صبغة غرام

📅 آخر تحديث: ٣١ يوليو ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٣١ يوليو ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 6 صور
الموسوعة الحرة
صورة مجهرية لبكتيريا مكورة موجبة الجرام وبكتيريا عصوية سالبة الجرام.
صبغة غرام لمزيج من المكورات العنقودية الذهبية ( S. aureus ATCC 25923، مكورات موجبة الغرام ، باللون الأرجواني) والإشريكية القولونية ( E. coli ATCC 11775، عصيات سالبة الغرام ، باللون الأحمر)، وهي أكثر أنواع البكتيريا المرجعية شيوعًا في صبغة غرام

صبغة غرام ( أو طريقة غرام ) هي طريقة تلوين تُستخدم لتصنيف أنواع البكتيريا إلى مجموعتين رئيسيتين: البكتيريا موجبة غرام والبكتيريا سالبة غرام . كما يمكن استخدامها لتشخيص العدوى الفطرية . [ 1 ] سُميت هذه الطريقة نسبةً إلى عالم البكتيريا الدنماركي هانز كريستيان غرام ، الذي طورها عام 1884. [ 2 ]

يُستخدم تلوين غرام لتمييز البكتيريا بناءً على الخصائص الكيميائية والفيزيائية لجدران خلاياها . تحتوي الخلايا موجبة غرام على طبقة سميكة من الببتيدوغليكان في جدار الخلية، مما يحافظ على الصبغة الأساسية، وهي البنفسجي البلوري . أما الخلايا سالبة غرام، فلديها طبقة ببتيدوغليكان أرق تسمح بغسل البنفسجي البلوري عند إضافة الإيثانول . وتُصبغ هذه الخلايا باللون الوردي أو الأحمر بواسطة الصبغة المضادة ، [ 3 ] والتي عادةً ما تكون سافرانين أو فوكسين . يُضاف محلول اليود لوغول دائمًا بعد إضافة البنفسجي البلوري لتكوين مركب مستقر معه، مما يُقوي روابط الصبغة بجدار الخلية . [ 4 ]

يُعدّ تلوين غرام الخطوة الأولى في تحديد المجموعة البكتيرية في أغلب الأحيان. ورغم أن تلوين غرام أداة تشخيصية قيّمة في كلٍّ من البيئات السريرية والبحثية، إلا أنه لا يُمكن تصنيف جميع البكتيريا بشكل قاطع باستخدام هذه التقنية. وهذا ما يُؤدي إلى ظهور مجموعات بكتيرية متغيرة التلوين (غرام) ومجموعات بكتيرية غير محددة التلوين (غرام) .

تاريخ

سُميت هذه الطريقة نسبةً إلى مخترعها، العالم الدنماركي هانز كريستيان غرام (1853-1938)، الذي طوّر هذه التقنية أثناء عمله مع كارل فريدلاندر في مشرحة مستشفى مدينة برلين عام 1884. لم يبتكر غرام هذه التقنية بهدف التمييز بين أنواع البكتيريا المختلفة، بل لجعل البكتيريا أكثر وضوحًا في مقاطع أنسجة الرئة المصبوغة. [ 5 ] لاحظ غرام أن بعض الخلايا البكتيرية تُظهر مقاومة ملحوظة لإزالة اللون. بناءً على هذه الملاحظات، طوّر غرام إجراء صبغ غرام الأولي، مستخدمًا في البداية صبغة إيرليخ الأنيلينية-البنفسجية الجنتيانية ، ومحلول لوغول ، والكحول المطلق لإزالة اللون، وبني بسمارك للتلوين المضاد. [ 6 ] نشر غرام طريقته عام 1884، وأشار في تقريره الموجز إلى أن عصية التيفوس لم تحتفظ بالصبغة. [ 7 ] لم يُميّز غرام في البداية بين البكتيريا سالبة الغرام وموجبة الغرام باستخدام طريقته. [ 6 ]

الاستخدامات

صبغة غرام لفطر المبيضات البيضاء من مسحة مهبلية. يبلغ قطر الأبواغ الكلاميدية الصغيرة بيضاوية الشكل 2-4 ميكرومتر .

يُعدّ تلوين غرام تقنية مخبرية بكتيرية [ 8 ] تُستخدم لتصنيف أنواع البكتيريا إلى مجموعتين رئيسيتين ( موجبة غرام وسالبة غرام ) بناءً على الخصائص الفيزيائية لجدران خلاياها . [ 9 ] كما يُمكن استخدام تلوين غرام لتشخيص العدوى الفطرية . [ 1 ] لا يُستخدم تلوين غرام لتصنيف العتائق ، لأن هذه الكائنات الدقيقة تُظهر استجابات مُتباينة على نطاق واسع لا تتبع مجموعاتها التصنيفية . [ 10 ]

تُجرى فحوصات صبغة غرام على سوائل الجسم أو الخزعات عند الاشتباه بالعدوى . وتُعطي هذه الفحوصات نتائج أسرع بكثير من زراعة العينات ، وهي ذات أهمية خاصة عندما تُحدث العدوى فرقًا جوهريًا في علاج المريض وتوقعات سير المرض؛ ومن الأمثلة على ذلك السائل النخاعي الشوكي لالتهاب السحايا والسائل الزلالي لالتهاب المفاصل الإنتاني . [ 11 ] [ 12 ]

آليات التلوين

بكتيريا موجبة الجرام مصبوغة باللون الأرجواني (يسار) وبكتيريا سالبة الجرام مصبوغة باللون الوردي (يمين)

تتميز البكتيريا موجبة الجرام بجدار خلوي سميك يشبه الشبكة مصنوع من الببتيدوغليكان (يشكل 50-90% من غلاف الخلية)، ولذلك تتلون باللون الأرجواني عند استخدام صبغة الكريستال البنفسجي. أما البكتيريا سالبة الجرام، فلها طبقة أرق (10% من غلاف الخلية)، لذا لا تحتفظ بالصبغة الأرجوانية وتتلون باللون الوردي عند استخدام صبغة السافرانين. تتكون صبغة غرام من أربع خطوات أساسية:

  1. تطبيق صبغة أولية ( بنفسجي الكريستال ) على مسحة مثبتة حرارياً من مزرعة بكتيرية. يقتل التثبيت الحراري بعض البكتيريا، ولكنه يُستخدم في الغالب لتثبيت البكتيريا على الشريحة حتى لا تُشطف أثناء عملية التلوين.
  2. إضافة اليود ، الذي يرتبط بالبنفسجي البلوري ويحبسه داخل الخلية
  3. إزالة اللون بسرعة باستخدام الإيثانول أو الأسيتون
  4. التلوين المضاد باستخدام السافرانين . [ 13 ] يُستخدم كاربول فوكسين أحيانًا كبديل للسافرانين لأنه يصبغ البكتيريا اللاهوائية بشكل أكثر كثافة، ولكنه أقل شيوعًا في الاستخدام كصبغة مضادة. [ 14 ]
ملخص صبغة غرام
تطبيقكاشفلون الخلية
موجبة غرامبكتيريا سالبة الغرام
الصبغة الأساسيةالبنفسجي البلوريأرجوانيأرجواني
صياداليودأرجوانيأرجواني
مزيل اللونالكحول / الأسيتونأرجوانيعديم اللون
صبغة مضادةسافرانين / كاربول فوكسينأرجوانيوردي أو أحمر

يتفكك البنفسجي البلوري (CV) في المحاليل المائية إلى CV +والكلوريد ( Cl− )تخترق هذه الأيونات جدار الخلية لكل من الخلايا موجبة الجرام وسالبة الجرام. CV +يتفاعل الأيون مع المكونات سالبة الشحنة في الخلايا البكتيرية ويصبغ الخلايا باللون الأرجواني. [ 15 ]

اليوديد ( I −أو يتفاعل I − 3 ) مع CV +ويُشكّل معقدات كبيرة من البنفسجي البلوري واليود (CV-I) داخل الطبقات الداخلية والخارجية للخلية. يُشار إلى اليود غالبًا باسم المُثبِّت ، ولكنه في الواقع عامل حاصر يمنع إزالة معقد CV-I، وبالتالي يُلوِّن الخلية. [ 16 ]

عند إضافة مُزيل لون مثل الكحول أو الأسيتون، يتفاعل مع دهون غشاء الخلية. [ 17 ] تفقد الخلية سالبة الغرام غشائها الخارجي من عديد السكاريد الدهني، وتبقى طبقة الببتيدوغليكان الداخلية مكشوفة. تُغسل معقدات البنفسج البلوري-1 من الخلية سالبة الغرام مع الغشاء الخارجي. [ 18 ] في المقابل، تُصاب الخلية موجبة الغرام بالجفاف عند معالجتها بالإيثانول. تُحاصر معقدات البنفسج البلوري-1 الكبيرة داخل الخلية موجبة الغرام نظرًا لطبيعة الببتيدوغليكان متعددة الطبقات. [ 18 ] تُعد خطوة إزالة اللون بالغة الأهمية ويجب ضبط توقيتها بدقة؛ إذ يُزال صبغ البنفسج البلوري من كلٍ من الخلايا موجبة وسالبة الغرام إذا تُرك عامل إزالة اللون لفترة طويلة جدًا (ثوانٍ معدودة). [ 19 ]

بعد إزالة اللون، تبقى الخلية موجبة الغرام بنفسجية اللون، بينما تفقد الخلية سالبة الغرام لونها البنفسجي. [ 19 ] يُضاف الصبغ المضاد، وهو عادةً سافرانين موجب الشحنة أو فوكسين قاعدي، في النهاية لإضفاء لون وردي أو أحمر على البكتيريا سالبة الغرام التي أُزيل لونها. [ 3 ] [ 20 ] تمتص كل من البكتيريا موجبة الغرام وسالبة الغرام الصبغ المضاد. مع ذلك، لا يُرى الصبغ المضاد على البكتيريا موجبة الغرام بسبب صبغة الكريستال البنفسجي الداكنة.

أمثلة

البكتيريا موجبة الجرام

صبغة غرام لبكتيريا المكورات العقدية موجبة الغرام محاطة بخلايا صديدية

تتميز البكتيريا موجبة الجرام عمومًا بغشاء واحد ( أحادي الغشاء ) محاط بطبقة سميكة من الببتيدوغليكان. ويتبع هذه القاعدة شعبتان: العصيات (باستثناء فئتي الميكوبلازما والنيجاتيفيكوتس ) والأكتينوميسيتوتا . [ 9 ] [ 21 ] في المقابل، فإن أفراد شعبة الكلوروفليكسوتا (البكتيريا الخضراء غير الكبريتية) أحادية الغشاء، ولكنها تمتلك طبقة رقيقة من الببتيدوغليكان أو غائبة (فئة ديهالوكوكويديت ) ، ويمكن أن تكون صبغتها سلبية أو إيجابية أو غير محددة؛ أما أفراد شعبة الدينوكوكوتا فتصبغ صبغتها إيجابية، ولكنها ثنائية الغشاء ذات طبقة سميكة من الببتيدوغليكان. [ 9 ] [ 21 ]

The cell wall's strength is enhanced by teichoic acids, glycopolymeric substances embedded within the peptidoglycan. Teichoic acids play multiple roles, such as generating the cell's net negative charge, contributing to cell wall rigidity and shape maintenance, and aiding in cell division and resistance to various stressors, including heat and salt. Despite the density of the peptidoglycan layer, it remains relatively porous, allowing most substances to permeate. For larger nutrients, Gram-positive bacteria utilize exoenzymes, secreted extracellularly to break down macromolecules outside the cell.[22]

Historically, the gram-positive forms made up the phylumFirmicutes, a name now used for the largest group. It includes many well-known genera such as Lactobacillus, Bacillus, Listeria, Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, and Clostridium.[23] It has also been expanded to include the Mollicutes, bacteria such as Mycoplasma and Thermoplasma that lack cell walls and so cannot be Gram-stained, but are derived from such forms.[24]

Some bacteria have cell walls which are particularly adept at retaining stains. These will appear positive by Gram stain even though they are not closely related to other gram-positive bacteria. These are called acid-fast bacteria, and can only be differentiated from other gram-positive bacteria by special staining procedures.[25]

Gram-negative bacteria

Gram negative Neisseria gonorrhoeae and pus cells

Gram-negative bacteria generally possess a thin layer of peptidoglycan between two membranes (diderm).[26]Lipopolysaccharide (LPS) is the most abundant antigen on the cell surface of most gram-negative bacteria, contributing up to 80% of the outer membrane of E. coli and Salmonella.[27] These LPS molecules, consisting of the O-antigen or O-polysaccharide, core polysaccharide, and lipid A, serve multiple functions including contributing to the cell's negative charge and protecting against certain chemicals. LPS's role is critical in host-pathogen interactions, with the O-antigen eliciting an immune response and lipid A acting as an endotoxin.[22]

بالإضافة إلى ذلك، يعمل الغشاء الخارجي كحاجز انتقائي، تنظمه بروتينات البورين، وهي بروتينات غشائية تُشكل مسامًا تسمح بمرور جزيئات محددة. وتحتوي المساحة بين غشاء الخلية والغشاء الخارجي، والمعروفة باسم الحيز المحيط بالبلازما، على إنزيمات خاصة بهذا الحيز لمعالجة المغذيات. ويُعد بروتين براون الدهني مكونًا هيكليًا هامًا يربط طبقة الببتيدوغليكان بالغشاء الخارجي، مما يُضفي مزيدًا من الثبات والقوة على جدار الخلية البكتيرية. [ 22 ]

معظم شعب البكتيريا سالبة الغرام، بما في ذلك البكتيريا الزرقاء ، وبكتيريا الكبريت الخضراء ، ومعظم أنواع الزائفة (باستثناء بعض أفراد رتبة الريكتسيات والبكتيريا المعوية التي تعيش داخل الحشرات ). [ 9 ] [ 21 ]

البكتيريا المتغيرة غرام والبكتيريا غير المحددة غرام

تُظهر بعض البكتيريا، بعد تلوينها بصبغة غرام، نمطًا متغيرًا لصبغة غرام: حيث تُلاحظ مزيج من الخلايا الوردية والبنفسجية. [ 18 ] [ 28 ] في مزارع بكتيريا العصوية (Bacillus) والبيوتيريفيبرايو (Butyrivibrio ) والمطثية (Clostridium) ، يتزامن انخفاض سُمك الببتيدوغليكان أثناء النمو مع زيادة في عدد الخلايا التي تُصبغ بصبغة غرام السالبة. [ 28 ] بالإضافة إلى ذلك، في جميع أنواع البكتيريا المصبوغة بصبغة غرام، قد يؤثر عمر المزرعة على نتائج التلوين. [ 28 ]

لا تستجيب البكتيريا غير المحددة لصبغة غرام بشكل متوقع، وبالتالي لا يمكن تصنيفها على أنها موجبة أو سالبة الغرام. ومن الأمثلة على ذلك العديد من أنواع المتفطرة ، بما في ذلك المتفطرة البقرية ، والمتفطرة الجذامية ، والمتفطرة السلية ، حيث تُعدّ المتفطرتان الأخيرتان المسببتين لمرضي الجذام والسل على التوالي. [ 29 ] [ 30 ] تفتقر بكتيريا جنس الميكوبلازما إلى جدار خلوي يحيط بأغشيتها الخلوية ، [ 11 ] مما يعني أنها لا تتصبغ بطريقة غرام، كما أنها مقاومة للمضادات الحيوية التي تستهدف تخليق الجدار الخلوي. [ 31 ] [ 32 ]

ملاحظة إملائية

يُشتق مصطلح "صبغة غرام" من اسم عائلة هانز كريستيان غرام ؛ ولذلك يُكتب اسم العائلة (غرام) بحرف كبير، بينما يُكتب الاسم الشائع (صبغة) بحرف صغير، كما هو معتاد في المصطلحات العلمية. [ 33 ] يمكن أن تكون الأحرف الأولى من كلمتي "موجب غرام" و "سالب غرام" ، وهما صفتان مشتقتان من اسمين ، إما حرف "غ" كبير أو حرف "غ" صغير ، وذلك حسب دليل الأسلوب المعتمد (إن وُجد) في الوثيقة. يستخدم مركز السيطرة على الأمراض والوقاية منها في الولايات المتحدة الأمريكية أسلوب الأحرف الصغيرة ، كما تستخدمه أنظمة أسلوب أخرى مثل أسلوب الجمعية الطبية الأمريكية . [ 34 ] قد تستخدم القواميس الأحرف الصغيرة، [ 35 ] [ 36 ] أو الأحرف الكبيرة، [ 37 ] [ 38 ] [ 39 ] [ 40 ] أو كليهما. [ 41 ] [ 42 ] كما يشيع استخدام الأحرف الكبيرة في كتابة "موجب غرام" أو "سالب غرام" في العديد من المقالات والمنشورات العلمية . [ 42 ] [ 43 ] [ 44 ] عند تقديم المقالات إلى المجلات، قد تطبق كل مجلة أسلوبها الخاص على النسخة النهائية (ما بعد الطباعة) أو لا تطبقه . أما النسخ الأولية ( ما قبل الطباعة) فتحتوي على الأسلوب الذي استخدمه المؤلف. حتى أنظمة الأسلوب التي تستخدم الأحرف الصغيرة لصفات "موجب غرام" و "سالب غرام" لا تزال تستخدم الأحرف الكبيرة عادةً لكلمة "صبغة غرام" .

انظر أيضاً

مراجع

  1. 1 2 "صبغة غرام: اختبار طبي من MedlinePlus" . medlineplus.gov .
  2. ↑ كولكو، ر. (2006). صبغة غرام . البروتوكولات الحالية في علم الأحياء الدقيقة. المجلد. الملحق 3. الصفحات. الملحق 3ج. doi : 10.1002/9780471729259.mca03cs00 . ISBN   978-0-471-72925-9PMID 18770544 . S2CID 32452815 .​  
  3. 1 2 بيفريدج، تي جيه؛ ديفيز، جيه إيه (نوفمبر 1983). "الاستجابات الخلوية لبكتيريا العصوية الرقيقة والإشريكية القولونية لصبغة غرام" . مجلة علم البكتيريا . 156 (2): 846-58 . doi : 10.1128/JB.156.2.846-858.1983 . PMC 217903. PMID 6195148 .  
  4. ↑ ليبنسون، ل.؛ ماكيلروي، أ.ب. (1955-07-01). "حول آلية صبغة غرام" . مجلة الأمراض المعدية . 97 (1): 22-26 . doi : 10.1093/infdis/97.1.22 . ISSN 0022-1899 . PMID 13242849 .  
  5. ↑ أوستريان، ر. (1960). " صبغة غرام وأسباب الالتهاب الرئوي الفصي: ملاحظة تاريخية" . مراجعات بكتيرية . 24 (3): 261-265 . doi : 10.1128/MMBR.24.3.261-265.1960 . PMC 441053. PMID 13685217 .  
  6. 1 2 بارثولوميو، جيمس دبليو؛ ميتوير، تود (مارس 1952). " صبغة غرام" . مراجعات علم البكتيريا . 16 (1): 1-29 . doi : 10.1128/br.16.1.1-29.1952 . ISSN 0005-3678 . PMC 180726. PMID 14925025 .   
  7. ^ غرام ، هانز كريستيان (1884). "Über die Isolierte Färbung der Schizomyceten in Schnitt- und Trockenpräparaten". Fortschritte der Medizin (في المانيا). 2 : 185 - 189.الترجمة الإنجليزية في: بروك، تي دي (1999). معالم بارزة في علم الأحياء الدقيقة 1546-1940 ( الطبعة الثانية). مطبعة الجمعية الأمريكية لعلم الأحياء الدقيقة. الصفحات 215-218 . رقم ISBN   978-1-55581-142-6.تتوفر الترجمة أيضًا على: بروك، تي دي "رواد في علوم المختبرات الطبية: كريستيان غرام 1884" . HOSLink.com . مؤرشف من الأصل في 10 أغسطس 2016. تم الاطلاع عليه في 27 يوليو 2010 .
  8. ↑ رايان، كيه جيه؛ راي، سي جي، محرران. (2004). شيريس في علم الأحياء الدقيقة الطبية ( الطبعة الرابعة). ماكجرو هيل. ص 232 وما بعدها. ISBN   978-0-8385-8529-0.
  9. 1 2 3 4 مادجان، إم تي؛ مارتينكو، جيه؛ باركر، جيه (2004). بيولوجيا الكائنات الدقيقة لبروك ( الطبعة العاشرة). ليبينكوت ويليامز وويلكنز. ISBN  978-0-13-066271-2.
  10. ↑ بيفريدج، تي جيه (2001). "استخدام صبغة غرام في علم الأحياء الدقيقة". التقنية الحيوية والكيمياء النسيجية . 76 (3): 111-118 . doi : 10.1080/714028139 . PMID 11475313 . 
  11. 1 2 رايان كيه جيه، راي سي جي (محرران) (2004). شيريس علم الأحياء الدقيقة الطبية ( الطبعة الرابعة). ماكجرو هيل. الصفحات 409-412 . ISBN   978-0-8385-8529-0.{{cite book}}له |author=اسم عام ( مساعدة )
  12. ↑ سوغارد، م.؛ نورغارد، م.؛ شونهيدر، هـ. (2007). "الإبلاغ الأولي عن نتائج إيجابية لزراعة الدم: دقة عالية لتقرير صبغة غرام" . مجلة علم الأحياء الدقيقة السريرية . 45 (4): 1113-1117 . doi : 10.1128/JCM.02523-06 . PMC 1865800. PMID 17301283 .  
  13. ↑ بلاك، جاكلين ج. (1993). علم الأحياء الدقيقة: المبادئ والاستكشافات . برنتيس هول. ص 65. 
  14. ↑ "شركة المواد الكيميائية الطبية" . Med-Chem.com . تم الاطلاع عليه بتاريخ 9 مارس 2016 .
  15. ↑ ليبوف، مايكل (2014). نظرية وتطبيق مختبر علم الأحياء الدقيقة ( الطبعة الثالثة). إنجلوود، كولورادو: شركة مورتون للنشر. ص 105. ISBN   978-1-61731-280-9.
  16. ↑ "نظرية البقع - ما ليس مُثبِّتًا" . StainsFile.info . مؤرشف من الأصل في 9 مارس 2016. تم الاطلاع عليه في 9 مارس 2016 .
  17. ↑ "صبغة غرام" . ميكروباغز . كلية أوستن المجتمعية. مؤرشف من الأصل بتاريخ 26-05-2017 . تم الاسترجاع بتاريخ 26-05-2017 .
  18. 1 2 3 تيم، ساندل (21 أكتوبر 2015). علم الأحياء الدقيقة الصيدلانية: أساسيات ضمان الجودة ومراقبة الجودة . إلسيفير ساينس. ISBN 978-0-08-100022-9. OCLC 923807961 . 
  19. 1 2 هاردي، جاي؛ ماريا، سانتا. "بقعة الجدة العرضية" (ملف PDF) . تشخيصات هاردي . مؤرشف (ملف PDF) من الأصل بتاريخ 24-03-2017.
  20. ↑ ديفيز، جيه إيه؛ أندرسون، جي كيه؛ بيفريدج، تي جيه؛ كلارك، إتش سي (نوفمبر 1983). " الآلية الكيميائية لصبغة غرام وتخليق علامة جديدة معتمة للإلكترونات للمجهر الإلكتروني، تحل محل مادة اليود المثبتة للصبغة" . مجلة علم البكتيريا . 156 (2): 837-845 . doi : 10.1128/JB.156.2.837-845.1983 . PMC 217902. PMID 6195147 .  
  21. 1 2 3 برينر، دون جيه؛ كريج، نويل آر؛ ستالي، جيمس تي (26 يوليو 2005) [1984]. غاريتي، جورج إم (محرر). مقالات تمهيدية . دليل بيرجي لعلم تصنيف البكتيريا. المجلد 2أ ( الطبعة الثانية). نيويورك: سبرينغر. ص 304. ISBN    978-0-387-24143-2رقم المكتبة البريطانية: GBA561951.
  22. 1 2 3 بروسليند، ليندا (2019-08-01). علم الأحياء الدقيقة العام . جامعة ولاية أوريغون.
  23. ↑ غالبرين، مايكل ي. (27 ديسمبر 2013). " تنوع جينوم البكتيريا الموجبة لصبغة غرام المُكوِّنة للأبواغ" . مجلة ميكروبيولوجي سبكتروم . 1 (2): TBS-0015-2012-. doi : 10.1128/microbiolspectrum.tbs-0015-2012 . ISSN 2165-0497 . PMC 4306282. PMID 26184964 .   
  24. ↑ هاشم، حمس ح. "علم الأحياء الدقيقة الطبية العملي" . جامعة القادسية . مؤرشف من الأصل في 14 فبراير 2019.
  25. ↑ "البقعة المقاومة للأحماض" . www2.Highlands.edu . كلية جورجيا هايلاندز. مؤرشف من الأصل في 10 يونيو 2017. تم الاطلاع عليه في 10 يونيو 2017 .
  26. ↑ ميغريان د، طيب ن، ويتوينوفسكي ج، غريبالدو س (2020). "غشاء واحد أم غشاءان؟ البكتيريا ثنائية الغشاء من نوع Firmicutes تتحدى التصنيف بين البكتيريا موجبة الغرام وسالبة الغرام" . علم الأحياء الدقيقة الجزيئي . 113 (3): 659-671 . doi : 10.1111/mmi.14469 . PMID 31975449. S2CID 210882600 .  
  27. ↑ أفيلا-كالديرون إي دي، رويز-بالما إم دي، كونتريراس-رودريغيز إيه (2021). "حويصلات الغشاء الخارجي للبكتيريا سالبة الغرام: نظرة على التكوين الحيوي" . فرونتيرز إن ميكروبيولوجي . 12 557902. doi : 10.3389/fmicb.2021.557902 . PMC 7969528. PMID 33746909 .  
  28. 1 2 3 بيفريدج، تيري ج. (مارس 1990). " آلية تباين غرام في أنواع مختارة من البكتيريا" . مجلة علم البكتيريا . 172 (3): 1609-1620 . doi : 10.1128/jb.172.3.1609-1620.1990 . PMC 208639. PMID 1689718 .  
  29. ↑ بلاك، جاكلين (2012). علم الأحياء الدقيقة: المبادئ والاستكشاف ( الطبعة الثامنة). جون وايلي وأولاده. ص 68. ISBN   978-0-470-54109-8.
  30. ↑ رينولدز، ج.؛ مويس، ر.ب.؛ بريكويل، د.ب. (2009). التلوين التفاضلي للبكتيريا: صبغة مقاومة للأحماض . البروتوكولات الحالية في علم الأحياء الدقيقة. المجلد 15. ص. الملحق 3H. doi : 10.1002/9780471729259.mca03hs15 . ISBN   978-0-471-72925-9PMID 19885935 . S2CID 45685776 .​  
  31. ↑ لي إي إتش، وينتر إتش إل، فان ديل جيه إم، ميتزيمايكرز جيه دي، أريندز جيه بي (ديسمبر 2012). "تشخيص وعلاج التهاب السحايا بالميكوبلازما هومينيس لدى البالغين". المجلة الدولية لعلم الأحياء الدقيقة الطبية . 302 ( 7-8 ): 289-292 . doi : 10.1016/j.ijmm.2012.09.003 . PMID 23085510 . 
  32. ↑ غوتييه-بوشاردون، أ. ف. (يوليو 2018). "مقاومة المضادات الحيوية في أنواع الميكوبلازما" . مجلة ميكروبيولوجي سبيكتروم . 6 (4): 425-446 . doi : 10.1128/microbiolspec.ARBA-0030-2018 . ISBN 978-1-55581-979-8. PMC 11633602 . PMID 30003864 . S2CID 51616821 .   
  33. ↑ وادينغهام، آن (28 أغسطس 2014). قواعد هارت الجديدة: دليل أسلوب أكسفورد . مطبعة جامعة أكسفورد. ص 105. ISBN  978-0-19-957002-7.
  34. ↑ "الاستخدام المفضل" . دليل أسلوب الأمراض المعدية الناشئة . مراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها .
  35. ↑ "قاموس دورلاند الطبي المصور" ( الطبعة الثانية والثلاثون). إلسيفير . تم الاطلاع عليه بتاريخ 5 يونيو 2020 . استخدم مصطلحات بحث مثل gram-negative.
  36. ↑ "موجب الجرام" ، قاموس ميريام-ويبستر ، موسوعة بريتانيكا، المحدودة.
  37. ↑ "موجبة غرام" . CollinsDictionary.com . HarperCollins.
  38. ↑ "صبغة غرام" . Lexico.com . مطبعة جامعة أكسفورد. مؤرشف من الأصل في 5 يونيو 2020.
  39. ↑ "موجبة غرام" . MedicineNet .
  40. ↑ "غرام سالب/موجب" . BusinessDictionary.com . مؤرشف من الأصل بتاريخ 20-10-2016 . تم الاطلاع عليه بتاريخ 20-10-2016 .
  41. ↑ "موجب الغرام أو موجب الغرام" . قاموس التراث الأمريكي . هوتون ميفلين.
  42. 1 2 "موجب غرام" . Dictionary.com .
  43. ↑ براون، ليزا؛ وولف، جولي م.؛ برادوس-روزاليس، رافائيل؛ كاساديفال، أرتورو (2015). "عبر الجدار: الحويصلات خارج الخلوية في البكتيريا موجبة الجرام، والمتفطرات، والفطريات" . مجلة نيتشر ريفيوز مايكروبيولوجي . 13 (10): 620-630 . doi : 10.1038/nrmicro3480 . PMC 4860279. PMID 26324094 .  
  44. ↑ مولر، كريستين ل. (12 يونيو 2015). "الكشف عن البكتيريا سالبة الجرام". مجلة ساينس . 348 (6240): 1218. doi : 10.1126/science.348.6240.1218-o .