دوى : 10.1002/9783527613243 . رقم ISBN 978-3-527-29914-0.
↑ تشانغ، تشنهوا؛ رودريغيز، إليوت؛ بي، كونغ؛ تشنغ، شيوي؛ سوريش، دودافينكاتانا؛ سوه، كيونغاه؛ لي، تشاو؛ السبعي، فوزي؛ حاج، ديفيد س. (2018). "الكروماتوغرافيا التقاربية عالية الأداء وطرق الفصل ذات الصلة لتحليل العوامل البيولوجية والصيدلانية" . المحلل . 143 ( 2): 374-391 . Bibcode : 2018Ana...143..374Z . doi : 10.1039/C7AN01469D . ISSN 1364-5528 . PMC 5768458. PMID 29200216 .
1 2 مكالي، ديفيد ف. (10 نوفمبر 2017). "فهم ومعالجة الفصل في كروماتوغرافيا التفاعل الهيدروفيلي السائل". مجلة الكروماتوغرافيا أ . 1523 : 49-71 . doi : 10.1016/j.chroma.2017.06.026 . ISSN 1873-3778 . PMID 28668366 .
1 2 بوسزيفسكي، بوغوسلاف؛ نوغا، سيلفيا (2012). "الكروماتوغرافيا السائلة للتفاعل المحب للماء (HILIC) - تقنية فصل فعالة" . الكيمياء التحليلية والكيمياء الحيوية التحليلية . 402 (1): 231-247 . Bibcode : 2012ABiCh.402..231B . doi : 10.1007/ s00216-011-5308-5 . ISSN 1618-2650 . PMC 3249561. PMID 21879300 .
↑ شيلينجر، آدم ب.؛ كار، بيتر و. (2006). "الكروماتوغرافيا متساوية التركيز والكروماتوغرافيا المتدرجة: مقارنة من حيث السرعة، وإمكانية تكرار الاحتفاظ، والقياس الكمي" . مجلة الكروماتوغرافيا أ . 1109 (2): 253-266 . doi : 10.1016/j.chroma.2006.01.047 . PMID 16460742. S2CID 26072994 .
↑ إيتري، إل إس؛ زلاتكيس، أ.، محرران (1979)، "تشابا هورفاث" ، مكتبة مجلة الكروماتوغرافيا ، 75 عامًا من الكروماتوغرافيا: حوار تاريخي، المجلد 17، إلسيفير، الصفحات 151-158 ، doi : 10.1016/s0301-4770(08)60645-4 ، ISBN 978-0-444-41754-1تم الاطلاع عليه بتاريخ 15 أكتوبر 2023
↑ سنايدر، لويد ر.؛ دولان، جون و. (2006). الإذابة المتدرجة عالية الأداء: التطبيق العملي لنموذج قوة المذيب الخطي . وايلي إنترساينس. ISBN 978-0-470-05551-9.
↑ شيلينجر، آدم ب.؛ كار، بيتر و. (2006). "الكروماتوغرافيا متساوية التركيز والكروماتوغرافيا المتدرجة: مقارنة من حيث السرعة، وإمكانية تكرار الاحتفاظ، والقياس الكمي" . مجلة الكروماتوغرافيا أ . المؤتمر الدولي التاسع عشر حول الفصل الحيوي على نطاق صغير. 1109 (2): 253-266 . doi : 10.1016/j.chroma.2006.01.047 . ISSN 0021-9673 . PMID 16460742. S2CID 26072994 .
↑ دولان، جون دبليو. (2014). "توسيع نطاق طريقة الكروماتوغرافيا السائلة، الجزء الثاني: الفصل بالتدرج". مجلة الكروماتوغرافيا السائلة والغازية في أمريكا الشمالية . 32 (3): 188-193 .
↑ مارتن، أ. ج. ب.؛ سينج، ر. ل. م. (1 ديسمبر 1941). "شكل جديد من الكروماتوجرام يستخدم طورين سائلين" . مجلة الكيمياء الحيوية . 35 (12): 1358-1368 . doi : 10.1042/bj0351358 . ISSN 0306-3283 . PMC 1265645. PMID 16747422 .
↑ 〈621〉 الكروماتوغرافيا (ملف PDF) ، هيئة دستور الأدوية الأمريكي، 1 ديسمبر 2022، doi : 10.31003/uspnf_m99380_06_01 ، تم الاطلاع عليه في 21 يناير 2025
↑ رين، ستيفن أ.س. (15 يونيو 2005). "السعة القصوى في كروماتوغرافيا السائل فائق الأداء المتدرجة (UPLC)" . مجلة التحليل الصيدلاني والحيوي . 38 (2): 337-343 . doi : 10.1016/j.jpba.2004.12.028 . ISSN 0731-7085 . PMID 15925228 .
↑ زيلينيانسكي، دورا؛ فيلينجر، أتيلا (1 أكتوبر 2020). "تأثير مكونات العمود على كفاءة كروماتوغرافيا السائل (LC)" . LCGC Europe . LCGC Europe-10-01-2020. 33 (10): 498–504 .
↑ دولان، جون (2014). "توسيع نطاق طريقة الكروماتوغرافيا السائلة، الجزء الثاني: الفصل بالتدرج" . مؤتمر الكروماتوغرافيا السائلة والغازية في أمريكا الشمالية . LCGC أمريكا الشمالية - 03-01-2014. 32 (3): 188-193 .
↑ جنسن، أولي إلفانغ؛ كيدال، ستيفن (1 مارس 2006). "استخدام التدفق الحجمي لتوسيع نطاق العمليات الكروماتوغرافية" . بيوفارم إنترناشونال . بيوفارم إنترناشونال-03-01-2006. 19 (3).
1 2 والتر، توماس هـ.؛ أندروز، ريتشارد و. (2014). "الابتكارات الحديثة في أعمدة وأجهزة كروماتوغرافيا السائل فائق الأداء" . اتجاهات في الكيمياء التحليلية . 63 : 14-20 . doi : 10.1016/j.trac.2014.07.016 . ISSN 0165-9936 .
↑ ماجورز، رونالد إي. (7 سبتمبر 2010) كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء سريعة وفائقة السرعة على جسيمات مسامية دون 2 ميكرومتر - إلى أين نتجه من هنا؟ - LC-GC Europe . Lcgceurope.com. تم الاطلاع عليه بتاريخ 7 يونيو 2011.
↑ شيانغ، ي.؛ ليو، ي.؛ لي، م. ل. (2006). "الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الضغط باستخدام درجة حرارة مرتفعة". مجلة الكروماتوغرافيا أ . 1104 ( 1-2 ): 198-202 . doi : 10.1016/j.chroma.2005.11.118 . PMID 16376355 .
↑ هورفاث، سي.؛ بريس، ب. أ.؛ ليبسكي، س. ر. (1967). "الكروماتوغرافيا السائلة السريعة. دراسة معايير التشغيل وفصل النيوكليوتيدات على مبادلات أيونية غشائية". الكيمياء التحليلية . 39 (12): 1422-1428 . Bibcode : 1967AnaCh..39.1422H . doi : 10.1021/ac60256a003 . PMID 6073805 .
↑ نغوين، داو ت.-ت.؛ غيلارم، ديفي؛ روداز، سيرج؛ فوتي، جان-لوك (2006). "التحليل السريع في كروماتوغرافيا السائل باستخدام حجم جسيمات صغير وضغط عالٍ" . مجلة علوم الفصل . 29 (12): 1836-1848 . doi : 10.1002/jssc.200600189 . ISSN 1615-9306 . PMID 16970187 .
↑ غريتي، فابريس؛ غيوشون، جورج (2013). "معادلة فان ديمتر: الافتراضات والحدود والتعديل على كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء الحديثة" . مجلة الكروماتوغرافيا أ . 1302 : 1-13 . doi : 10.1016/j.chroma.2013.06.032 . PMID 23838304 .
↑ شيانغ، يانكياو؛ ليو، يانشنغ؛ لي، ميلتون ل. (2006). "الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الضغط باستخدام درجة حرارة مرتفعة". مجلة الكروماتوغرافيا أ . 1104 ( 1-2 ): 198-202 . doi : 10.1016/j.chroma.2005.11.118 . PMID 16376355 .
↑ مضخة إنفينيتي الرباعية 1290، مؤرشفة في 20 نوفمبر 2015 على موقع Wayback Machine . شركة Agilent
↑ ووترز. "العلامات التجارية: ووترز" . www.waters.com .
↑ ك. روباردز (1994). مبادئ وممارسات طرق الاستشراب الحديثة . حداد، بي آر، جاكسون، بي إي. أمستردام: إلسيفير/أكاديميك برس. ISBN 978-0-08-057178-2. OCLC 815471219 .
↑ "أساسيات الكشف الكهروكيميائي (ECD)" . شركة أموزا .
↑ ماركوفيتش، عمر؛ أوتيل، جيم؛ فيلدمان، أوبي؛ أوتو، سيبرين (2020). "جهاز آلي للتحريك المستمر أثناء أخذ العينات في أنظمة كروماتوغرافيا السائل" . مجلة الاتصالات الكيميائية . 3 (1): 180. Bibcode : 2020CmChe...3..180M . doi : 10.1038/s42004-020-00427-5 . PMC 9814086. PMID 36703458 .
↑ جيربر، فريدريك (مايو 2004). "الجوانب العملية للفصل الكروماتوغرافي السائل عالي الأداء ذي الطور العكسي السريع باستخدام أعمدة معبأة بجزيئات 3 ميكرومتر وأعمدة متجانسة في تطوير وإنتاج المستحضرات الصيدلانية وفقًا لممارسات التصنيع الجيدة الحالية". مجلة الكروماتوغرافيا . 1036 (2): 127-133 . doi : 10.1016/j.chroma.2004.02.056 . PMID 15146913 .
↑ صديقي، معصوم رضا؛ العثمان، زيد أ.؛ رحمن، نفيسور (2013). "التقنيات التحليلية في التحليل الصيدلاني: مراجعة" . المجلة العربية للكيمياء . 10 : S1409– S1421. doi : 10.1016/j.arabjc.2013.04.016 .
↑ دستور الأدوية الأوروبي ، 2002. الطبعة الرابعة، مجلس أوروبا، ستراسبورغ.
↑ دستور الأدوية الأمريكي ، 2004. الطبعة 27. مؤتمر دستور الأدوية الأمريكي، روكفيل، ماريلاند.
^ ميرون، جوزيبي م. تارتاليا، أنجيلا؛ روسي، ساندرا؛ سانتافينيري، فرانشيسكو؛ باسوتي، إليسا؛ دوفيديو، كريستيان؛ بونيلي، مارتينا؛ روساتو، إنريكا؛ دي جراتسيا، أوغو؛ لوكاتيلي، مارسيلو؛ سافيني ، فابيو (2021). "التحديد الكمي السريع LC-MS/MS للمواد غير المشروعة في العينات الصلبة والسائلة غير المعروفة المضبوطة" . الكيمياء التحليلية . 93 (49): 16308– 16313. بيب كود : 2021AnaCh..9316308M . دوى : 10.1021/acs.analchem.1c03310 . ISSN 0003-2700 . بمك 8674870 . PMID 34843645 .
↑ بيسكي، أماديو؛ روزنتال، موراي؛ ويست، روبرت؛ ويست، كاميرون؛ كروز، بريدجيت؛ ميكيل، تشارلز؛ ألمازان، بيرلا؛ لاتيشيف، سيرجي (1 يونيو 2010). "تقييم دقة التشخيص باستخدام كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة الترادفي مقابل اختبار الأدوية المناعي في مرضى الألم" . طبيب الألم . 13 (3): 273-281 . PMID 20495592 .
↑ تساي، آي-لين؛ وينغ، تي-آي؛ تسينغ، يوفينغ جيه؛ تان، هابي كوي-لوك؛ صن، شياو-جو؛ كو، تشينغ-هوا (1 ديسمبر 2013). "فحص وتأكيد 62 نوعًا من المخدرات ومستقلباتها في البول باستخدام كروماتوغرافيا السائل فائق الأداء - مطياف الكتلة رباعي الأقطاب ذي زمن الطيران" . مجلة علم السموم التحليلي . 37 (9): 642-651 . doi : 10.1093/jat/bkt083 . PMID 24084874 .
↑ واينمان، دبليو؛ رينز، إم؛ فوغت، إس؛ بولاك، إس (1 يناير 2000). "الاستخلاص الآلي في الطور الصلب والاشتقاق على مرحلتين للتحليل المتزامن للأدوية الأساسية غير المشروعة في مصل الدم بواسطة كروماتوغرافيا الغاز/مطياف الكتلة". المجلة الدولية للطب الشرعي . 113 (4): 229-235 . doi : 10.1007/s004149900098 . PMID 10929239. S2CID 20451772 .
^ كولمونين، مارجو؛ لينونين، أنتي؛ بيلاندر، آنا؛ أوجانبيرا، إيلكا (28 فبراير 2007). “طريقة فحص عامة لعوامل المنشطات في البول البشري عن طريق استخلاص الطور الصلب واللوني السائل/قياس الطيف الكتلي في وقت الرحلة”. أناليتيكا كيميكا أكتا . 585 (1): 94– 102. بيب كود : 2007AcAC..585...94K . دوى : 10.1016/j.aca.2006.12.028 . بميد 17386652 .
^ بيلاندر ، آنا. أوجانبيرا، إيلكا؛ لاكس، سوفي؛ راسانين، إيلبو؛ فوري، إركي (1 نوفمبر 2003). “الفحص السمي مع تحديد المستقلبات المستندة إلى الصيغة عن طريق التحليل اللوني السائل/قياس الطيف الكتلي في وقت الرحلة”. الكيمياء التحليلية . 75 (21): 5710–5718 . بيب كود : 2003AnaCh..75.5710P . دوى : 10.1021/ac030162o . بميد 14588010 .
↑ نوبيليس، ميلان؛ بور، ميلان؛ سينيل، بيتر؛ بافليك، يان؛ كونيس، جيري؛ فوبرسالوفا، ماري؛ كولاروفا، لينكا؛ هولكابيك، ميخال (15 يونيو 2007). "التحليل الأيضي لدواء مضاد للفطريات محتمل، 3-(4-بروموفينيل)-5-أسيتوكسي ميثيل-2،5-ثنائي هيدروفوران-2-ون، في بول الفئران باستخدام كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء مع كاشف مصفوفة ثنائية ضوئية فوق بنفسجية وكاشف مطياف الكتلة". مجلة الكروماتوغرافيا ب . 853 ( 1-2 ): 10-19 . doi : 10.1016/j.jchromb.2007.02.045 . PMID 17400036 .
↑ قو، جاتين؛ باتيل، كومار؛ شاه، ديرين (2016). "تطبيق LC-MS" . فارماتوتور .
↑ تالام، أنيل كومار؛ ألاباتي، ساهيثي؛ نولي، موهانا فامسي (2023). "مراجعة حول تطوير وتوثيق الطرق التحليلية الحيوية للأدوية المضادة للسرطان باستخدام تقنية LC/MS/MS وتطبيقاتها في التحليل الروتيني" . مجلة العلوم التكاملية : 4-19 . doi : 10.37022/jis.v6i1.51 . ISSN 2581-5679 . S2CID 257295079 .
↑ أودريسكول، إيمي (2021). "HPLC في التطبيقات الصيدلانية" . مدير المختبر .
↑ بيكاريا، ماركو؛ كابوتر، ديردري (2020). "التطورات الحالية في تقنية LC-MS لتحليل المستحضرات الصيدلانية" . المحلل . 145 (4): 1129-1157 . Bibcode : 2020Ana...145.1129B . doi : 10.1039 /C9AN02145K . hdl : 11392/2479221 . ISSN 1364-5528 . PMID 31971527. S2CID 210866236 .
↑ غو، تشونانغ (كريستين)؛ راسل، ديفيد؛ يهل، بيتر (2016). "تطبيق تقنية LCMS في تطوير الأدوية ذات الجزيئات الصغيرة" . المجلة الأوروبية للصيدلة . 21 (4): 54-57 .
^ دوفيديو ، كريستيان. لوكاتيلي، مارسيلو؛ بيروتشي، مريم؛ سيريولو، لويجي؛ فورتون، كينيث ج.؛ غازي أوغلو، داعش؛ كبير، أبوذر؛ ميروني، جوزيبي ماريا؛ دي جراتسيا، أوغو؛ علي، عمران؛ كاتينا، أنطونيو ماريا؛ تريجليا، ميشيل؛ مارسيلا، لويجي T.؛ سافيني ، فابيو (2023). "تطبيق LC-MS/MS في مجال السمية الدوائية: الوضع الحالي والتطبيقات الجديدة" . جزيئات . 28 (5): 2127. دوى : 10.3390 / جزيئات 28052127 . ISSN 1420-3049 . بمك 10004468 . بميد 36903374 .
↑ تشو، جونتو؛ تشونغ، ليجون (2022). "تطبيقات علم الأيض القائم على كروماتوغرافيا السائل-مطياف الكتلة في الطب التنبؤي والشخصي" . مجلة فرونتيرز في العلوم البيولوجية الجزيئية . 9 1049016. doi : 10.3389/fmolb.2022.1049016 . ISSN 2296-889X . PMC 9669074. PMID 36406271 .
↑ ماتياس، باتريشيا آي؛ كونور، توماس إتش؛ بيهيمر، كلايتون (2017). "مراجعة لطرق التحليل البولي باستخدام كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء المقترنة بقياس الطيف الكتلي للكشف عن تعرض العاملين في مجال الرعاية الصحية لأدوية السرطان" . مجلة الكروماتوغرافيا ب . 1060 : 316-324 . doi : 10.1016/j.jchromb.2017.06.028 . ISSN 1570-0232 . PMC 5585056. PMID 28654869 .
^ هيرنانديز ، فيليكس. سانشو، خوان الخامس؛ إيبانيز، ماريا؛ غيريرو، كارلوس (2007). "تحديد بقايا المضادات الحيوية في المياه البيئية باستخدام LC-MS" . اتجاهات TraAC في الكيمياء التحليلية . تحليل المخلفات الصيدلانية. 26 (6): 466-485 . دوى : 10.1016/j.trac.2007.01.012 . ISSN 0165-9936 .
↑ سيجر، كريستوف؛ سالزمان، ليندا (2020). "بعد عقد آخر: أصبح التحليل الطيفي الكتلي بالاقتران مع كروماتوغرافيا السائل (LC-MS/MS) إجراءً روتينيًا في التشخيص السريري" . الكيمياء الحيوية السريرية . تطورات وتطبيقات قياس الطيف الكتلي في الطب المخبري. 82 : 2-11 . doi : 10.1016/j.clinbiochem.2020.03.004 . ISSN 0009-9120 . PMID 32188572. S2CID 213186669 .
↑ سوندستروم، ميرا؛ بيلاندر، آنا؛ أنغيرر، فيرينا؛ هوتر، ميلاني؛ كنيزل، ستيفان؛ أوجانبيرا، إيلكا (1 أكتوبر 2013). "طريقة كروماتوغرافيا سائلة فائقة الأداء عالية الحساسية/مطياف كتلة عالي الدقة بتقنية زمن الطيران (UHPLC-HR-TOFMS) لفحص القنّب الاصطناعي وغيره من المخدرات في البول". الكيمياء التحليلية والكيمياء الحيوية التحليلية . 405 (26): 8463-8474 . doi : 10.1007/s00216-013-7272-8 . PMID 23954996. S2CID 25743579 .
↑ جيلب، مايكل هـ.؛ بشير الدين، خاجة؛ بورلينا، ألبرتو؛ تشين، هسياو-جان؛ تشين، ين-هسيو؛ ديزيكس، جورج؛ دورلي، كريستين؛ جيوجلياني، روبرتو؛ هيتالا، آمي؛ هونغ، شينينغ؛ كاو، شو-مين؛ خالدي، حامد؛ كلوغ، تريسي؛ كوباسكي، فرانسين؛ لياو، هسوان-تشيه (2022). "الكروماتوغرافيا السائلة - مطياف الكتلة الترادفي في مختبرات فحص حديثي الولادة" . المجلة الدولية لفحص حديثي الولادة . 8 (4): 62. doi : 10.3390/ijns8040062 . ISSN 2409-515X . PMC 9781967. PMID 36547379 .
↑ وانغ، يانيون؛ صن، يون؛ جيانغ، تاو (2019). "التطبيق السريري لتقنية LC-MS/MS في متابعة علاج الأطفال المصابين بحمضية ميثيل مالونيك". Advances in Therapy . 36 (6): 1304–1313 . doi : 10.1007/s12325-019-00955-0 . ISSN 1865-8652 . PMID 31049874. S2CID 143432183 .
^ أرونكومار، نيفيثيثا؛ لانجان، توماس ج.؛ ستابلتون، مولي. كوباسكي، فرانسين؛ ماسون، روبرت دبليو؛ سينغ، راجندرا. كوباياشي، هيرونوري؛ ياماغوتشي، سيجي؛ سوزوكي، ياسويوكي؛ أوري، كينجي؛ أوري، تاداو؛ فوكاو، توشيوكي؛ توماتسو، شونجي (2020). "فحص حديثي الولادة لعديدات السكاريد المخاطية: الماضي والحاضر والمستقبل" . مجلة علم الوراثة البشرية . 65 (7): 557-567 . دوى : 10.1038 / s10038-020-0744-8 . ISSN 1435-232X . بميد 32277174 . S2CID 92042115 .
^ سكوجفولد، هان بنديكسن. روتويلت، هيلج؛ روبسايت، ليون؛ الجستون، كاتيا بينيديكت بريستو؛ ويلسون ، ستيفن راي (2023). "تحليل بقعة الدم المجففة باستخدام التحليل اللوني السائل وقياس الطيف الكتلي: اتجاهات في الكيمياء السريرية" . مجلة علوم الانفصال . 46 (15) هـ2300210. دوى : 10.1002/jssc.202300210 . اتش دي ال : 10852/105845 . ردمك 1615-9306 . بميد 37269205 . S2CID 259047202 .
↑ زاهدي راد، مليحة؛ نيستاني، تيرانج رضا؛ نيكويه، بهاره؛ شريعت زاده، نسترن؛ كالاي، علي؛ خلجي، نيلوفر؛ غراوي، عزام (1 يناير 2015). "طريقة المقايسة المناعية الإنزيمية القائمة على مقايسة ارتباط البروتين التنافسية، مقارنةً بالكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء، لها قيمة تشخيصية منخفضة جدًا للكشف عن نقص فيتامين د لدى الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 9 و12 عامًا" . المجلة الدولية للطب الوقائي . 6 : 67. doi : 10.4103/2008-7802.161069 . PMC 4542329. PMID 26330983 .

للمزيد من القراءة

LR Snyder و JJ Kirkland و JW Dolan، مقدمة في الكروماتوغرافيا السائلة الحديثة، جون وايلي وأولاده، نيويورك، 2009.
إم دبليو دونغ، تقنية HPLC الحديثة للعلماء الممارسين. وايلي، 2006.
LR Snyder و JJ Kirkland و JL Glajch، تطوير طرق HPLC العملية، John Wiley & Sons، نيويورك، 1997.
S. Ahuja و HT Rasmussen (محرران)، تطوير طريقة HPLC للمستحضرات الصيدلانية، دار النشر الأكاديمية، 2007.
S. Ahuja و MW Dong (محرران)، دليل التحليل الصيدلاني بواسطة HPLC، Elsevier/Academic Press، 2005.
YV Kazakevich و R. LoBrutto (محرران)، HPLC لعلماء الصيدلة، Wiley، 2007.
UD Neue، أعمدة HPLC: النظرية والتكنولوجيا والممارسة، Wiley-VCH، نيويورك، 1997.
MC McMaster، HPLC، دليل المستخدم العملي، Wiley، 2007.

روابط خارجية

مبدأ وتطبيق كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) [ملاحظة أساسية على Rxlalit.com]

[1] كازاكيفيتش، يوري؛ لوبروتو، روزاريو، محرران. (2007). كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء لعلماء الصيدلة . هوبوكين، نيوجيرسي: وايلي-إنترساينس. ISBN 978-0-471-68162-5.

[:4-2] 1 2 علي، عبدو حسين (20 يونيو 2022). "الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC): مراجعة" . حوليات التقدم في الكيمياء . 6 (1): 010–020 . doi : 10.29328/journal.aac.1001026 (غير نشط في 29 يناير 2026).{{cite journal}}: صيانة CS1: تم تعطيل DOI اعتبارًا من يناير 2026 ( رابط )

[3] ليفين، شولاميت (يناير 2004). "الأطوار الثابتة ذات الطور المعكوس في العلوم الصيدلانية" . مجلة الكروماتوغرافيا السائلة والتقنيات ذات الصلة . 27 ( 7-9 ): 1353-1376 . doi : 10.1081/JLC-120030606 . ISSN 1082-6076 . S2CID 97490509 .

[4] جيربر، ف.؛ كرومن، م.؛ بوتجيتر، هـ.؛ روث، أ.؛ سيفرين، س.؛ سبوندلين، س. (2004). "الجوانب العملية للكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء ذات الطور العكسي السريع باستخدام أعمدة معبأة بجزيئات 3 ميكرومتر وأعمدة متجانسة في تطوير وإنتاج المستحضرات الصيدلانية وفقًا لممارسات التصنيع الجيدة الحالية". مجلة الكروماتوغرافيا أ . 1036 (2): 127-133 . doi : 10.1016/j.chroma.2004.02.056 . PMID 15146913 .

[5] باين، شيرلي؛ كارلين، ميشيل (2017). التطبيقات الجنائية للكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء ( الطبعة الأولى). مطبعة سي آر سي. رقم ISBN 978-0-429-25196-2.

[6] سيجر، كريستوف؛ سالزمان، ليندا (1 أغسطس 2020). "بعد عقد آخر: أصبح التحليل الطيفي الكتلي المقترن بالكروماتوغرافيا السائلة (LC-MS/MS) إجراءً روتينيًا في التشخيص السريري" . الكيمياء الحيوية السريرية . تطورات وتطبيقات قياس الطيف الكتلي في الطب المخبري. 82 : 2-11 . doi : 10.1016/j.clinbiochem.2020.03.004 . ISSN 0009-9120 . PMID 32188572. S2CID 213186669 .

[:3-7] 1 2 "الكروماتوغرافيا" . web.njit.edu . تم الاطلاع عليه في 5 أغسطس 2024 .

[8] أونغر، ك.ك.، محرر (1 يناير 1979)، الفصل 5: أعمدة السيليكا - إجراءات التعبئة وخصائص الأداء ، مجلة مكتبة الكروماتوغرافيا، المجلد 16، إلسيفير، الصفحات 169-186 ، doi : 10.1016/S0301-4770(08)60809-X ، ISBN 978-0-444-41683-4تم الاطلاع عليه بتاريخ 5 أغسطس 2024

[9] شو، يان؛ كاو، تشينغ؛ سفيك، فرانتيسك؛ فريشيه، جان إم جيه (15 أبريل 2010). " عمود بوليمر متجانس مسامي مع جسيمات نانوية ذهبية مرتبطة بالسطح لالتقاط وفصل الببتيدات المحتوية على السيستين" . الكيمياء التحليلية . 82 (8): 3352-3358 . Bibcode : 2010AnaCh..82.3352X . doi : 10.1021/ac1002646 . ISSN 0003-2700 . PMC 2875083. PMID 20302345 .

[10] "التفاعل الجزيئي للطور الثابت في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء" . www.imtakt.com . تم الاطلاع عليه بتاريخ 8 أغسطس 2024 .

[11] كادليكوفا، زوزانا؛ كاليكوفا، كفيتا؛ فولبريشتوفا، دينيسا؛ تيساروفا، إيفا؛ جيلار ، مارتن (16 أغسطس 2020). "طريقة تقييم التفاعلات الأيونية في التحليل الكروماتوغرافي السائل" . مجلة اللوني أ . 1625 461301. دوى : 10.1016/j.chroma.2020.461301 . ISSN 0021-9673 . بميد 32709344 .

[12] دونغ، مايكل (2018). "عشرة استنتاجات منطقية في التحليل الصيدلاني باستخدام كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء" . LCGC Europe . LCGC Europe-08-01-2018. 31 (8): 432– 436.

[13] سنايدر، لويد ر.؛ كيركلاند، جوزيف ج.؛ جلايتش، جوزيف ل. (2012). تطوير طرق HPLC العملية ( الطبعة الثانية). جون وايلي وأولاده.

[14] ماكماستر، مارفن سي. (2007). HPLC: دليل المستخدم العملي ( الطبعة الثانية). هوبوكين، نيوجيرسي: وايلي-إنترساينس. ISBN 978-0-471-75401-5.

[15] هاناي، توشيهيكو؛ هاناي، ت. (1999). HPLC: دليل عملي . سلسلة دراسات الكروماتوغرافيا التابعة للجمعية الملكية للكيمياء. كامبريدج: الجمعية الملكية للكيمياء. ISBN 978-0-85404-515-0.

[16] كوشكون، أوزليم (2016). " تقنيات الفصل: الكروماتوغرافيا" . عيادات إسطنبول الشمالية . 3 (2): 156-160 . doi : 10.14744/nci.2016.32757 . ISSN 2536-4553 . PMC 5206469. PMID 28058406 .

[17] "كيف تعمل أجهزة الكشف في كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء - الولايات المتحدة" . www.thermofisher.com . تاريخ الاطلاع: 29 يناير 2026 .

[18] نيكولين، برانكو؛ اماموفيتش، بيلما؛ ميدانهوديتش-فوك، سايرا؛ رصين ، ميروسلاف (20 مايو 2004). "الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء في التحاليل الصيدلانية" . الجزيئات الحيوية والطب الحيوي . 4 (2): 5– 9. دوي : 10.17305/bjbms.2004.3405 . ISSN 2831-090X . بمك 7250120 . بميد 15629016 .

[19] هايدورن، مايكل (2016). "تقنية أكثر مرونة لضبط درجة حرارة العمود في نقل طريقة الكروماتوغرافيا السائلة" (ملف PDF) . شركة ثيرمو فيشر العلمية (ورقة بيضاء).

[Karger-20] 1 2 كارغر، باري ل. (1997). "HPLC: منظورات مبكرة وحديثة". مجلة التعليم الكيميائي . 74 (1): 45. Bibcode : 1997JChEd..74...45K . doi : 10.1021/ed074p45 .

[Henry-21] 1 2 3 4 5 6 هنري، ريتشارد أ. (1 فبراير 2009) "الأيام الأولى لتقنية HPLC في شركة دوبونت" مؤرشف في 1 أغسطس 2020 على موقع Wayback Machine . مجلة الكروماتوغرافيا على الإنترنت. شركة أفانستار للاتصالات.

[22] جيدينجز، كالفن (1965). ديناميكيات الكروماتوغرافيا: المبادئ والنظرية . مارسيل ديكر.

[:0-23] 1 2 ليفين، شولاميت (2017). غرينبيرغ، نيلو؛ كار، بيتر دبليو (محررون). الأعمدة ذات اللب الصلب أو الأعمدة المسامية بالكامل في كروماتوغرافيا السائل فائق الأداء - أي طريق نسلك لتحسين كفاءة الفصل؟ . التقدم في الكروماتوغرافيا. المجلد 55 (الطبعة 1 ). بوكا راتون: مطبعة سي آر سي. الصفحات 185-203 . ISBN 978-1-315-15807-5.

[24] إيلر، آر كيه (1979) كيمياء السيليكا . جون وايلي وأولاده. نيويورك.

[25] كارغر، بي إل؛ بيري، إل في (1971). "الفصل السريع للستيرويدات باستخدام كروماتوغرافيا السائل على أعمدة محملة بكثافة عالية بالطور الثابت" . الكيمياء السريرية . 17 (8): 757-64 . doi : 10.1093/clinchem/17.8.757 . PMID 4254537 .

[26] نوي، أوفه د. (1997). أعمدة HPLC: النظرية والتكنولوجيا والتطبيق . نيويورك، نيويورك: وايلي في سي إتش. ISBN 978-0-471-19037-0.

[27] جيدينجز، ج. كالفن (1965) ديناميكيات الكروماتوغرافيا، الجزء الأول: المبادئ والنظرية . مارسيل ديكر، نيويورك. ص 281.

[28] إيتري، سي. (2001). "معالم بارزة في علم الكروماتوغرافيا: نشأة كروماتوغرافيا التقسيم" (ملف PDF) . LCGC . 19 (5): 506-512 . مؤرشف من الأصل (ملف PDF) في 4 مارس 2016. تم الاطلاع عليه في 26 فبراير 2016 .

[29] مارتن، أ. ج. ب.؛ سينج، ر. ل. م. (1941). "فصل الأحماض الأمينية الأحادية العليا بالاستخلاص السائل-السائل بالتيار المعاكس: تركيب الأحماض الأمينية في الصوف" . مجلة الكيمياء الحيوية . 35 ( 1-2 ): 91-121 . doi : 10.1042/bj0350091 . PMC 1265473. PMID 16747393 .

[30] ليندسي، س.؛ كيلي، د. (1987). كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء . وايلي. OSTI 7013902 . من مراجعة Hung, LB; Parcher, JF; Shores, JC; Ward, EH (1988). "الأساس النظري والتجريبي لبرمجة تغطية السطح في كروماتوغرافيا الغاز-الصلب باستخدام غاز حامل قابل للامتصاص". مجلة الجمعية الكيميائية الأمريكية 110 (11): 1090-1096 . Bibcode : 1988AnaCh..60.1090H . doi : 10.1021/ac00162a003 .

[31] كروماتوغرافيا الإزاحة . Sacheminc.com. تم الاطلاع عليه بتاريخ 7 يونيو 2011. مؤرشف بتاريخ 15 سبتمبر 2008 في أرشيف الإنترنت (Wayback Machine).

[32] لوبروتو، روزاريو؛ كازاكيفيتش، يوري (22 يناير 2007)، "HPLC ذو المرحلة العكسية" ، في كازاكيفيتش، يوري؛ LoBrutto، Rosario (eds.)، HPLC لعلماء الصيدلة (1 ed.)، Wiley، pp. 139– 239، doi : 10.1002/9780470087954.ch4 ، ISBN 978-0-471-68162-5تم الاطلاع عليه بتاريخ 10 أكتوبر 2023

[33] كازاكيفيتش، يوري؛ لوبروتو، روزاريو (22 يناير 2007)، "كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي" ، في كازاكيفيتش، يوري؛ لوبروتو، روزاريو (محرران)، كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء لعلماء الصيدلة ( الطبعة الأولى)، وايلي، الصفحات 263-279 ، doi : 10.1002/9780470087954.ch6 ، ISBN 978-0-471-68162-5تم الاطلاع عليه بتاريخ 10 أكتوبر 2023

[34] مولوي، باربرا؛ هيث، آلان؛ شرايفر، زاكاري؛ جاميسون، فابيان؛ الحكيم، علي؛ موريس، تينا س.؛ سزايك، أنيتا ي. (1 أغسطس 2014). "طرق دستور الأدوية الأمريكي لتحليل الهيبارين: التحديد الكروماتوغرافي لتوزيعات الوزن الجزيئي لهيبارين الصوديوم". الكيمياء التحليلية والكيمياء الحيوية التحليلية . 406 (20): 4815-4823 . doi : 10.1007/s00216-014-7940-3 . hdl : 1721.1/104914 . ISSN 1618-2650 . PMID 24958344. S2CID 492085 .

[35] فريتز، جيمس س. جيردي، دوغلاس ت. (25 أبريل 2000). اللوني الأيوني (1 ed.). وايلي. دوى : 10.1002/9783527613243 . رقم ISBN 978-3-527-29914-0.

[36] تشانغ، تشنهوا؛ رودريغيز، إليوت؛ بي، كونغ؛ تشنغ، شيوي؛ سوريش، دودافينكاتانا؛ سوه، كيونغاه؛ لي، تشاو؛ السبعي، فوزي؛ حاج، ديفيد س. (2018). "الكروماتوغرافيا التقاربية عالية الأداء وطرق الفصل ذات الصلة لتحليل العوامل البيولوجية والصيدلانية" . المحلل . 143 ( 2): 374-391 . Bibcode : 2018Ana...143..374Z . doi : 10.1039/C7AN01469D . ISSN 1364-5528 . PMC 5768458. PMID 29200216 .

[:1-37] 1 2 مكالي، ديفيد ف. (10 نوفمبر 2017). "فهم ومعالجة الفصل في كروماتوغرافيا التفاعل الهيدروفيلي السائل". مجلة الكروماتوغرافيا أ . 1523 : 49-71 . doi : 10.1016/j.chroma.2017.06.026 . ISSN 1873-3778 . PMID 28668366 .

[doi.org-38] 1 2 بوسزيفسكي، بوغوسلاف؛ نوغا، سيلفيا (2012). "الكروماتوغرافيا السائلة للتفاعل المحب للماء (HILIC) - تقنية فصل فعالة" . الكيمياء التحليلية والكيمياء الحيوية التحليلية . 402 (1): 231-247 . Bibcode : 2012ABiCh.402..231B . doi : 10.1007/ s00216-011-5308-5 . ISSN 1618-2650 . PMC 3249561. PMID 21879300 .

[39] شيلينجر، آدم ب.؛ كار، بيتر و. (2006). "الكروماتوغرافيا متساوية التركيز والكروماتوغرافيا المتدرجة: مقارنة من حيث السرعة، وإمكانية تكرار الاحتفاظ، والقياس الكمي" . مجلة الكروماتوغرافيا أ . 1109 (2): 253-266 . doi : 10.1016/j.chroma.2006.01.047 . PMID 16460742. S2CID 26072994 .

[40] إيتري، إل إس؛ زلاتكيس، أ.، محرران (1979)، "تشابا هورفاث" ، مكتبة مجلة الكروماتوغرافيا ، 75 عامًا من الكروماتوغرافيا: حوار تاريخي، المجلد 17، إلسيفير، الصفحات 151-158 ، doi : 10.1016/s0301-4770(08)60645-4 ، ISBN 978-0-444-41754-1تم الاطلاع عليه بتاريخ 15 أكتوبر 2023

[41] سنايدر، لويد ر.؛ دولان، جون و. (2006). الإذابة المتدرجة عالية الأداء: التطبيق العملي لنموذج قوة المذيب الخطي . وايلي إنترساينس. ISBN 978-0-470-05551-9.

[42] شيلينجر، آدم ب.؛ كار، بيتر و. (2006). "الكروماتوغرافيا متساوية التركيز والكروماتوغرافيا المتدرجة: مقارنة من حيث السرعة، وإمكانية تكرار الاحتفاظ، والقياس الكمي" . مجلة الكروماتوغرافيا أ . المؤتمر الدولي التاسع عشر حول الفصل الحيوي على نطاق صغير. 1109 (2): 253-266 . doi : 10.1016/j.chroma.2006.01.047 . ISSN 0021-9673 . PMID 16460742. S2CID 26072994 .

[43] دولان، جون دبليو. (2014). "توسيع نطاق طريقة الكروماتوغرافيا السائلة، الجزء الثاني: الفصل بالتدرج". مجلة الكروماتوغرافيا السائلة والغازية في أمريكا الشمالية . 32 (3): 188-193 .

[44] مارتن، أ. ج. ب.؛ سينج، ر. ل. م. (1 ديسمبر 1941). "شكل جديد من الكروماتوجرام يستخدم طورين سائلين" . مجلة الكيمياء الحيوية . 35 (12): 1358-1368 . doi : 10.1042/bj0351358 . ISSN 0306-3283 . PMC 1265645. PMID 16747422 .

[45] 〈621〉 الكروماتوغرافيا (ملف PDF) ، هيئة دستور الأدوية الأمريكي، 1 ديسمبر 2022، doi : 10.31003/uspnf_m99380_06_01 ، تم الاطلاع عليه في 21 يناير 2025

[46] رين، ستيفن أ.س. (15 يونيو 2005). "السعة القصوى في كروماتوغرافيا السائل فائق الأداء المتدرجة (UPLC)" . مجلة التحليل الصيدلاني والحيوي . 38 (2): 337-343 . doi : 10.1016/j.jpba.2004.12.028 . ISSN 0731-7085 . PMID 15925228 .

[47] زيلينيانسكي، دورا؛ فيلينجر، أتيلا (1 أكتوبر 2020). "تأثير مكونات العمود على كفاءة كروماتوغرافيا السائل (LC)" . LCGC Europe . LCGC Europe-10-01-2020. 33 (10): 498–504 .

[48] دولان، جون (2014). "توسيع نطاق طريقة الكروماتوغرافيا السائلة، الجزء الثاني: الفصل بالتدرج" . مؤتمر الكروماتوغرافيا السائلة والغازية في أمريكا الشمالية . LCGC أمريكا الشمالية - 03-01-2014. 32 (3): 188-193 .

[49] جنسن، أولي إلفانغ؛ كيدال، ستيفن (1 مارس 2006). "استخدام التدفق الحجمي لتوسيع نطاق العمليات الكروماتوغرافية" . بيوفارم إنترناشونال . بيوفارم إنترناشونال-03-01-2006. 19 (3).

[:2-50] 1 2 والتر، توماس هـ.؛ أندروز، ريتشارد و. (2014). "الابتكارات الحديثة في أعمدة وأجهزة كروماتوغرافيا السائل فائق الأداء" . اتجاهات في الكيمياء التحليلية . 63 : 14-20 . doi : 10.1016/j.trac.2014.07.016 . ISSN 0165-9936 .

[51] ماجورز، رونالد إي. (7 سبتمبر 2010) كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء سريعة وفائقة السرعة على جسيمات مسامية دون 2 ميكرومتر - إلى أين نتجه من هنا؟ - LC-GC Europe . Lcgceurope.com. تم الاطلاع عليه بتاريخ 7 يونيو 2011.

[52] شيانغ، ي.؛ ليو، ي.؛ لي، م. ل. (2006). "الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الضغط باستخدام درجة حرارة مرتفعة". مجلة الكروماتوغرافيا أ . 1104 ( 1-2 ): 198-202 . doi : 10.1016/j.chroma.2005.11.118 . PMID 16376355 .

[53] هورفاث، سي.؛ بريس، ب. أ.؛ ليبسكي، س. ر. (1967). "الكروماتوغرافيا السائلة السريعة. دراسة معايير التشغيل وفصل النيوكليوتيدات على مبادلات أيونية غشائية". الكيمياء التحليلية . 39 (12): 1422-1428 . Bibcode : 1967AnaCh..39.1422H . doi : 10.1021/ac60256a003 . PMID 6073805 .

[54] نغوين، داو ت.-ت.؛ غيلارم، ديفي؛ روداز، سيرج؛ فوتي، جان-لوك (2006). "التحليل السريع في كروماتوغرافيا السائل باستخدام حجم جسيمات صغير وضغط عالٍ" . مجلة علوم الفصل . 29 (12): 1836-1848 . doi : 10.1002/jssc.200600189 . ISSN 1615-9306 . PMID 16970187 .

[55] غريتي، فابريس؛ غيوشون، جورج (2013). "معادلة فان ديمتر: الافتراضات والحدود والتعديل على كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء الحديثة" . مجلة الكروماتوغرافيا أ . 1302 : 1-13 . doi : 10.1016/j.chroma.2013.06.032 . PMID 23838304 .

[56] شيانغ، يانكياو؛ ليو، يانشنغ؛ لي، ميلتون ل. (2006). "الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الضغط باستخدام درجة حرارة مرتفعة". مجلة الكروماتوغرافيا أ . 1104 ( 1-2 ): 198-202 . doi : 10.1016/j.chroma.2005.11.118 . PMID 16376355 .

[57] مضخة إنفينيتي الرباعية 1290، مؤرشفة في 20 نوفمبر 2015 على موقع Wayback Machine . شركة Agilent

[58] ووترز. "العلامات التجارية: ووترز" . www.waters.com .

[59] ك. روباردز (1994). مبادئ وممارسات طرق الاستشراب الحديثة . حداد، بي آر، جاكسون، بي إي. أمستردام: إلسيفير/أكاديميك برس. ISBN 978-0-08-057178-2. OCLC 815471219 .

[60] "أساسيات الكشف الكهروكيميائي (ECD)" . شركة أموزا .

[61] ماركوفيتش، عمر؛ أوتيل، جيم؛ فيلدمان، أوبي؛ أوتو، سيبرين (2020). "جهاز آلي للتحريك المستمر أثناء أخذ العينات في أنظمة كروماتوغرافيا السائل" . مجلة الاتصالات الكيميائية . 3 (1): 180. Bibcode : 2020CmChe...3..180M . doi : 10.1038/s42004-020-00427-5 . PMC 9814086. PMID 36703458 .

[62] جيربر، فريدريك (مايو 2004). "الجوانب العملية للفصل الكروماتوغرافي السائل عالي الأداء ذي الطور العكسي السريع باستخدام أعمدة معبأة بجزيئات 3 ميكرومتر وأعمدة متجانسة في تطوير وإنتاج المستحضرات الصيدلانية وفقًا لممارسات التصنيع الجيدة الحالية". مجلة الكروماتوغرافيا . 1036 (2): 127-133 . doi : 10.1016/j.chroma.2004.02.056 . PMID 15146913 .

[63] صديقي، معصوم رضا؛ العثمان، زيد أ.؛ رحمن، نفيسور (2013). "التقنيات التحليلية في التحليل الصيدلاني: مراجعة" . المجلة العربية للكيمياء . 10 : S1409– S1421. doi : 10.1016/j.arabjc.2013.04.016 .

[64] دستور الأدوية الأوروبي ، 2002. الطبعة الرابعة، مجلس أوروبا، ستراسبورغ.

[65] دستور الأدوية الأمريكي ، 2004. الطبعة 27. مؤتمر دستور الأدوية الأمريكي، روكفيل، ماريلاند.

[66] ميرون، جوزيبي م. تارتاليا، أنجيلا؛ روسي، ساندرا؛ سانتافينيري، فرانشيسكو؛ باسوتي، إليسا؛ دوفيديو، كريستيان؛ بونيلي، مارتينا؛ روساتو، إنريكا؛ دي جراتسيا، أوغو؛ لوكاتيلي، مارسيلو؛ سافيني ، فابيو (2021). "التحديد الكمي السريع LC-MS/MS للمواد غير المشروعة في العينات الصلبة والسائلة غير المعروفة المضبوطة" . الكيمياء التحليلية . 93 (49): 16308– 16313. بيب كود : 2021AnaCh..9316308M . دوى : 10.1021/acs.analchem.1c03310 . ISSN 0003-2700 . بمك 8674870 . PMID 34843645 .

[67] بيسكي، أماديو؛ روزنتال، موراي؛ ويست، روبرت؛ ويست، كاميرون؛ كروز، بريدجيت؛ ميكيل، تشارلز؛ ألمازان، بيرلا؛ لاتيشيف، سيرجي (1 يونيو 2010). "تقييم دقة التشخيص باستخدام كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة الترادفي مقابل اختبار الأدوية المناعي في مرضى الألم" . طبيب الألم . 13 (3): 273-281 . PMID 20495592 .

[68] تساي، آي-لين؛ وينغ، تي-آي؛ تسينغ، يوفينغ جيه؛ تان، هابي كوي-لوك؛ صن، شياو-جو؛ كو، تشينغ-هوا (1 ديسمبر 2013). "فحص وتأكيد 62 نوعًا من المخدرات ومستقلباتها في البول باستخدام كروماتوغرافيا السائل فائق الأداء - مطياف الكتلة رباعي الأقطاب ذي زمن الطيران" . مجلة علم السموم التحليلي . 37 (9): 642-651 . doi : 10.1093/jat/bkt083 . PMID 24084874 .

[69] واينمان، دبليو؛ رينز، إم؛ فوغت، إس؛ بولاك، إس (1 يناير 2000). "الاستخلاص الآلي في الطور الصلب والاشتقاق على مرحلتين للتحليل المتزامن للأدوية الأساسية غير المشروعة في مصل الدم بواسطة كروماتوغرافيا الغاز/مطياف الكتلة". المجلة الدولية للطب الشرعي . 113 (4): 229-235 . doi : 10.1007/s004149900098 . PMID 10929239. S2CID 20451772 .

[70] كولمونين، مارجو؛ لينونين، أنتي؛ بيلاندر، آنا؛ أوجانبيرا، إيلكا (28 فبراير 2007). “طريقة فحص عامة لعوامل المنشطات في البول البشري عن طريق استخلاص الطور الصلب واللوني السائل/قياس الطيف الكتلي في وقت الرحلة”. أناليتيكا كيميكا أكتا . 585 (1): 94– 102. بيب كود : 2007AcAC..585...94K . دوى : 10.1016/j.aca.2006.12.028 . بميد 17386652 .

[71] بيلاندر ، آنا. أوجانبيرا، إيلكا؛ لاكس، سوفي؛ راسانين، إيلبو؛ فوري، إركي (1 نوفمبر 2003). “الفحص السمي مع تحديد المستقلبات المستندة إلى الصيغة عن طريق التحليل اللوني السائل/قياس الطيف الكتلي في وقت الرحلة”. الكيمياء التحليلية . 75 (21): 5710–5718 . بيب كود : 2003AnaCh..75.5710P . دوى : 10.1021/ac030162o . بميد 14588010 .

[72] نوبيليس، ميلان؛ بور، ميلان؛ سينيل، بيتر؛ بافليك، يان؛ كونيس، جيري؛ فوبرسالوفا، ماري؛ كولاروفا، لينكا؛ هولكابيك، ميخال (15 يونيو 2007). "التحليل الأيضي لدواء مضاد للفطريات محتمل، 3-(4-بروموفينيل)-5-أسيتوكسي ميثيل-2،5-ثنائي هيدروفوران-2-ون، في بول الفئران باستخدام كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء مع كاشف مصفوفة ثنائية ضوئية فوق بنفسجية وكاشف مطياف الكتلة". مجلة الكروماتوغرافيا ب . 853 ( 1-2 ): 10-19 . doi : 10.1016/j.jchromb.2007.02.045 . PMID 17400036 .

[73] قو، جاتين؛ باتيل، كومار؛ شاه، ديرين (2016). "تطبيق LC-MS" . فارماتوتور .

[74] تالام، أنيل كومار؛ ألاباتي، ساهيثي؛ نولي، موهانا فامسي (2023). "مراجعة حول تطوير وتوثيق الطرق التحليلية الحيوية للأدوية المضادة للسرطان باستخدام تقنية LC/MS/MS وتطبيقاتها في التحليل الروتيني" . مجلة العلوم التكاملية : 4-19 . doi : 10.37022/jis.v6i1.51 . ISSN 2581-5679 . S2CID 257295079 .

[75] أودريسكول، إيمي (2021). "HPLC في التطبيقات الصيدلانية" . مدير المختبر .

[76] بيكاريا، ماركو؛ كابوتر، ديردري (2020). "التطورات الحالية في تقنية LC-MS لتحليل المستحضرات الصيدلانية" . المحلل . 145 (4): 1129-1157 . Bibcode : 2020Ana...145.1129B . doi : 10.1039 /C9AN02145K . hdl : 11392/2479221 . ISSN 1364-5528 . PMID 31971527. S2CID 210866236 .

[77] غو، تشونانغ (كريستين)؛ راسل، ديفيد؛ يهل، بيتر (2016). "تطبيق تقنية LCMS في تطوير الأدوية ذات الجزيئات الصغيرة" . المجلة الأوروبية للصيدلة . 21 (4): 54-57 .

[78] دوفيديو ، كريستيان. لوكاتيلي، مارسيلو؛ بيروتشي، مريم؛ سيريولو، لويجي؛ فورتون، كينيث ج.؛ غازي أوغلو، داعش؛ كبير، أبوذر؛ ميروني، جوزيبي ماريا؛ دي جراتسيا، أوغو؛ علي، عمران؛ كاتينا، أنطونيو ماريا؛ تريجليا، ميشيل؛ مارسيلا، لويجي T.؛ سافيني ، فابيو (2023). "تطبيق LC-MS/MS في مجال السمية الدوائية: الوضع الحالي والتطبيقات الجديدة" . جزيئات . 28 (5): 2127. دوى : 10.3390 / جزيئات 28052127 . ISSN 1420-3049 . بمك 10004468 . بميد 36903374 .

[79] تشو، جونتو؛ تشونغ، ليجون (2022). "تطبيقات علم الأيض القائم على كروماتوغرافيا السائل-مطياف الكتلة في الطب التنبؤي والشخصي" . مجلة فرونتيرز في العلوم البيولوجية الجزيئية . 9 1049016. doi : 10.3389/fmolb.2022.1049016 . ISSN 2296-889X . PMC 9669074. PMID 36406271 .

[80] ماتياس، باتريشيا آي؛ كونور، توماس إتش؛ بيهيمر، كلايتون (2017). "مراجعة لطرق التحليل البولي باستخدام كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء المقترنة بقياس الطيف الكتلي للكشف عن تعرض العاملين في مجال الرعاية الصحية لأدوية السرطان" . مجلة الكروماتوغرافيا ب . 1060 : 316-324 . doi : 10.1016/j.jchromb.2017.06.028 . ISSN 1570-0232 . PMC 5585056. PMID 28654869 .

[81] هيرنانديز ، فيليكس. سانشو، خوان الخامس؛ إيبانيز، ماريا؛ غيريرو، كارلوس (2007). "تحديد بقايا المضادات الحيوية في المياه البيئية باستخدام LC-MS" . اتجاهات TraAC في الكيمياء التحليلية . تحليل المخلفات الصيدلانية. 26 (6): 466-485 . دوى : 10.1016/j.trac.2007.01.012 . ISSN 0165-9936 .

[82] سيجر، كريستوف؛ سالزمان، ليندا (2020). "بعد عقد آخر: أصبح التحليل الطيفي الكتلي بالاقتران مع كروماتوغرافيا السائل (LC-MS/MS) إجراءً روتينيًا في التشخيص السريري" . الكيمياء الحيوية السريرية . تطورات وتطبيقات قياس الطيف الكتلي في الطب المخبري. 82 : 2-11 . doi : 10.1016/j.clinbiochem.2020.03.004 . ISSN 0009-9120 . PMID 32188572. S2CID 213186669 .

[83] سوندستروم، ميرا؛ بيلاندر، آنا؛ أنغيرر، فيرينا؛ هوتر، ميلاني؛ كنيزل، ستيفان؛ أوجانبيرا، إيلكا (1 أكتوبر 2013). "طريقة كروماتوغرافيا سائلة فائقة الأداء عالية الحساسية/مطياف كتلة عالي الدقة بتقنية زمن الطيران (UHPLC-HR-TOFMS) لفحص القنّب الاصطناعي وغيره من المخدرات في البول". الكيمياء التحليلية والكيمياء الحيوية التحليلية . 405 (26): 8463-8474 . doi : 10.1007/s00216-013-7272-8 . PMID 23954996. S2CID 25743579 .

[84] جيلب، مايكل هـ.؛ بشير الدين، خاجة؛ بورلينا، ألبرتو؛ تشين، هسياو-جان؛ تشين، ين-هسيو؛ ديزيكس، جورج؛ دورلي، كريستين؛ جيوجلياني، روبرتو؛ هيتالا، آمي؛ هونغ، شينينغ؛ كاو، شو-مين؛ خالدي، حامد؛ كلوغ، تريسي؛ كوباسكي، فرانسين؛ لياو، هسوان-تشيه (2022). "الكروماتوغرافيا السائلة - مطياف الكتلة الترادفي في مختبرات فحص حديثي الولادة" . المجلة الدولية لفحص حديثي الولادة . 8 (4): 62. doi : 10.3390/ijns8040062 . ISSN 2409-515X . PMC 9781967. PMID 36547379 .

[85] وانغ، يانيون؛ صن، يون؛ جيانغ، تاو (2019). "التطبيق السريري لتقنية LC-MS/MS في متابعة علاج الأطفال المصابين بحمضية ميثيل مالونيك". Advances in Therapy . 36 (6): 1304–1313 . doi : 10.1007/s12325-019-00955-0 . ISSN 1865-8652 . PMID 31049874. S2CID 143432183 .

[86] أرونكومار، نيفيثيثا؛ لانجان، توماس ج.؛ ستابلتون، مولي. كوباسكي، فرانسين؛ ماسون، روبرت دبليو؛ سينغ، راجندرا. كوباياشي، هيرونوري؛ ياماغوتشي، سيجي؛ سوزوكي، ياسويوكي؛ أوري، كينجي؛ أوري، تاداو؛ فوكاو، توشيوكي؛ توماتسو، شونجي (2020). "فحص حديثي الولادة لعديدات السكاريد المخاطية: الماضي والحاضر والمستقبل" . مجلة علم الوراثة البشرية . 65 (7): 557-567 . دوى : 10.1038 / s10038-020-0744-8 . ISSN 1435-232X . بميد 32277174 . S2CID 92042115 .

[87] سكوجفولد، هان بنديكسن. روتويلت، هيلج؛ روبسايت، ليون؛ الجستون، كاتيا بينيديكت بريستو؛ ويلسون ، ستيفن راي (2023). "تحليل بقعة الدم المجففة باستخدام التحليل اللوني السائل وقياس الطيف الكتلي: اتجاهات في الكيمياء السريرية" . مجلة علوم الانفصال . 46 (15) هـ2300210. دوى : 10.1002/jssc.202300210 . اتش دي ال : 10852/105845 . ردمك 1615-9306 . بميد 37269205 . S2CID 259047202 .

[88] زاهدي راد، مليحة؛ نيستاني، تيرانج رضا؛ نيكويه، بهاره؛ شريعت زاده، نسترن؛ كالاي، علي؛ خلجي، نيلوفر؛ غراوي، عزام (1 يناير 2015). "طريقة المقايسة المناعية الإنزيمية القائمة على مقايسة ارتباط البروتين التنافسية، مقارنةً بالكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء، لها قيمة تشخيصية منخفضة جدًا للكشف عن نقص فيتامين د لدى الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 9 و12 عامًا" . المجلة الدولية للطب الوقائي . 6 : 67. doi : 10.4103/2008-7802.161069 . PMC 4542329. PMID 26330983 .

أو

[ 3 ]

[ 4 ]

[ 5 ]

[ 6 ]

[ 8 ]

[ 9 ]

[ 10 ]

[ 11 ]

[ 12 ]

[ 13 ]

[ 14 ]

[ 15 ]

[ 16 ]

[ 17 ]

[ 18 ]

[ 19 ]

[ 20 ]

[ 21 ]

[ 22 ]

[ 24 ]

[ 25 ]

[ 26 ]

[ 27 ]

[ 28 ]

[

[

[ 31 ]

[ 32 ]

[ 33 ]

[ 34 ]

[ 35 ]

[ 36 ]

[ 38 ]

[ 39 ]

[ 40 ]

[ 41 ]

[ 42 ]

[ 43 ].

[ 44 ]

[ 45 ]

[ 46 ]

[ 47 ]

[ 48 ]

[ 49 ]

[ 51 ]

[ 52 ]

[ 53 ]

[ 54 ]

[ 55 ]

[

[

[

[ 59 ]

[ 60 ]

[ 61 ]

[ 62 ]

[ 63 ]

[ 64 ]

[ 65 ]

[ 66 ]

[ 67 ]

[ 68 ]

[ 69 ]

[ 70 ]

[ 71 ]

[ 72 ]

[ 73 ]

[ 74 ]

[

[

[

[

[

[

[

[

[

[

[

[

[

[ 88 ]

اللغة	العربية (RTL)
روابط موسوعية	30 رابطاً
المصدر الأصلي	ويكيبيديا ↗