الحمض النووي المؤتلف

📅 آخر تحديث: ٢٦ يوليو ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٢٦ يوليو ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 2 صور
الموسوعة الحرة
بناء الحمض النووي المؤتلف، حيث يتم إدخال قطعة من الحمض النووي الغريب في ناقل بلازميدي. في هذا المثال، يتم تعطيل الجين المشار إليه باللون الأبيض عند إدخال قطعة الحمض النووي الغريب.

جزيئات الحمض النووي المؤتلف ( rDNA ) هي جزيئات الحمض النووي التي يتم تكوينها بواسطة طرق المختبر لإعادة التركيب الجيني (مثل الاستنساخ الجزيئي ) والتي تجمع المواد الوراثية من مصادر متعددة، مما يؤدي إلى إنشاء تسلسلات لا يمكن العثور عليها في الجينوم بطريقة أخرى .

الحمض النووي المُعاد تركيبه هو الاسم العام لقطعة من الحمض النووي تم إنشاؤها عن طريق دمج قطعتين أو أكثر من مصادر مختلفة. يُعدّ الحمض النووي المُعاد تركيبه ممكنًا لأن جزيئات الحمض النووي من جميع الكائنات الحية تشترك في نفس التركيب الكيميائي، وتختلف فقط في تسلسل النيوكليوتيدات . تُسمى جزيئات الحمض النووي المُعاد تركيبه أحيانًا بالحمض النووي الكيميري لأنها قد تتكون من مواد من نوعين مختلفين، مثل الكيميرا الأسطورية . تستخدم تقنية الحمض النووي المُعاد تركيبه تسلسلات متناظرة ، مما يؤدي إلى إنتاج نهايات لاصقة وغير لاصقة .

يمكن أن تكون تسلسلات الحمض النووي المستخدمة في بناء جزيئات الحمض النووي المؤتلف من أي نوع من الكائنات الحية . على سبيل المثال، يمكن دمج الحمض النووي النباتي مع الحمض النووي البكتيري، أو دمج الحمض النووي البشري مع الحمض النووي الفطري. إضافةً إلى ذلك، يمكن إنشاء تسلسلات حمض نووي غير موجودة في الطبيعة عن طريق التخليق الكيميائي للحمض النووي وإدراجها في جزيئات الحمض النووي المؤتلف. باستخدام تقنية الحمض النووي المؤتلف والحمض النووي الاصطناعي، يمكن إنشاء أي تسلسل حمض نووي وإدخاله في الكائنات الحية.

تُسمى البروتينات الناتجة عن التعبير عن الحمض النووي المؤتلف داخل الخلايا الحية بالبروتينات المؤتلفة . عند إدخال الحمض النووي المؤتلف الذي يُشفّر بروتينًا ما إلى كائن حي مُضيف، لا يُنتج البروتين المؤتلف بالضرورة. [ 1 ] يتطلب التعبير عن البروتينات الغريبة استخدام نواقل تعبير متخصصة، وغالبًا ما يستلزم إعادة هيكلة كبيرة بواسطة تسلسلات الترميز الغريبة. [ 2 ]

يختلف الحمض النووي المؤتلف عن إعادة التركيب الجيني في أن الأول ينتج عن طرق اصطناعية بينما الأخير عملية بيولوجية طبيعية تؤدي إلى إعادة خلط تسلسلات الحمض النووي الموجودة في جميع الكائنات الحية تقريبًا.

إنتاج

عملية استنساخ الجينات

الاستنساخ الجزيئي هو عملية مخبرية تُستخدم لإنتاج الحمض النووي المؤتلف. [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ] وهو أحد أكثر طريقتين استخدامًا، إلى جانب تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، لتوجيه تضاعف أي تسلسل محدد من الحمض النووي يختاره الباحث. ثمة فرقان أساسيان بين الطريقتين. الأول هو أن الاستنساخ الجزيئي يتضمن تضاعف الحمض النووي داخل خلية حية، بينما يُضاعف تفاعل البوليميراز المتسلسل الحمض النووي في أنبوب اختبار، بعيدًا عن الخلايا الحية. أما الفرق الثاني فهو أن الاستنساخ يتضمن قص ولصق تسلسلات الحمض النووي، بينما يُضخّم تفاعل البوليميراز المتسلسل الحمض النووي عن طريق نسخ تسلسل موجود. [ 7 ]

يتطلب تكوين الحمض النووي المؤتلف ناقل استنساخ ، وهو جزيء من الحمض النووي يتضاعف داخل الخلية الحية. تُشتق النواقل عمومًا من البلازميدات أو الفيروسات ، وتمثل أجزاءً صغيرة نسبيًا من الحمض النووي تحتوي على الإشارات الجينية اللازمة للتضاعف، بالإضافة إلى عناصر إضافية لتسهيل إدخال الحمض النووي الغريب، وتحديد الخلايا التي تحتوي على الحمض النووي المؤتلف، وعند الاقتضاء، التعبير عن الحمض النووي الغريب. يعتمد اختيار الناقل للاستنساخ الجزيئي على اختيار الكائن المضيف، وحجم الحمض النووي المراد استنساخه، وما إذا كان سيتم التعبير عن الحمض النووي الغريب وكيفية ذلك. [ 8 ] يمكن دمج أجزاء الحمض النووي باستخدام طرق متنوعة، مثل استنساخ إنزيمات التقييد/الربط أو تجميع جيبسون . [ 9 ] [ 10 ] [ 11 ]

في بروتوكولات الاستنساخ القياسية، يتضمن استنساخ أي جزء من الحمض النووي سبع خطوات أساسية: (1) اختيار الكائن المضيف وناقل الاستنساخ، (2) تحضير الحمض النووي للناقل، (3) تحضير الحمض النووي المراد استنساخه، (4) إنشاء الحمض النووي المؤتلف، (5) إدخال الحمض النووي المؤتلف إلى الكائن المضيف، (6) اختيار الكائنات الحية التي تحتوي على الحمض النووي المؤتلف، و(7) فحص المستنسخات التي تحتوي على إدخالات الحمض النووي والخصائص البيولوجية المطلوبة. [ 6 ]

التعبير الجيني للحمض النووي

يتطلب التعبير عن الحمض النووي نقل الجينات إلى خلايا مضيفة مناسبة. وعادةً ما تُستخدم خلايا بكتيرية أو خميرة أو حشرية أو ثديية (مثل خلايا الكلى الجنينية البشرية أو خلايا مبيض الهامستر الصيني ) كخلايا مضيفة. [ 12 ]

بعد زرع الحمض النووي الغريب الموجود في بنية الحمض النووي المؤتلف في الكائن المضيف، قد يُعبَّر عنه أو لا . أي قد يُنسخ الحمض النووي ببساطة دون تعبير، أو قد يُنسخ ويُترجم ، فينتج بروتين مؤتلف. عمومًا، يتطلب التعبير عن جين غريب إعادة هيكلة الجين ليشمل التسلسلات اللازمة لإنتاج جزيء mRNA الذي يمكن استخدامه بواسطة جهاز الترجمة في الكائن المضيف (مثل المحفز ، وإشارة بدء الترجمة ، ومنهي النسخ ). [ 13 ] يمكن إجراء تغييرات محددة على الكائن المضيف لتحسين التعبير عن الجين الدخيل. إضافةً إلى ذلك، قد يلزم إجراء تغييرات على التسلسلات المشفرة أيضًا، لتحسين الترجمة، وجعل البروتين قابلًا للذوبان، وتوجيه البروتين المؤتلف إلى الموقع الخلوي أو خارج الخلوي المناسب، وتثبيت البروتين من التحلل. [ 14 ] [ 15 ] [ 16 ]

خصائص الكائنات الحية التي تحتوي على الحمض النووي المؤتلف

في معظم الحالات، تتمتع الكائنات الحية التي تحتوي على الحمض النووي المُعاد تركيبه بخصائص ظاهرية طبيعية ظاهريًا . أي أن مظهرها وسلوكها وعمليات الأيض لديها عادةً ما تبقى دون تغيير، والطريقة الوحيدة لإثبات وجود التسلسلات المُعاد تركيبها هي فحص الحمض النووي نفسه، وعادةً ما يتم ذلك باستخدام اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). [ 17 ] توجد استثناءات هامة، وسيتم مناقشتها لاحقًا.

إذا كانت تسلسلات الحمض النووي الريبوزي (rDNA) تشفر جينًا مُعبَّرًا عنه، فيمكن الكشف عن وجود منتجات الحمض النووي الريبوزي (RNA) و/أو البروتين للجين المُعاد تركيبه، عادةً باستخدام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) أو التهجين الغربي . [ 17 ] لا تُعد التغيرات الظاهرية الكبيرة هي القاعدة، إلا إذا تم اختيار الجين المُعاد تركيبه وتعديله لتوليد نشاط بيولوجي في الكائن المضيف. [ 18 ] تشمل الأنماط الظاهرية الإضافية التي قد تُصادف سميةً للكائن المضيف ناتجة عن منتج الجين المُعاد تركيبه، خاصةً إذا كان مُفرط التعبير أو مُعبَّرًا عنه داخل خلايا أو أنسجة غير مناسبة.

في بعض الحالات، قد يكون للحمض النووي المُعاد تركيبه آثار ضارة حتى لو لم يتم التعبير عنه. إحدى آليات حدوث ذلك هي التعطيل الإدخالي ، حيث يُدمج الحمض النووي المُعاد تركيبه في جين الخلية المضيفة. في بعض الحالات، يستخدم الباحثون هذه الظاهرة لتعطيل الجينات وتحديد وظيفتها البيولوجية وأهميتها. [ 19 ] آلية أخرى قد يؤثر بها إدخال الحمض النووي المُعاد تركيبه في الحمض النووي الصبغي على التعبير الجيني هي التنشيط غير المناسب لجينات الخلية المضيفة التي لم تكن مُعبرة سابقًا. قد يحدث هذا، على سبيل المثال، عندما يقع جزء من الحمض النووي المُعاد تركيبه يحتوي على مُحفز نشط بجوار جين خلية مضيفة كان صامتًا سابقًا، أو عندما يخضع جين خلية مضيفة يعمل على كبح التعبير الجيني للتعطيل الإدخالي بواسطة الحمض النووي المُعاد تركيبه.

تطبيقات الحمض النووي المؤتلف

يُستخدم الحمض النووي المُعاد تركيبه على نطاق واسع في مجالات التقنية الحيوية والطب والبحوث. واليوم، تُوجد البروتينات المُعاد تركيبها وغيرها من المنتجات الناتجة عن استخدام تقنية الحمض النووي في كل صيدلية تقريبًا، وعيادة طبيب أو طبيب بيطري، ومختبر فحص طبي، ومختبر أبحاث بيولوجية. إضافةً إلى ذلك، شقت الكائنات الحية المُعدّلة باستخدام تقنية الحمض النووي المُعاد تركيبه، فضلًا عن المنتجات المُشتقة منها، طريقها إلى العديد من المزارع، ومتاجر السوبر ماركت ، وخزائن الأدوية المنزلية ، وحتى متاجر الحيوانات الأليفة، مثل تلك التي تبيع أسماك GloFish وغيرها من الحيوانات المُعدّلة وراثيًا .

يُعدّ البحث الأساسي التطبيق الأكثر شيوعًا للحمض النووي المؤتلف، حيث تُشكّل هذه التقنية عنصرًا أساسيًا في معظم الأعمال الحالية في العلوم البيولوجية والطبية الحيوية. [ 17 ] يُستخدم الحمض النووي المؤتلف لتحديد الجينات ورسم خرائطها وتسلسلها، وتحديد وظائفها. وتُستخدم مجسات الحمض النووي المؤتلف في تحليل التعبير الجيني داخل الخلايا الفردية، وفي جميع أنسجة الكائنات الحية. كما تُستخدم البروتينات المؤتلفة على نطاق واسع ككواشف في التجارب المختبرية، ولإنتاج مجسات الأجسام المضادة لفحص تخليق البروتين داخل الخلايا والكائنات الحية. [ 4 ]

توجد العديد من التطبيقات العملية الإضافية للحمض النووي المؤتلف في الصناعة، وإنتاج الغذاء، والطب البشري والبيطري، والزراعة، والهندسة الحيوية. [ 4 ] وفيما يلي بعض الأمثلة المحددة.

الكيموسين المؤتلف

يُعد الكيموسين ، الموجود في المنفحة ، الإنزيم المسؤول عن تحلل الكازين- κ لإنتاج الكازين- κ- بارا والجليكوماكروببتيد ، وهي الخطوة الأولى في تكوين الجبن ، ثم الخثارة ، ثم مصل اللبن . [ 20 ] وكان أول مُضاف غذائي مُعدل وراثيًا يُستخدم تجاريًا. تقليديًا، كان المُصنّعون يستخلصون الكيموسين من المنفحة، وهي مُستحضر مُستخلص من المعدة الرابعة للعجول الرضيعة. قام العلماء بهندسة سلالة غير مُمرضة (K-12) من بكتيريا الإشريكية القولونية لإنتاج الإنزيم على نطاق واسع في المختبر. هذا الإنزيم المُعاد تركيبه، المُنتج ميكروبيولوجيًا، والمُطابق بنيويًا للإنزيم المُستخلص من العجول، أقل تكلفة ويُنتج بكميات وفيرة. اليوم، يُصنع حوالي 60% من الجبن الصلب في الولايات المتحدة باستخدام الكيموسين المُعدل وراثيًا. في عام 1990، منحت إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (FDA) إنزيم الكيموسين تصنيف " معترف به عمومًا على أنه آمن " (GRAS) بناءً على بيانات تُظهر أن الإنزيم آمن. [ 21 ]

الأنسولين البشري المؤتلف

لقد حلّ الأنسولين البشري المُعاد تركيبه محل الأنسولين المُستخلص من مصادر حيوانية (مثل الخنازير والأبقار) بشكل شبه كامل في علاج داء السكري من النوع الأول . وتُستخدم على نطاق واسع مجموعة متنوعة من مستحضرات الأنسولين المُعاد تركيبه. [ 22 ] يُصنّع الأنسولين المُعاد تركيبه ( أنسولين أسبارت ) عن طريق إدخال جين الأنسولين البشري في بكتيريا الإشريكية القولونية أو الخميرة ( Saccharomyces cerevisiae )، والتي بدورها تُنتج الأنسولين للاستخدام البشري. [ 23 ] يتطلب الأنسولين المُنتج بواسطة الإشريكية القولونية تعديلات إضافية بعد الترجمة (مثل الغلكزة)، بينما تستطيع الخمائر إجراء هذه التعديلات بنفسها نظرًا لكونها كائنات مضيفة أكثر تعقيدًا. وتكمن ميزة الأنسولين البشري المُعاد تركيبه في أن المرضى لا يُطوّرون استجابة مناعية ضده بعد الاستخدام المزمن، على عكس الأنسولين المُستخلص من مصادر حيوانية الذي يُحفّز جهاز المناعة البشري. [ 24 ]

هرمون النمو البشري المؤتلف (HGH، السوماتوتروبين)

يُعطى هرمون النمو البشري للمرضى الذين لا تُنتج غددهم النخامية كميات كافية لدعم النمو والتطور الطبيعيين. قبل توفر هرمون النمو البشري المُعاد تركيبه، كان يُستخلص هرمون النمو للاستخدام العلاجي من الغدد النخامية للجثث. أدت هذه الممارسة غير الآمنة إلى إصابة بعض المرضى بداء كروتزفيلد-جاكوب . قضى هرمون النمو البشري المُعاد تركيبه على هذه المشكلة، ويُستخدم الآن علاجيًا. [ 25 ] كما أُسيء استخدامه كدواء لتحسين الأداء من قِبل الرياضيين وغيرهم. [ 26 ] [ 27 ]

عامل التخثر الدموي المؤتلف الثامن

العامل الثامن هو بروتين لتخثر الدم يُعطى لمرضى الهيموفيليا ، وهو اضطراب نزفي، والذين لا يستطيعون إنتاج العامل الثامن بكميات كافية لدعم تخثر الدم الطبيعي. [ 28 ] قبل تطوير العامل الثامن المُعاد تركيبه، كان يُستخلص هذا البروتين من خلال معالجة كميات كبيرة من دم بشري من متبرعين متعددين، مما كان ينطوي على خطر كبير لانتقال الأمراض المعدية المنقولة بالدم ، مثل فيروس نقص المناعة البشرية والتهاب الكبد ب.

لقاح التهاب الكبد ب المؤتلف

يمكن السيطرة على عدوى التهاب الكبد ب بنجاح باستخدام لقاح التهاب الكبد ب المُعاد تركيبه ، والذي يحتوي على شكل من مستضد سطح فيروس التهاب الكبد ب المُنتَج في خلايا الخميرة. وكان تطوير هذا اللقاح خطوةً هامةً وضروريةً، لأن فيروس التهاب الكبد ب، على عكس فيروسات شائعة أخرى مثل فيروس شلل الأطفال ، لا يمكن زراعته في المختبر . [ 29 ]

الأجسام المضادة المؤتلفة

تُنتَج الأجسام المضادة المؤتلفة (rAbs) في المختبر باستخدام أنظمة التعبير القائمة على خلايا الثدييات. وارتباطها أحادي النوع بمستضد محدد يجعلها مؤهلة ليس فقط لأغراض البحث، بل أيضاً كخيارات علاجية ضد أنواع معينة من السرطان والعدوى وأمراض المناعة الذاتية. [ 30 ]

تشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية

طُوِّرت كلٌّ من الطرق الثلاث الشائعة الاستخدام لتشخيص عدوى فيروس نقص المناعة البشرية باستخدام الحمض النووي المُعاد تركيبه. يستخدم اختبار الأجسام المضادة ( ELISA أو Western blot ) بروتينًا مُعاد تركيبه من فيروس نقص المناعة البشرية للكشف عن وجود الأجسام المضادة التي ينتجها الجسم استجابةً للعدوى. أما اختبار الحمض النووي، فيبحث عن وجود المادة الوراثية لفيروس نقص المناعة البشرية باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل للنسخ العكسي (RT-PCR). وقد أُتيح تطوير اختبار RT-PCR بفضل الاستنساخ الجزيئي وتحليل تسلسل جينومات فيروس نقص المناعة البشرية. ( صفحة اختبار فيروس نقص المناعة البشرية من مراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها في الولايات المتحدة).

الأرز الذهبي

الأرز الذهبي هو نوع مُعدّل وراثيًا من الأرز، تم هندسته لإنتاج الإنزيمات المسؤولة عن تخليق بيتا كاروتين . [ 18 ] يُبشّر هذا النوع من الأرز بإمكانية كبيرة للحد من انتشار نقص فيتامين (أ) بين سكان العالم. [ 31 ] لا يُستخدم الأرز الذهبي حاليًا، بانتظار حلّ المسائل التنظيمية ومسائل الملكية الفكرية. [ 32 ] وافقت الفلبين على زراعة الأرز الذهبي للاستهلاك الغذائي والعلفي والتجاري، ولكن توقف إنتاجه منذ ذلك الحين. وقد توقف إنتاجه بعد قرار محكمة الاستئناف عام 2024 بإلغاء تصريح السلامة البيولوجية الخاص به. [ 33 ]

محاصيل مقاومة لمبيدات الأعشاب

تم تطوير أصناف تجارية من محاصيل زراعية هامة (بما في ذلك فول الصويا والذرة الرفيعة والكانولا والبرسيم والقطن) تحتوي على جين مُعاد التركيب يُكسبها مقاومة لمبيد الأعشاب غليفوسات (الاسم التجاري راوند أب )، مما يُسهل مكافحة الأعشاب الضارة باستخدام الغليفوسات. [ 34 ] وتُستخدم هذه المحاصيل تجارياً على نطاق واسع في العديد من البلدان.

محاصيل مقاومة للحشرات

بكتيريا Bacillus thuringiensis هي بكتيريا تُنتج بشكل طبيعي بروتينًا ( سم Bt ) ذو خصائص مبيدة للحشرات. [ 31 ] وقد استُخدمت هذه البكتيريا في المحاصيل الزراعية كاستراتيجية لمكافحة الحشرات لسنوات عديدة، وانتشر هذا الأسلوب على نطاق واسع في الزراعة والبستنة. ومؤخرًا، طُوّرت نباتات تُعبّر عن شكل مُعاد التركيب من البروتين البكتيري، والذي قد يُسهم بفعالية في مكافحة بعض الحشرات المفترسة. إلا أن المشكلات البيئية المرتبطة باستخدام هذه المحاصيل المُعدّلة وراثيًا لم تُحلّ بشكل كامل. [ 35 ]

تاريخ

طُرحت فكرة الحمض النووي المؤتلف لأول مرة من قِبل بيتر لوبان، وهو طالب دراسات عليا لدى البروفيسور ديل كايزر في قسم الكيمياء الحيوية بكلية الطب بجامعة ستانفورد. [ 36 ] ظهرت أولى المنشورات التي تصف الإنتاج الناجح والتضاعف داخل الخلايا للحمض النووي المؤتلف في عامي 1972 و1973، من ستانفورد وجامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو . [ 37 ] [ 38 ] [ 39 ] [ 40 ] في عام 1980، مُنح بول بيرغ ، الأستاذ في قسم الكيمياء الحيوية بجامعة ستانفورد وأحد مؤلفي إحدى الأوراق البحثية الأولى [ 37 ] ، جائزة نوبل في الكيمياء لعمله على الأحماض النووية "مع التركيز بشكل خاص على الحمض النووي المؤتلف". تقاسم كل من فيرنر أربر وهاملتون سميث ودانيال ناثانز جائزة نوبل في الطب أو علم وظائف الأعضاء لعام 1978 لاكتشافهم إنزيمات القطع المحددة التي حسّنت تقنيات تقنية الحمض النووي المؤتلف.

تقدمت جامعة ستانفورد بطلب للحصول على براءة اختراع أمريكية للحمض النووي المؤتلف في 4 نوفمبر 1974، وذكرت أن المخترعين هما هربرت دبليو. بوير (أستاذ في جامعة كاليفورنيا، سان فرانسيسكو ) وستانلي إن. كوهين (أستاذ في جامعة ستانفورد )؛ وقد مُنحت هذه البراءة، رقم US 4,237,224A، في 2 ديسمبر 1980. [ 41 ] [ 42 ] وكان أول دواء مرخص تم إنتاجه باستخدام تقنية الحمض النووي المؤتلف هو الأنسولين البشري، الذي طورته شركة جينينتيك وحصلت شركة إيلي ليلي على ترخيصه . [ 43 ]

الجدل

أدرك العلماء الذين ساهموا في تطوير تقنيات الحمض النووي المؤتلف في البداية، احتمالية امتلاك الكائنات الحية الحاملة لهذا الحمض خصائص غير مرغوب فيها أو خطيرة. وفي مؤتمر أسيلومار للحمض النووي المؤتلف عام ١٩٧٥ ، نوقشت هذه المخاوف، وبدأ تعليق طوعي لأبحاث الحمض النووي المؤتلف للتجارب التي اعتُبرت محفوفة بالمخاطر. وقد التزم بهذا التعليق على نطاق واسع حتى وضعت المعاهد الوطنية للصحة في الولايات المتحدة مبادئ توجيهية رسمية لأبحاث الحمض النووي المؤتلف وأصدرتها. واليوم، لا تُعتبر جزيئات الحمض النووي المؤتلف والبروتينات المؤتلفة خطيرة في العادة. ومع ذلك، لا تزال هناك مخاوف بشأن بعض الكائنات الحية التي تُنتج الحمض النووي المؤتلف، لا سيما عند خروجها من المختبر ودخولها إلى البيئة أو السلسلة الغذائية. وتُناقش هذه المخاوف في المقالات المتعلقة بالكائنات المعدلة وراثيًا والجدل الدائر حول الأغذية المعدلة وراثيًا . علاوة على ذلك، ثمة مخاوف بشأن المنتجات الثانوية في إنتاج المستحضرات الصيدلانية الحيوية، حيث ينتج عن الحمض النووي المؤتلف منتجات بروتينية محددة. يُعدّ المنتج الثانوي الرئيسي، والذي يُطلق عليه اسم بروتين الخلية المضيفة ، ناتجًا عن نظام التعبير الجيني في الخلية المضيفة، ويشكل خطرًا على صحة المريض والبيئة بشكل عام. [ 44 ] [ 45 ]

انظر أيضاً

مراجع

  1. ^ روسانو، جيرمان إل. سيكاريلي ، إدواردو أ. (2014-04-17). "تعبير البروتين المؤتلف في الإشريكية القولونية: التقدم والتحديات" . الحدود في علم الأحياء الدقيقة . 5 : 172. دوى : 10.3389/fmicb.2014.00172 . بمك 4029002 . بميد 24860555 .  
  2. ↑ "المحفزات المستخدمة لتنظيم التعبير الجيني" . www.cambia.org . مؤرشف من الأصل بتاريخ 24 سبتمبر 2018. تم الاطلاع عليه بتاريخ 16 فبراير 2018 .
  3. ^ كامبل، نيل أ. وريس، جين ب. (2002). علم الأحياء (الطبعة السادسة ). سان فرانسيسكو: أديسون ويسلي. ص 375 – 401. ISBN   978-0-201-75054-6.
  4. 1 2 3 والتر، بيتر؛ ألبرتس، بروس؛ جونسون، ألكسندر س.؛ لويس، جوليان؛ راف، مارتن س.؛ روبرتس، كيث (2008). البيولوجيا الجزيئية للخلية (الطبعة الخامسة الموسعة ). نيويورك: جارلاند ساينس. ISBN  978-0-8153-4111-6.انظر أيضاً إلى الطبعة الرابعة .
  5. ↑ بيرغ، جيريمي مارك؛ تيموتشكو، جون ل.؛ ستراير، لوبيرت (2010). الكيمياء الحيوية ( الطبعة السابعة). دبليو إتش فريمان وشركاه. ISBN  978-1-4292-2936-4.انظر أيضاً إلى الطبعة الخامسة .
  6. 1 2 واتسون، جيمس د. (2007). الحمض النووي المؤتلف: الجينات والمجينات: دورة مختصرة . سان فرانسيسكو: دبليو إتش فريمان. ISBN 978-0-7167-2866-5.
  7. ↑ خهرا، نمرت؛ بادا، إندربير س.؛ زبير، محمد (2026)، "تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)" ، ستات بيرلز ، تريجر آيلاند (فلوريدا): ستات بيرلز للنشر، PMID 36943981 ، تاريخ الاسترجاع 15-06-2026 
  8. ↑ راسل، ديفيد دبليو؛ سامبروك، جوزيف (2001). الاستنساخ الجزيئي: دليل المختبر . كولد سبرينغ هاربور، نيويورك: مختبر كولد سبرينغ هاربور. ISBN 978-0-87969-576-7.
  9. ↑ أفيلان، لويزانا (21 مايو 2023). "تجميع أجزاء متعددة: تجميع جيبسون". طرق في البيولوجيا الجزيئية (كليفتون، نيوجيرسي) . 2633 : 45-53 . doi : 10.1007/978-1-0716-3004-4_4 . PMID 36853455 – عبر PubMed. 
  10. ↑ جيبسون، دانيال ج.؛ يونغ، لي؛ تشوانغ، راي-يوان؛ فينتر، ج. كريغ؛ هاتشيسون، كلايد أ.؛ سميث، هاميلتون أ. (مايو 2009). "التجميع الأنزيمي لجزيئات الحمض النووي DNA حتى عدة مئات من الكيلوبايتات". Nature Methods . 6 (5): 343–345 . doi : 10.1038/nmeth.1318 . ISSN 1548-7105 . PMID 19363495 .  
  11. ↑ هونغ، ووجين؛ ها، سيوكجون جي؛ كوون، هيونو سي؛ لي، سيونغ جاي في. (أغسطس 2025). " دليل موجز لاستنساخ الجينات" . الجزيئات والخلايا . 48 (8) 100234. doi : 10.1016/j.mocell.2025.100234 . ISSN 0219-1032 . PMC 12302143. PMID 40449799 .   
  12. ↑ إيبرلي، كريستيان (ديسمبر 2022). "تقنية الحمض النووي المؤتلف - الخطوات والأساليب والأمثلة" . إيفيتريا . تم الاطلاع عليه في 18 يوليو 2023 .
  13. ↑ هانيغ، ج.؛ ماكريدس، س. (1998). "استراتيجيات لتحسين التعبير عن البروتينات غير المتجانسة في الإشريكية القولونية". اتجاهات في التكنولوجيا الحيوية . 16 (2): 54-60 . doi : 10.1016/S0167-7799(97)01155-4 . PMID 9487731 . 
  14. ↑ محمودي جوماري، محمد؛ سرايجورد أفشاري، ندى؛ فارسيمادان، مرضية؛ رستمي، ندى؛ أغاميري، شاهين؛ فرج اللهية، محمد م. (1 ديسمبر 2020). "فرص وتحديات تقنيات تنقية البروتين بمساعدة الوسم: تطبيقات في صناعة الأدوية". Biotechnology Advances . 45 107653. doi : 10.1016/j.biotechadv.2020.107653 . PMID 33157154 . 
  15. ↑ برونديك، دبليو إتش (2009). "الفصل 11: اختيار الطريقة المناسبة للتعبير عن البروتين المؤتلف". دليل تنقية البروتين . طرق في علم الإنزيمات. المجلد 463 ( الطبعة الثانية). الصفحات 131-147 . doi : 10.1016/S0076-6879(09)63011-1 . ISBN    978-0-12-374536-1PMID 19892171​​ 
  16. ↑ أورتيغا، كلوديا؛ برييتو، دانيال؛ أبريو، سيسيليا؛ أوبيزو، بابلو خافيير؛ كوريا، أغوستين (2018). "مجموعة ناقلات متعددة الحجرات ومتعددة المضيفات للتعبير عن البروتينات المؤتلفة وتنقيها" . مجلة فرونتيرز إن مايكروبيولوجي . 9 1384. doi : 10.3389/fmicb.2018.01384 . PMC 6030378. PMID 29997597 .  
  17. 1 2 3 براون، تيري (2006). استنساخ الجينات وتحليل الحمض النووي: مقدمة . كامبريدج، ماساتشوستس: بلاكويل. ISBN 978-1-4051-1121-8.
  18. 1 2 يي، إكس.؛ البابلي، إس.؛ كلوتي، أ.؛ تشانغ، ج.؛ لوكا، ب.؛ باير، ب.؛ بوتريكوس، آي. (2000). "هندسة مسار التخليق الحيوي لبروفيتامين أ (بيتا كاروتين) في سويداء الأرز (الخالية من الكاروتينويد)". مجلة ساينس . 287 (5451): 303-305 . Bibcode : 2000Sci...287..303Y . doi : 10.1126/science.287.5451.303 . PMID 10634784 . 
  19. ↑ كولر، ب.هـ؛ سميثيز، أ. (1992). "تعديل الجينات في الحيوانات عن طريق استهداف الجينات". المراجعة السنوية لعلم المناعة . 10 : 705-730 . doi : 10.1146/annurev.iy.10.040192.003421 . PMID 1591000 . 
  20. ↑ أوكينيدي، بي تي (2011). "الكازينات". دليل بروتينات الطعام . ص 13-29 . doi : 10.1533/9780857093639.13 . ISBN  978-1-84569-758-7.
  21. ↑ فوغت، دونا يو؛ باريش، ميكي (2 يونيو 1999). التكنولوجيا الحيوية الغذائية في الولايات المتحدة: العلم، والتنظيم، والقضايا (تقرير). تقارير دائرة أبحاث الكونغرس. واشنطن العاصمة: مكتبة الكونغرس، دائرة أبحاث الكونغرس - عبر المكتبة الرقمية لجامعة شمال تكساس.
  22. ↑ غوالاندي-سينيوريني، أ.؛ جيورجي، ج. (2001). "تركيبات الأنسولين - مراجعة" (ملف PDF) . المجلة الأوروبية للعلوم الطبية والصيدلانية . 5 (3): 73-83 . PMID 12004916 . 
  23. ↑ "الأنسولين البشري" . بنك الأدوية . 19 سبتمبر 2025. تم الاطلاع عليه في 31 أكتوبر 2025 .
  24. ↑ ميلز، جوشوا (16 مايو 2022). "تقنية إعادة التركيب في بيولوجيا الخلايا الجذعية المكونة للدم: إنتاج الأنسولين" . إدزيون . تم الاطلاع عليه بتاريخ 26 ديسمبر 2022 .
  25. ↑ فون فانج، ت.؛ ماكديارميد، ت.؛ ماكلر، ل.؛ زولوتور، أ. (2008). "استفسارات سريرية: هل يمكن لهرمون النمو المُعاد تركيبه أن يعالج قصر القامة مجهول السبب بفعالية؟" ( ملف PDF) . مجلة طب الأسرة . 57 (9): 611-612 . PMID 18786336. Gale A185211006 .  
  26. ↑ فرنانديز، م.؛ هوزي، ر. (2009). "المنشطات الرياضية تُوقع غير الرياضيين في الفخ" ( ملف PDF) . مجلة طب الأسرة . 58 (1): 16-23 . PMID 19141266. Gale A197493722 .  
  27. ↑ "هرمون النمو" . بنك الأدوية . 5 أغسطس 2025. تم الاسترجاع في 10 ديسمبر 2023 .
  28. ↑ مانكو-جونسون، إم جيه (2010). "التطورات في رعاية وعلاج الأطفال المصابين بالهيموفيليا". مجلة طب الأطفال . 57 (1): 287-294 . doi : 10.1016/j.yapd.2010.08.007 . PMID 21056743 . 
  29. ↑ "معلومات عن لقاح التهاب الكبد ب من مؤسسة التهاب الكبد ب" . 28-06-2011. مؤرشف من الأصل في 28-06-2011 . تم الاطلاع عليه في 10-12-2023 .
  30. ↑ نارانج، آرتي (2022). "الأجسام المضادة المؤتلفة: المستوى التالي في تكنولوجيا الأجسام المضادة" . إيفيترا - .
  31. 1 2 باين، جيه إيه؛ شيبتون، سي إيه؛ تشاجار، إس؛ هاولز، آر إم؛ كينيدي، إم جيه؛ فيرنون، جي؛ رايت، إس واي؛ هينشليف، إي؛ آدامز، جيه إل؛ سيلفرستون، إيه إل؛ دريك، آر. (2005). "تحسين القيمة الغذائية للأرز الذهبي من خلال زيادة محتوى البروفيتامين أ". مجلة نيتشر للتكنولوجيا الحيوية . 23 (4): 482-487 . doi : 10.1038/nbt1082 . PMID 15793573 . 
  32. ↑ DHNS. "مجموعة أجنبية تدعم زراعة 'الأرز الذهبي' في الهند" . صحيفة ديكان هيرالد . تاريخ الاطلاع: 10 ديسمبر 2023 .
  33. ↑ "ماذا يعني حكم المحكمة الفلبينية بالنسبة للأرز الذهبي المعدل وراثيًا، الذي كان يُعتبر في السابق بمثابة تغيير جذري في النظام الغذائي" . مجلة ساينس .
  34. ↑ فونكه، ت.؛ هان، هـ.؛ هيلي-فريد، م.؛ فيشر، م.؛ شونبرون، إ. (2006). " الأساس الجزيئي لمقاومة محاصيل راوند أب ريدي لمبيدات الأعشاب" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم . 103 (35): 13010-13015 . Bibcode : 2006PNAS..10313010F . doi : 10.1073/pnas.0603638103 . PMC 1559744. PMID 16916934 .  
  35. ↑ مندلسون، م.؛ كوف، ج.؛ فايتوزيس، ز.؛ ماثيوز، ك. (2003). "هل محاصيل Bt آمنة؟" . مجلة Nature Biotechnology . 21 (9): 1003-1009 . doi : 10.1038/nbt0903-1003 . PMID 12949561 . 
  36. ↑ لير، ج. (1978). الحمض النووي المؤتلف: القصة غير المروية . نيويورك: دار نشر كراون. ص 43.
  37. جاكسون ، د .؛ سيمونز، ر.؛ بيرغ، ب. (1972). "طريقة كيميائية حيوية لإدخال معلومات وراثية جديدة في الحمض النووي لفيروس SV40: جزيئات دائرية من الحمض النووي SV40 تحتوي على جينات عاثية لامدا وأوبيرون الجالاكتوز من الإشريكية القولونية" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 69 (10): 2904-2909 . Bibcode : 1972PNAS...69.2904J . doi : 10.1073/pnas.69.10.2904 . PMC 389671. PMID 4342968 .  
  38. ↑ ميرتز، جيه إي؛ ديفيس، آر دبليو (1972). "يؤدي قطع الحمض النووي بواسطة إنزيم التقييد R1 إلى تكوين نهايات متماسكة" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 69 (11): 3370-3374 . Bibcode : 1972PNAS...69.3370M . doi : 10.1073/pnas.69.11.3370 . PMC 389773. PMID 4343968 .  
  39. ↑ لوبان، ب.؛ كايزر، أ. (1973). "الربط الإنزيمي لجزيئات الحمض النووي من طرف إلى طرف". مجلة البيولوجيا الجزيئية . 78 (3): 453-471 . doi : 10.1016/0022-2836(73)90468-3 . PMID 4754844 . 
  40. ↑ كوهين، س.؛ تشانغ، أ.؛ بوير، هـ.؛ هيلينغ، ر. (1973). "بناء بلازميدات بكتيرية وظيفية بيولوجيًا في المختبر" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 70 (11): 3240-3244 . Bibcode : 1973PNAS...70.3240C . doi : 10.1073/pnas.70.11.3240 . PMC 427208. PMID 4594039 .  
  41. ↑ "عملية إنتاج الكيميرات الجزيئية ذات الوظائف البيولوجية" ، تم استرجاعها من براءة اختراع جوجل
  42. ↑ هيوز، س. (2001). "جني الأموال من الحمض النووي: أول براءة اختراع رئيسية في مجال التكنولوجيا الحيوية وتسويق البيولوجيا الجزيئية، 1974-1980". مجلة إيزيس؛ مجلة دولية مخصصة لتاريخ العلوم وتأثيراتها الثقافية . 92 (3): 541-575 . doi : 10.1086/385281 . hdl : 10161/8125 . PMID 11810894 . 
  43. ↑ جونسون، آي إس (1983). "الأنسولين البشري بتقنية الحمض النووي المؤتلف". مجلة ساينس . 219 (4585): 632-637 . Bibcode : 1983Sci...219..632J . doi : 10.1126/science.6337396 . PMID 6337396 . 
  44. ↑ وانغ، شينغ؛ هنتر، آلان ك.؛ موزير، نيد م. (15 يونيو 2009). "بروتينات الخلية المضيفة في تطوير المنتجات البيولوجية: تحديدها، وقياسها الكمي، وتقييم المخاطر" . التكنولوجيا الحيوية والهندسة الحيوية . 103 (3): 446-458 . Bibcode : 2009BiotB.103..446W . doi : 10.1002/bit.22304 . PMID 19388135 . 
  45. ↑ براسويل، دانيال ج.؛ فرانسيس، ريتشارد؛ سميلز، سي. مارك (سبتمبر 2015). "مستقبل تحديد بروتينات الخلية المضيفة (HCP) أثناء تطوير العمليات والتصنيع، والمرتبط بإدارة قائمة على المخاطر للتحكم بها" . التكنولوجيا الحيوية والهندسة الحيوية . 112 (9): 1727-1737 . Bibcode : 2015BiotB.112.1727B . doi : 10.1002/bit.25628 . PMC 4973824. PMID 25998019 .  

للمزيد من القراءة